對細胞活力的影響：一些研究表明，在陽離子脂質體LipofectamineTM2000介導下雞TRPV6基因RNA干擾（RNAi）質粒轉染入成骨細胞的實驗中，當轉染前細胞融合達到90％以上，質粒DNA與脂質體比例為1:2.5時轉染效率比較高，并且在轉染后48h轉染效果比較好，對細胞的毒性作用較小3。在人肝瘤兩種細胞模型中，通過比較LipofectamineRnaimax和Genmute轉染劑發現，用基因***的細胞呈現熒光陰性對照siRNA的更高攝取，并且觀察到與基因轉染的細胞相對于脂質積rnaimax的細胞具有較高的活力6。有研究使用兩種常見的RNA干擾（RNAi）轉染試劑DharmaFE...

考慮細胞毒性低細胞毒性的轉染試劑對于保持細胞的活性和正常生理功能至關重要。評估細胞活力：可以通過檢測細胞的存活率、增殖能力等指標來評估轉染試劑的細胞毒性。在研究不同轉染試劑對C2C12細胞的轉染效率時，通過優化DNA:轉染劑比例和細胞密度，使所有試劑在達到較高轉染效率的同時，對細胞生長和活力的影響有限6。在比較不同轉染試劑遞送siRNA的攝取、敲低效率和毒性情況的研究中，新開發的CALNPRNAi轉染試劑轉染效率***高于傳統轉染試劑，同時毒性比較低7。選擇溫和的試劑：一些轉染試劑可能對細胞的毒性較小，例如基于脂質的轉染試劑通常比基于病毒的轉染試劑更溫和。在顱內遞送合成mRNA的研究中，使用常...

考慮多因子轉染能力如果實驗需要同時轉染多個RNA分子或進行共轉染實驗，那么選擇具有多因子轉染能力的試劑是重要的。共轉染效果：一些轉染試劑可以有效地實現多個RNA分子的共轉染，而另一些試劑可能在共轉染方面效果不佳。在脂質體方法用于modRNA轉染各種類型細胞的初步研究中，MessageMax能將modGFP高效轉染入多種細胞中，并實現modGFP和modmCherry在MEF細胞中的共轉及核內因子nGFP和mTBX5在MEF細胞核中的定位5。選擇適合多因子轉染的試劑：根據實驗需求，選擇能夠滿足多因子轉染要求的轉染試劑。例如，如果實驗需要同時轉染多個基因或進行基因編輯實驗，那么選擇具有多因子轉染能...

準確控制脂質體與核酸的比例是關鍵。通過實驗確定比較好的脂質體 - 核酸復合物比例，一般可以進行梯度實驗，從較低比例開始逐步增加，觀察轉染效率的變化。例如，不同類型的細胞對脂質體和 RNA 或 DNA 的比例要求不同，像在轉染 HEK293 細胞時，可能 1:3（脂質體：核酸）的比例比較合適，而對于較難轉染的原代細胞，可能需要適當增加脂質體的用量。 不同配方的脂質體在轉染效率上有差異。根據細胞類型和實驗目的選擇合適的脂質體試劑。例如，一些脂質體含有特殊的功能成分，如靶向基團可以增強與特定細胞的結合，或者具有促進內吞體逃逸的成分，從而提高轉染效率。新型的脂質體制劑不斷涌現，如含有可電離陽...

對于容易轉染的貼壁細胞如人胚腎細胞（HEK293）和人宮頸*細胞（HeLa），脂質體轉染效率相對較高。這些細胞具有較強的內吞能力，能夠有效地攝取脂質體-核酸復合物。例如，在標準的轉染條件下，HEK293細胞的轉染效率可以達到50%-70%。而對于一些難轉染的貼壁細胞，如原代肝細胞和某些神經細胞，其轉染效率較低。這是因為它們的細胞膜結構比較復雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細胞間連接，阻礙了脂質體-核酸復合物的進入。例如，原代肝細胞的轉染效率可能只有10%-20%。 一般來說，貼壁細胞對脂質體的耐受性相對較好。但是，在高濃度脂質體轉染的情況下，即使是耐受性好的細胞也會受到影響。例如，H...

納米顆粒遞送藥物并發揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細胞攝取的機制。以蒲公英湯劑體為例，研究發現親溶酶體物質能***抑制蒲公英湯劑體進入細胞；巨胞飲抑制劑細胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內攝入，且呈現劑量依賴性，敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進入細胞。這些結果提示蒲公英湯劑體通過內吞進入A549細胞且主要由巨胞飲介導26。同理，RNA轉染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進入細胞。電穿孔轉染中的內吞途徑電穿孔轉染是一種用于基因遞送的技術，在研究其機制時發現，用冰冷介質處理或在電穿孔轉染前使用內吞抑制劑處理三種不同的人類細胞系（HEK293、HCT116和HT29）...

