攜帶要轉染的特定核酸的載體構建可以進一步分為病毒載體或質粒載體。病毒和質粒通過存在合適的真核啟動子促進外源轉基因的表達。病毒載體可能在宿主細胞中觸發免疫原性反應，而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機制來促進靶向核酸或載體結構轉移到宿主細胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用遞送載體，可能是脂質載體或非脂質載體，以幫助增強載體載體復合物與宿主細胞膜之間的接觸，從而促進復合物進入細胞。設計和啟動轉染試驗可能具有挑戰性，特別是可供選擇的轉染方法或策略種類繁多的情況下。Severino et al.進行的研究也指出了陽離子脂質作為基因遞送納米載體的潛在毒性。廣西轉染試劑好用**近的研究...

共轉染是將一種以上類型的核酸引入真核細胞的過程。組合的一些例子包括多個質粒DNA ,siRNA和質粒DNA ，以及多個miRNAs進入同一個細胞。通常，多質粒DNA共轉染的目的是將一種以上的外源基因導入宿主細胞。其應用之一是生產由幾種質粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個例子是在HEK293細胞系中，用轉移、包膜和包裝載體等幾種質粒載體生成慢病毒。此外，多個質粒DNA的共轉染也可以應用于蛋白質-蛋白質相互作用(PPI)研究，以研究一種蛋白質與另一種蛋白質之間的關系。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質體囊泡中的技術，開發出了Gemate系列轉染試劑。四川合肥轉染試劑**近一項與抗血...

除了mRNA疫苗，DNA疫苗也是不錯的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下，研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進了PG和PAMAM G4復合物的大小、運動性和表面電荷，然后在BALB/c小鼠中測試疫苗設計的免疫原性。根據研究結果，由于同時包裝在PG和PAMAM G4包膜中，DNA疫苗的免疫原性增加。在給予PG包被的DNA疫苗復合物的小鼠中，觀察到**強的t細胞反應，并且這些反應明顯高于給予裸DNA組合和PAMAM 4G包被的DNA組合的動物組。Severino et al.進行的研究也指出了陽離子脂質作為基因...

核酸與轉染試劑的比例對轉染效率也有影響。在一項涉及原代人成肌細胞的研究中，使用不同的核酸比例來比較轉染效率的影響，轉染試劑包括FuGENE6、Effectene和ExGen500(一種基于pei的試劑)。該研究的一個***發現是，轉染效率可能不一定與所用試劑的體積直接相關。例如，2μgDNA與5μLFuGENE6試劑的比例被證明可以產生比較好的轉染效率，而更低或更高的DNA與試劑的比例并不能提高效率。在另一項涉及轉染人胃腺*細胞系的研究中也觀察到類似的發現，即在一系列組合中使用比較高轉染試劑與DNA比體積測試時，轉染效率并未達到比較好。使用不成比例的高轉染試劑量會導致不必要的細胞毒性，從而降低...

轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。在過去的30年里，轉染因其廣泛應用于研究疾病的細胞過程和分子機制而越來越受歡迎。了解疾病的分子途徑，可以發現可能用于疾病診斷和預后的特定生物標志物。此外，轉染可以作為基因***中的策略之一，用于***無法***的遺傳性遺傳病。***，生命科學技術的進步允許將不同類型的核酸轉染到哺乳動物細胞中，這些核酸包括脫氧核糖核酸(DNA)，核糖核酸(RNA)以及小的非編碼RNA，如siRNA,shRNA和miRNA。通常轉染可分為穩定轉染和瞬時轉染兩種類型。穩定轉染是指通過將外源DNA整合到宿主核基因組中，或在宿主核中作為染色體外元件維持一個...

基因***是陽離子聚合物作為轉染劑的主要應用。通過攜帶質粒DNA、mRNA和siRNA，陽離子聚合物實現了與***相關的功能，如基因增強、基因抑制和基因組編輯。基因*****直接、或許也是**簡單的策略是添加新的蛋白質編碼基因。在當前**背景下，mRNA疫苗的大規模使用點燃了人們對核酸藥物的濃厚興趣。理論上，mRNA能夠表達任何一種蛋白質;因此，除了作為疫苗預防傳染病外，它還可以用于***其他疾病。目前的mRNA傳遞技術是基于脂質納米顆粒平臺，該技術的**掌握在少數幾家公司手中。此外，由脂質納米顆粒組成的mRNA疫苗應在**溫下儲存和運輸，這嚴重限制了疫苗在高溫或條件有限的地區的使用。因此，陽...