核細胞、關節軟骨細胞、間充質干細胞（MSCs）：選擇兩種合成轉染試劑（陽離子脂質商業試劑LipofectamineRNAiMAX和聚乙烯亞胺（PEI））以及兩種天然衍生轉染試劑（多糖殼聚糖（98%脫乙酰化）和透明質酸（20%酰胺化）），用于將siRNA遞送到包括髓核細胞、關節軟骨細胞和間充質干細胞在內的原代間充質細胞中。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（***DH）作為內源性模型基因，在轉染后第3天和第6天評估由20nM或200nMsiRNA引起的沉默程度。除了沉默效率外，還評估了細胞毒性、DNA含量變化和細胞分化潛能等非特異性影響。在四種轉染試劑中，基于商業脂質體的試劑在20nMsiRN...

RNA轉染試劑在不同細胞類型中的轉染機制存在多種差異。以下將詳細闡述不同RNA轉染試劑在不同細胞類型中轉染機制的差異表現。脂質體轉染試劑：機制概述：脂質體轉染試劑通常由陽離子脂質和中性脂質組成，其轉染機制主要是通過與帶負電的RNA分子結合，形成脂質體-RNA復合物。這個復合物能夠與細胞膜相互作用，通過內吞作用或膜融合等方式進入細胞。進入細胞后，脂質體-RNA復合物逐漸釋放RNA分子，使其能夠在細胞內發揮作用。在不同細胞類型中的表現：在腎*細胞系786-O和ACHN中，目前雖未明確提及脂質體轉染試劑的作用，但可以推測其可能通過類似的機制進入細胞，影響細胞內的基因表達和細胞生長。例如，微小RNA-...

RNA電穿孔高效轉染原代淋巴細胞：使用體外轉錄的mRNA通過電穿孔可以實現高基因轉染效率和低轉染相關毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。五、優化共轉染方法整合共轉染和平行共轉染：研究不同的共轉染和連續轉染方法，特別是體外轉錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預混合的IVTmRNAs（整合共轉染）和同時用單獨形成的納米載體轉染細胞（...

動物視網膜成像技術為基礎研究提供了有力工具。從小鼠視網膜多種成像方式探討眼科光學成像技術進展：張鵬飛、張廷瑋、宋維業闡述了近年來在小鼠和人眼視網膜高精度光學成像領域出現的技術突破6。幾種在人眼視網膜成像中廣泛應用的光學成像技術在動物視網膜中得到了成功應用，實現了對動物視網膜的高精度細胞級別成像，為科研工作者提供了有力工具。同時，動物視網膜的研究工作也開發了一些新型成像技術或增強了對人眼視網膜功能機理的理解。綜上所述，動物成像技術在磁共振成像、熱成像、X射線發光成像、近紅外高光譜成像、非人靈長類動物超高場磁共振腦成像、新型動物搖籃的小動物多重成像、紅外成像以及動物視網膜成像等方面都取得了***的...

三、脂質體組成對轉染效率的影響不同脂質組成的影響：研究發現脂質體的組成對不同類型細胞的轉染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質體配方對不同細胞系的轉染效率不同。Huh7和AGS細胞的比較好脂質體組成是T1P0和T3P1；COS7細胞是T3P1和T1P1；A549細胞是T1P1和T1P36。脂質體結構的影響：脂質體復合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結構變為倒六角形結構，但在所有使用的細胞系中，特定結構在轉染效率上沒有明確的優勢6。四、其他因素的影響血清的影響：對于某些細胞，血清的存在會影響轉染效率。如Siha細胞在無血清培養基中培養時轉染效率更高，而在Caco-2...

靶向特定基因座提高穩定轉染效率：在布魯氏錐蟲中，利用RNAi的構建體和（GFP）標記的蛋白的表達，靶向（hyg）標記的核糖體RNA（RRNA）基因座，可以規避位置效應并提高靶向效率。該系統還利用新的誘導型RRNA啟動子來驅動T7RNA聚合酶（T7RNAP）轉錄，然后從誘導型T7啟動子驅動表達，可減輕當前表達系統的一些問題9。綜上所述，提高RNA轉染效率的策略包括選擇合適的轉染試劑、利用魚精蛋白、優化電轉方法、采用RNA電穿孔、優化共轉染方法以及靶向特定基因座等。這些策略可以根據不同的實驗需求和細胞類型進行選擇和組合，以提高RNA轉染效率，為RNA研究和應用提供有力支持。核酸與轉染試劑的比例對轉...

其他轉染試劑：機制概述：例如CALNPRNAi轉染試劑，其轉染機制可能與傳統轉染試劑不同。該試劑轉染效率***高于傳統轉染試劑，同時毒性比較低。其具體轉染機制可能涉及對RNA的攝取、細胞利用率及細胞毒性的綜合作用。在不同細胞類型中的表現：目前文獻中未明確提及CALNPRNAi轉染試劑在特定細胞類型中的具體表現，但研究表明該試劑為難轉染細胞的RNA干擾帶來了新的選擇7。綜上所述，不同RNA轉染試劑在不同細胞類型中的轉染機制存在差異，這些差異主要表現在與RNA的結合方式、進入細胞的途徑以及在細胞內的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對于選擇合適的轉染試劑進行特定細胞類型的RNA轉染實驗具有重要意義...

對細胞活力的影響：一些研究表明，在陽離子脂質體LipofectamineTM2000介導下雞TRPV6基因RNA干擾（RNAi）質粒轉染入成骨細胞的實驗中，當轉染前細胞融合達到90％以上，質粒DNA與脂質體比例為1:2.5時轉染效率比較高，并且在轉染后48h轉染效果比較好，對細胞的毒性作用較小3。在人肝瘤兩種細胞模型中，通過比較LipofectamineRnaimax和Genmute轉染劑發現，用基因***的細胞呈現熒光陰性對照siRNA的更高攝取，并且觀察到與基因轉染的細胞相對于脂質積rnaimax的細胞具有較高的活力6。有研究使用兩種常見的RNA干擾（RNAi）轉染試劑DharmaFE...

RNA電穿孔高效轉染原代淋巴細胞：使用體外轉錄的mRNA通過電穿孔可以實現高基因轉染效率和低轉染相關毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。五、優化共轉染方法整合共轉染和平行共轉染：研究不同的共轉染和連續轉染方法，特別是體外轉錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預混合的IVTmRNAs（整合共轉染）和同時用單獨形成的納米載體轉染細胞（...

納米顆粒遞送藥物并發揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細胞攝取的機制。以蒲公英湯劑體為例，研究發現親溶酶體物質能***抑制蒲公英湯劑體進入細胞；巨胞飲抑制劑細胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內攝入，且呈現劑量依賴性，敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進入細胞。這些結果提示蒲公英湯劑體通過內吞進入A549細胞且主要由巨胞飲介導26。同理，RNA轉染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進入細胞。電穿孔轉染中的內吞途徑電穿孔轉染是一種用于基因遞送的技術，在研究其機制時發現，用冰冷介質處理或在電穿孔轉染前使用內吞抑制劑處理三種不同的人類細胞系（HEK293、HCT116和HT29）...

在人類多能干細胞衍生的心肌細胞（HPSC-CMs）中的應用低轉染效率是實現HPSC-CMs在疾病建模和心臟修復研究中廣泛應用的障礙。通過優化四個基本參數，即血清補充劑、復制和轉染之間的時間、試劑與DNA比以及細胞密度，使用Promega的Viafect?轉染試劑能夠將HPSC-CMs轉染至約95%的效率28。盡管活力有所降低，但轉染后的HPSC-CMs仍保持了高純度和結構完整性，確保了至少14天的轉染基因持續表達，為心臟相關疾病的研究開辟了新機遇。在C2C12細胞中的應用C2C12細胞在肌肉領域***使用，但它們和原代成肌細胞一樣難以轉染，影響了下游實驗。雖然自2015年以來超過95%的使用C...

轉染時間：轉染時間的長短也會影響轉染效率。過長或過短的轉染時間都可能導致轉染效率降低。在陽離子脂質體Lipofectamine2000對PC12細胞的轉染實驗中，轉染時間為6h時轉染效率較高3。在優化宮頸*細胞系轉染效率的實驗中，Hela細胞系和Siha細胞系的比較好轉染時間為24小時1。細胞接種密度：細胞接種密度也會影響轉染效率。過高或過低的細胞接種密度都可能導致轉染效率降低。在脂質體介導法轉染腫瘤細胞效率的優化實驗中，2×105接種密度時轉染效率比較高9。在優化宮頸*細胞系轉染效率的實驗中，Hela細胞系和Siha細胞系的比較好接種密度分別為1.5×104（每孔24孔板）1。血清的有無：血...