化學轉染的效率在很大程度上取決于幾個因素，如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質，以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸，并將其靶標傳遞給非分裂細胞和分裂細胞，因此在基因***中非常有用。有幾個因素已被證明可能影響病毒轉導的效率，如靶細胞類型、使用的啟動子類型、載體濃度和使用的轉導介質條件。在一項評估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進行基因轉導的體外研究中，觀察到這兩種病毒在來自人類、倉鼠、貓、狗、馬和豬的不同細胞系上的不同程度的效率。在大多數細胞類型上，使用HIV的轉導效率普遍優于EIAV，而這兩種病毒對嚙齒動物細胞的***性較弱。在...

作為一般指導原則，建議使用早期傳代的細胞以獲得良好的轉染效率，特別是涉及原代或干細胞的轉染。另一個有趣的觀察結果是，37℃是可以幫助原代細胞達到更高轉染效率的比較好培養溫度。這種現象可能是因為37攝氏度是哺乳動物細胞的比較好培養溫度。同時，在轉染原代細胞時，化學轉染似乎不如病毒和物理轉染有吸引力，尤其是在人類原代干細胞中。當在相似條件下使用相同的轉染試劑進行轉染時，細胞系的來源(如人類與動物細胞系)也可能有助于不同程度的效率。在一項涉及轉染人類和大鼠平滑肌細胞的研究中，大多數轉染試劑在轉染大鼠平滑肌細胞(α-10SMCs)方面的效率高于轉染人主動脈平滑肌細胞(HASMCs)。在聚葡萄糖、精胺(...

人類原代干細胞是另一種公認的難以轉染的細胞類型，轉染這種細胞類型的比較大挑戰仍然是效率低和細胞活力低。2015年，王等報道了Lipofectamine 2000和XtremeGENE HP等轉染試劑在人牙周韌帶干細胞中的轉染效率非常低(<6%)，而陽性對照慢病毒載體的轉染效率約為95%。與同一研究中采用的磁輔助轉染技術相比，后者表現出更高的轉染效率(～11%)和更低的毒性。在另一項涉及人骨髓間充質干細胞(hBM-MSC)的研究中，Lipofectamine LTX被證明比TransIT-2020、Lipofectamine 3000和聚乙烯亞胺(PEI)等其他試劑產生比較好的轉染效率(至少高出...

影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。例如，電穿孔技術依賴于電場來增加宿主細胞膜的通透性，以內化外來核酸。因此，電穿孔過程中的電壓和持續時間是決定電穿孔成功與否的重要因素。施加高壓的長時間電穿孔可能會導致細胞損傷并降低轉染效率。通過增加電脈沖的數量也可以提高電轉染效率，但這可能會降低細胞活力。另一方面，電轉染效率取決于所使用的細胞類型，每當要電轉染一種新的細胞類型時，應優化電穿孔條件。一些細胞如T淋巴細胞，即使在標準的電穿孔條件下也可能轉染不良，而電轉染成纖維細胞通常可以產生良好的轉染結果。電穿孔緩沖液的組成是影響轉染效率的另一個關鍵參數。據報道，電穿孔緩沖液中...

在轉染實驗中使用對照對于確定所使用的轉染試劑和核酸的效果和效率至關重要。通常，質粒轉染和寡核苷酸轉染實驗都需要陽性對照、陰性對照、未轉染對照和模擬轉染對照。陽性對照是先前已被證明對轉染實驗產生已知影響的DNA或RNA，例如影響特定下游遺傳靶點的表達。在轉染工作的初始階段，需要一個陽性對照來建立一個優化的轉染方案，之后，陽性對照可以作為參考，與實驗組進行比較。另一方面，陰性對照用于確認宿主細胞中預期的基因表達變化是否歸因于轉染而不是其他原因。在質粒DNA轉染中，陰性對照可以是缺乏DNA和轉染載體的反應，或者兩者都沒有，只有宿主細胞。在小RNA轉染中，陰性對照包含一個非同源序列，該序列通常是一個與...