陽離子聚合物作為轉染試劑結合機制：以陽離子聚合物EZTransCellReagent為例，在優化RNA干擾（RNAi）條件的研究中發現，陽離子聚合物通過與RNA分子結合來實現轉染14。例如，設計針對GFP的shRNA，使用EZ轉染試劑將其轉染到細胞中，shRNA***降低了GFP的表達。預稀釋的轉染試劑在室溫下以及小核酸的存在可增加轉染效率，且在24小時時達到峰值。與環狀核酸相比，線性核酸與陽離子聚合物結合時顯示出更高的轉染效率和更高的基因組整合率。作用特點：陽離子聚合物介導的RNAi條件優化后，為未來的RNAi研究提供了有用的數據。影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的...

在核酸遞送中的應用核酸***可以通過基因增強、基因抑制和基因組編輯實現持久甚至***的效果。然而，裸核酸分子難以進入細胞，陽離子聚合物作為非病毒核酸遞送系統，其分子上帶有正電荷基團，可濃縮核酸分子形成納米顆粒，幫助核酸跨越屏障在細胞中表達蛋白質或抑制目標基因表達。陽離子聚合物易于合成、修飾和結構控制，是一類有前途的核酸遞送系統7。在顱內遞送合成mRNA中的應用在本研究中，使用常用的轉染試劑建立了顱內遞送合成mRNA的小鼠模型。將合成的熒光素酶mRNAs用兩種不同的轉染試劑包裹后定點微注射到大腦中，通過小動物成像系統監測遞送的mRNA的表達狀態，并通過行為和血液生化測量評估可能的試劑誘導的生物毒...

原代細胞和干細胞的轉染效率通常較低。原代細胞剛剛從組織中分離出來，還保留著體內復雜的生理特性，其細胞膜上的受體和內吞機制等可能不適應脂質體轉染。例如，原代間充質干細胞的轉染效率可能低于10%。干細胞由于其特殊的自我更新和分化潛能，其細胞內部的信號通路和膜運輸機制對脂質體轉染比較敏感，轉染效率也不高。而且在轉染過程中，還需要考慮不影響干細胞的干性，這也增加了轉染的難度。 原代細胞和干細胞對脂質體的毒性反應比較敏感。脂質體可能會干擾它們的正常生理功能，如影響干細胞的自我更新和分化能力。對于原代細胞，可能會改變其原有的表型或者***細胞的應激反應，導致細胞提前衰老或者死亡。 基因注射包括通...

對于容易轉染的貼壁細胞如人胚腎細胞（HEK293）和人宮頸*細胞（HeLa），脂質體轉染效率相對較高。這些細胞具有較強的內吞能力，能夠有效地攝取脂質體-核酸復合物。例如，在標準的轉染條件下，HEK293細胞的轉染效率可以達到50%-70%。而對于一些難轉染的貼壁細胞，如原代肝細胞和某些神經細胞，其轉染效率較低。這是因為它們的細胞膜結構比較復雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細胞間連接，阻礙了脂質體-核酸復合物的進入。例如，原代肝細胞的轉染效率可能只有10%-20%。 一般來說，貼壁細胞對脂質體的耐受性相對較好。但是，在高濃度脂質體轉染的情況下，即使是耐受性好的細胞也會受到影響。例如，H...

其他轉染試劑：機制概述：例如CALNPRNAi轉染試劑，其轉染機制可能與傳統轉染試劑不同。該試劑轉染效率***高于傳統轉染試劑，同時毒性比較低。其具體轉染機制可能涉及對RNA的攝取、細胞利用率及細胞毒性的綜合作用。在不同細胞類型中的表現：目前文獻中未明確提及CALNPRNAi轉染試劑在特定細胞類型中的具體表現，但研究表明該試劑為難轉染細胞的RNA干擾帶來了新的選擇7。綜上所述，不同RNA轉染試劑在不同細胞類型中的轉染機制存在差異，這些差異主要表現在與RNA的結合方式、進入細胞的途徑以及在細胞內的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對于選擇合適的轉染試劑進行特定細胞類型的RNA轉染實驗具有重要意義...