**近一項與抗血管生成基因傳遞高度相關的發現是，陽離子脂質體（CLs）選擇性地靶向**的血管系統。陰離子或電中性脂質體沒有發現這種作用。Campbell和他的同事[95]發現，與電中性脂質體相比，使用CLs在**血管內皮細胞(VECs)中積累更多，CLs通過添加5mol%聚乙二醇來穩定。在兩種人類**類型(LS174T和MCAIV)和兩個位置(顱窗和背側皮膚褶腔)中發現了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的，這可能與該技術是否足以根除足夠數量的**VECs以實現**消退反應有關。有趣的是，注射后24小時，脂質體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。PLL(聚L -賴...

隨著寡核苷酸生物合成產業的發展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉染的效率。其中一種是通過化學修飾來提高其與靶標和阻斷外切酶活性的結合親和力的agomirs和antagomirs。agomir是一種人工修飾的雙鏈miRNA模擬物，旨在發揮比傳統miRNA模擬物更高的靶標抑制活性(krtzfeldt另一方面，antagomir是一種專門設計的單鏈miRNA類似物，旨在抑制特定的miRNA。agomir和antagomir都被認為更穩定、更有效、更特異，而且與正常的模擬物或拮抗劑相比，對宿主細胞膜具有更高的結合親和力。鎖定核酸(LNA)是另一種修飾的寡核苷酸，其至少一個核...

轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。在過去的30年里，轉染因其廣泛應用于研究疾病的細胞過程和分子機制而越來越受歡迎。了解疾病的分子途徑，可以發現可能用于疾病診斷和預后的特定生物標志物。此外，轉染可以作為基因***中的策略之一，用于***無法***的遺傳性遺傳病。***，生命科學技術的進步允許將不同類型的核酸轉染到哺乳動物細胞中，這些核酸包括脫氧核糖核酸(DNA)，核糖核酸(RNA)以及小的非編碼RNA，如siRNA,shRNA和miRNA。通常轉染可分為穩定轉染和瞬時轉染兩種類型。穩定轉染是指通過將外源DNA整合到宿主核基因組中，或在宿主核中作為染色體外元件維持一個...

小RNA和質粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。這可以通過引入含有熒光素酶報告基因的質粒來實現，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識別，然后允許小RNA結合以抑制熒光素酶的表達。另一方面，在RNA干擾(RNAi)研究中，小RNA和質粒DNA的共轉染也是必不可少的，以確定siRNA等特定小RNA對宿主細胞中特定基因表達的調節作用。小的非編碼RNA，如siRNA，以其表觀遺傳調控能力而聞名，更具體地說，是轉錄后對特定基因表達的調控。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報告系統相關的特定基因的質粒DNA可以同時共轉染到靶細胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達將導致熒光素酶活性**...

在一項將質粒DNA轉染到HUVEC中的研究中，使用包括Effectene和FuGENE 6在內的非脂質體試劑比脂質體試劑DOTAP(18%)產生了更好的轉染效率(34%和33%)。在另一項用質粒DNA轉染HUVEC的研究中，與Effectene和FuGENE 6或HD等非脂質體試劑(48小時時均<20%)相比，脂質體試劑顯示出更高的轉染效率(Lipofectamine LTX在48小時時約為38%，Lipofectamine 2000在48小時時約為23%)。在這些研究中，基于脂質體和非脂質體的試劑轉染HUVECs的效率無法得出結論，主要是由于所用試劑的范圍存在差異。然而，一致的觀察結果表明轉...

在7種轉染試劑(DAC-30、DC-30、Lipofectin、LipofectAMINEPLUS、Effectene、FuGene 6和superect)中，FuGene 6轉染HASMCs和α-10 SMCs的效率比較高。在這兩種細胞系中，superect產生的細胞毒性作用比較高，其次是DAC-30和Lipofectamine Plus，而FuGene 6被認為對細胞系相對安全。在另一項比較人類和動物來源的不同細胞系轉染結果的研究中，豬氣管上皮細胞(PTE)被Effectene、Lipofectamine Plus和PEI等轉染試劑轉染的效率高于人類氣管上皮細胞(HTE)。化學轉染后，轉染...

質子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉移的物理測量來評估，也可以通過化學測量來評估，在化學測量中，表達的蛋白質與另一種蛋白質之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當的報告系統來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發光共振能量轉移(BRET)，它是熒光共振能量轉移研究質子泵抑制劑的替代方法。多個質粒的共轉染也可以應用于轉染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導RNA的質粒遞送到宿主細胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統進行基因組編輯。除了使用多個質粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達兩種不同基因的載體，通過一個內部核糖體進入位點連接...

納米顆粒在疫苗遞送中往往表現出***的佐劑作用。陽離子聚合物，包括PEI、聚賴氨酸、陽離子葡聚糖和陽離子明膠，已經有報道顯示出對Th1反應的強烈刺激，其特征是誘導CD4(+)T細胞增殖和th1相關細胞因子的分泌。此外，陽離子聚合物強烈抑制LPS誘導的巨噬細胞分泌TNF-α。陽離子聚合物的刺激能力與其陽離子化程度有關，陽離子聚合物與陰離子聚合物的中和可以完全消除刺激作用。聚合物的分子量也會影響其刺激能力，分子越大意味著刺激能力越大。deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。北京合肥轉染試劑在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前，應先確定其實驗需要。例如，siRNA*對一個靶標具有高...

此外，病毒濃度被認為是影響轉導效率的另一個因素。在Haas等人的評估中測試的其他幾個參數中，即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構建，纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細胞的轉導培養基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白，只有病毒滴度似乎與病毒轉導效率直接相關。轉染介質的條件也可能影響轉導效率。例如，在轉導過程中，使用胎牛血清比牛血清產生更好的轉導效率。同樣，研究表明，deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負電荷細胞之間的排斥力，并促進病毒轉導。影響化學轉染效率的因素在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前，應先確定其實驗需要。廣東轉染試劑便宜基因注射包括通過注射將所...

此外，病毒濃度被認為是影響轉導效率的另一個因素。在Haas等人的評估中測試的其他幾個參數中，即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構建，纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細胞的轉導培養基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白，只有病毒滴度似乎與病毒轉導效率直接相關。轉染介質的條件也可能影響轉導效率。例如，在轉導過程中，使用胎牛血清比牛血清產生更好的轉導效率。同樣，研究表明，deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負電荷細胞之間的排斥力，并促進病毒轉導。影響化學轉染效率的因素研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。廣西DNA轉染試劑基因和RNAi***在臨床上的...

此外，病毒濃度被認為是影響轉導效率的另一個因素。在Haas等人的評估中測試的其他幾個參數中，即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構建，纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細胞的轉導培養基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白，只有病毒滴度似乎與病毒轉導效率直接相關。轉染介質的條件也可能影響轉導效率。例如，在轉導過程中，使用胎牛血清比牛血清產生更好的轉導效率。同樣，研究表明，deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負電荷細胞之間的排斥力，并促進病毒轉導。影響化學轉染效率的因素基于病毒的轉染，或者更具體地稱為轉導，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。體內轉染試劑脂質體基因**...

Severinoetal.進行的研究也指出了陽離子脂質作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實現了人動力蛋白的表達，但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細胞毒性，并導致活細胞數量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復合物和由魚精蛋白、DNA和脂質層組成的納米顆粒在不同細胞系上的轉染效率:CHO(中國倉鼠卵巢細胞)、HEK293(人胚胎腎細胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細胞)和A17(小鼠*細胞)。魚精蛋白/DNA/脂質納米顆粒在每種細胞系中更有效地實現綠色和紅色熒光蛋白的表達，即使不同細胞系對轉染的敏感性不同。陽離子脂質的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物。不同的β-氨基酯聚...

在一項將質粒DNA轉染到HUVEC中的研究中，使用包括Effectene和FuGENE 6在內的非脂質體試劑比脂質體試劑DOTAP(18%)產生了更好的轉染效率(34%和33%)。在另一項用質粒DNA轉染HUVEC的研究中，與Effectene和FuGENE 6或HD等非脂質體試劑(48小時時均<20%)相比，脂質體試劑顯示出更高的轉染效率(Lipofectamine LTX在48小時時約為38%，Lipofectamine 2000在48小時時約為23%)。在這些研究中，基于脂質體和非脂質體的試劑轉染HUVECs的效率無法得出結論，主要是由于所用試劑的范圍存在差異。然而，一致的觀察結果表明轉...