轉染時間對奶牛子宮內膜原代上皮細胞轉染的影響：在奶牛子宮內膜原代上皮細胞中，應用帶有FAM標記的miRNA-185mimics為報告基因，檢測兩種不同轉染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細胞接種不同時間后的轉染效率33。結果顯示，無論使用哪種轉染試劑，12h的轉染效率均極***高于18、24h，LipofectamineRNAiMAX各時間點的轉染效率均極***高于Lipofectamine2000。并且，使用LipofectamineRNAiMAX作為轉染試劑時，12h的熒光強度也比較高。這說明在奶牛子宮內膜原代上皮細胞中，選擇合適的轉染...

對細胞周期的影響：在微小RNA-1180轉染腎*細胞的實驗中，FCM結果顯示，轉染miR-1180后，位于G0/G1期的細胞比例明顯增大，而位于S期和G2/M期的細胞比例明顯下降，表明細胞周期被阻滯在G0/G1期1。對轉染效率的影響：在脂質體介導RNA干擾質粒轉染雞成骨細胞條件的優化實驗中，對轉染前細胞融合度、質粒質量與脂質體體積比及轉染時間進行優化，在熒光倒置顯微鏡下觀察并計算轉染效率。結果表明，在轉染前細胞融合達到90％以上，質粒DNA與脂質體比例為1:2.5時轉染效率比較高，并且在轉染后48h轉染效果比較好3。在篩選更優的脂質體轉染試劑的實驗中，分別用RNAiMax及MessageM...

三、脂質體組成對轉染效率的影響不同脂質組成的影響：研究發現脂質體的組成對不同類型細胞的轉染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質體配方對不同細胞系的轉染效率不同。Huh7和AGS細胞的比較好脂質體組成是T1P0和T3P1；COS7細胞是T3P1和T1P1；A549細胞是T1P1和T1P36。脂質體結構的影響：脂質體復合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結構變為倒六角形結構，但在所有使用的細胞系中，特定結構在轉染效率上沒有明確的優勢6。四、其他因素的影響血清的影響：對于某些細胞，血清的存在會影響轉染效率。如Siha細胞在無血清培養基中培養時轉染效率更高，而在Caco-2...

三、脂質體組成對轉染效率的影響不同脂質組成的影響：研究發現脂質體的組成對不同類型細胞的轉染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質體配方對不同細胞系的轉染效率不同。Huh7和AGS細胞的比較好脂質體組成是T1P0和T3P1；COS7細胞是T3P1和T1P1；A549細胞是T1P1和T1P36。脂質體結構的影響：脂質體復合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結構變為倒六角形結構，但在所有使用的細胞系中，特定結構在轉染效率上沒有明確的優勢6。四、其他因素的影響血清的影響：對于某些細胞，血清的存在會影響轉染效率。如Siha細胞在無血清培養基中培養時轉染效率更高，而在Caco-2...

對于容易轉染的貼壁細胞如人胚腎細胞（HEK293）和人宮頸*細胞（HeLa），脂質體轉染效率相對較高。這些細胞具有較強的內吞能力，能夠有效地攝取脂質體-核酸復合物。例如，在標準的轉染條件下，HEK293細胞的轉染效率可以達到50%-70%。而對于一些難轉染的貼壁細胞，如原代肝細胞和某些神經細胞，其轉染效率較低。這是因為它們的細胞膜結構比較復雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細胞間連接，阻礙了脂質體-核酸復合物的進入。例如，原代肝細胞的轉染效率可能只有10%-20%。 一般來說，貼壁細胞對脂質體的耐受性相對較好。但是，在高濃度脂質體轉染的情況下，即使是耐受性好的細胞也會受到影響。例如，H...

RNA電穿孔高效轉染原代淋巴細胞：使用體外轉錄的mRNA通過電穿孔可以實現高基因轉染效率和低轉染相關毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。五、優化共轉染方法整合共轉染和平行共轉染：研究不同的共轉染和連續轉染方法，特別是體外轉錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預混合的IVTmRNAs（整合共轉染）和同時用單獨形成的納米載體轉染細胞（...

選擇合適的轉染試劑GenMute試劑在人肝*細胞模型中的應用：在人肝*細胞HepG2和Huh7.5中，研究對比了脂質體類的Lipofectamine?RNAiMAX和HepG2特異性的聚合物類GenMute?兩種轉染試劑30。通過細胞成像分析發現，GenMute處理的細胞對熒光標記的陰性對照siRNA的攝取高于LipofectamineRNAiMAX轉染的細胞。并且，MTT實驗表明，GenMute轉染的細胞比LipofectamineRNAiMAX處理的細胞具有更高的存活率。這提示在人肝*細胞模型中，GenMute試劑可能是更適合的轉染試劑，在提高轉染效率的同時降低了細胞死亡。siRNA共軛殼...