RNA和信使RNA與DNA轉染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。與涉及DNA的轉染相比，RNA轉染可能產生更高的轉染效率，因為后者不需要穿越核膜。在不需要基因組整合、轉錄和轉錄后處理的情況下，RNA轉染也可能加速所需蛋白質的產生。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發癥，從而允許表達特定的，所需的蛋白質。然而，RNA轉染后，蛋白質表達是短暫的，與DNA相比，RNA的穩定性相對較差，因此在細胞內運輸時更容易降解。小RNA是長度為18-200個堿基對(bp)的RNA分子，具有調控轉錄后基因調控和RNA修飾的能力。小RNA包括micr...

小RNA和質粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。這可以通過引入含有熒光素酶報告基因的質粒來實現，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識別，然后允許小RNA結合以抑制熒光素酶的表達。另一方面，在RNA干擾(RNAi)研究中，小RNA和質粒DNA的共轉染也是必不可少的，以確定siRNA等特定小RNA對宿主細胞中特定基因表達的調節作用。小的非編碼RNA，如siRNA，以其表觀遺傳調控能力而聞名，更具體地說，是轉錄后對特定基因表達的調控。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報告系統相關的特定基因的質粒DNA可以同時共轉染到靶細胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達將導致熒光素酶活性**...

Severinoetal.進行的研究也指出了陽離子脂質作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實現了人動力蛋白的表達，但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細胞毒性，并導致活細胞數量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復合物和由魚精蛋白、DNA和脂質層組成的納米顆粒在不同細胞系上的轉染效率:CHO(中國倉鼠卵巢細胞)、HEK293(人胚胎腎細胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細胞)和A17(小鼠*細胞)。魚精蛋白/DNA/脂質納米顆粒在每種細胞系中更有效地實現綠色和紅色熒光蛋白的表達，即使不同細胞系對轉染的敏感性不同。陽離子脂質的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物。不同的β-氨基酯聚...

納米顆粒的尺寸很小，但它們比其他顆粒具有更大的粘附表面，同時具有高穩定性。正因為如此，它們能夠成功地穿過細胞膜，進入細胞，并與自然發生的細胞內途徑結合，具有將特定顆粒帶到預定目標位置的***準確性。由于納米顆粒在細胞內運輸和保護化合物方面具有巨大的潛力，可以避免酶的消化或儲存在核內體中，因此納米顆粒作為細胞過程成像的工具，作為將藥物攜帶到細胞內的各種系統的一部分，或**終用于基因傳遞。納米顆粒通過官能團和非共價鍵之間的特異性和非特異性鍵與核酸結合的特性類似于體內DNA和抑制蛋白之間的自然結合。在細胞內運輸外源DNA的效率受到兩個主要因素的限制:內吞作用，穿過細胞膜的方式，或適當的細胞受體***...

流式細胞術可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞，以評估轉染效率。另一種評估轉染效率的方法是通過監測轉染后的特定蛋白表達。將轉基因引入細胞可能會改變由轉基因或細胞中其他基因編碼的蛋白質的表達。同樣，轉染小RNA也可以調節宿主細胞中特定下游遺傳靶點的表達。免疫印跡和免疫熒光染色可用于評估轉染后蛋白表達的變化。在這兩種方法中，使用特異性抗體結合靶蛋白是至關重要的，后者需要使用與一抗結合的熒光標記二級抗體來檢測感興趣的蛋白質。另一方面，在免疫印跡中，可以使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯的二抗與一抗結合，進行特異性蛋白檢測。免疫印跡法允許對蛋白質表達進行半定量，而免疫熒光染色法允許通過熒光顯微鏡或流式...

質子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉移的物理測量來評估，也可以通過化學測量來評估，在化學測量中，表達的蛋白質與另一種蛋白質之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當的報告系統來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發光共振能量轉移(BRET)，它是熒光共振能量轉移研究質子泵抑制劑的替代方法。多個質粒的共轉染也可以應用于轉染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導RNA的質粒遞送到宿主細胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統進行基因組編輯。除了使用多個質粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達兩種不同基因的載體，通過一個內部核糖體進入位點連接...