長沙轉染試劑公司

RNA電穿孔高效轉染原代淋巴細胞：使用體外轉錄的mRNA通過電穿孔可以實現高基因轉染效率和低轉染相關毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。五、優化共轉染方法整合共轉染和平行共轉染：研究不同的共轉染和連續轉染方法，特別是體外轉錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預混合的IVTmRNAs（整合共轉染）和同時用單獨形成的納米載體轉染細胞（平行共轉染），分析決定共轉染效率的定量參數。同時遞送siRNA和mRNA也表明整合方法的比較高共轉染效率，但由于兩個**運營實體的峰值輸出在動力學上不同，連續交付的效率比較高。在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前，應先確定其實驗需要。長沙轉染試劑公司

RNA轉染試劑是一類能夠將RNA分子導入細胞內的物質，其作用原理主要涉及以下幾個方面。利用電荷相互作用：許多RNA轉染試劑是陽離子性的，它們可以與帶負電荷的RNA分子通過靜電相互作用結合形成復合物。例如，魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于相反電荷驅動的耦合作用，被用于細胞內核酸的遞送8。魚精蛋白不僅可以保護RNA免受生物系統中的降解，還能增強其對細胞的穿透能力。陽離子脂質體也是常見的轉染試劑之一。以LipofectamineTM2000為例，它可以介導攜帶綠色熒光蛋白基因的真核表達載體轉染至雞成骨細胞9。陽離子脂質體通過其陽離子頭部與RNA的負電荷相互作用，形成脂質體-RNA復合物，然后通過與細胞膜的融合或內吞作用將RNA導入細胞內。內吞作用途徑：一些RNA轉染試劑通過內吞作用進入細胞。如合成的8-mer兩親性反式多聚2'-O-甲基尿苷硫代磷酸三酯RNA元件（2'-OMeUtaPS），它能介導將不帶電荷的聚A尾磷酸二酰胺基嗎啉代序列（PMO）高效遞送至HeLapLuc705細胞或肌管肌肉細胞。已確定大胞飲作用是HeLapLuc705細胞中使用的主要內吞途徑。湖南轉染試劑在轉染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質粒)轉運到宿主細胞中。

對于容易轉染的貼壁細胞如人胚腎細胞（HEK293）和人宮頸*細胞（HeLa），脂質體轉染效率相對較高。這些細胞具有較強的內吞能力，能夠有效地攝取脂質體-核酸復合物。例如，在標準的轉染條件下，HEK293細胞的轉染效率可以達到50%-70%。而對于一些難轉染的貼壁細胞，如原代肝細胞和某些神經細胞，其轉染效率較低。這是因為它們的細胞膜結構比較復雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細胞間連接，阻礙了脂質體-核酸復合物的進入。例如，原代肝細胞的轉染效率可能只有10%-20%。

一般來說，貼壁細胞對脂質體的耐受性相對較好。但是，在高濃度脂質體轉染的情況下，即使是耐受性好的細胞也會受到影響。例如，HeLa細胞在高濃度脂質體轉染時，可能會出現細胞膜完整性受損，表現為細胞內乳酸脫氫酶（LDH）釋放增加，細胞的代謝活動也會受到一定程度的干擾。對于難轉染的貼壁細胞，由于其本身比較脆弱，較低濃度的脂質體也可能產生明顯的細胞毒性。比如原代神經細胞，脂質體可能會破壞其精細的神經突起結構，影響細胞的正常生理功能。

考慮多因子轉染能力如果實驗需要同時轉染多個RNA分子或進行共轉染實驗，那么選擇具有多因子轉染能力的試劑是重要的。共轉染效果：一些轉染試劑可以有效地實現多個RNA分子的共轉染，而另一些試劑可能在共轉染方面效果不佳。在脂質體方法用于modRNA轉染各種類型細胞的初步研究中，MessageMax能將modGFP高效轉染入多種細胞中，并實現modGFP和modmCherry在MEF細胞中的共轉及核內因子nGFP和mTBX5在MEF細胞核中的定位5。選擇適合多因子轉染的試劑：根據實驗需求，選擇能夠滿足多因子轉染要求的轉染試劑。例如，如果實驗需要同時轉染多個基因或進行基因編輯實驗，那么選擇具有多因子轉染能力的轉染試劑可以提高實驗效率。PEI的分子量對細胞毒性和基因轉移活性有影響。

選擇合適的轉染試劑GenMute試劑在人肝*細胞模型中的應用：在人肝*細胞HepG2和Huh7.5中，研究對比了脂質體類的Lipofectamine?RNAiMAX和HepG2特異性的聚合物類GenMute?兩種轉染試劑30。通過細胞成像分析發現，GenMute處理的細胞對熒光標記的陰性對照siRNA的攝取高于LipofectamineRNAiMAX轉染的細胞。并且，MTT實驗表明，GenMute轉染的細胞比LipofectamineRNAiMAX處理的細胞具有更高的存活率。這提示在人肝*細胞模型中，GenMute試劑可能是更適合的轉染試劑，在提高轉染效率的同時降低了細胞死亡。siRNA共軛殼聚糖納米顆粒在脊髓損傷模型中的應用：在創傷性脊髓損傷（SCI）模型中，通過制備帶有抗體靶向部分的siRNA共軛殼聚糖復合物，以抑制誘導型一氧化氮合酶（iNOS）的表達，該復合物主要靶向M1巨噬細胞31。實驗結果表明，Ab-siRNA共軛殼聚糖納米顆粒在體外***降低了M1極化巨噬細胞中的iNOS表達，具有高轉染效率和低細胞毒性。在體內應用該納米顆粒后，SCI后的iNOS表達和細胞凋亡均減少。這說明在特定的病理模型中，針對性設計的納米顆粒轉染試劑可以在提高轉染效率的同時降低細胞死亡。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質體核酸重新包裝到外泌體中。lipo3000轉染試劑疫苗

化學轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。長沙轉染試劑公司

    考慮RNA需求較少的RNA需求可以降低實驗成本，同時也可以減少對細胞的潛在毒性。比較不同試劑的RNA用量：不同的轉染試劑可能需要不同量的RNA才能達到相同的轉染效果。在選擇比較好的RNA轉染試劑并將其與電穿孔法進行病毒RNA的比較的研究中，某些商業轉染試劑在適當優化后，細胞死亡少得多，RNA需求少，轉染效率提高3?？紤]實驗規模：如果實驗需要大量轉染細胞，那么選擇RNA需求較少的試劑可以降低成本。例如，在大規模的細胞培養實驗中，選擇RNA需求少的轉染試劑可以節省成本和資源。四、考慮血清兼容性在有血清的情況下能夠遞送RNA的轉染試劑可以簡化實驗操作，提高實驗的可重復性。血清對轉染的影響：一些轉染試劑在有血清的情況下可能會降低轉染效率，而另一些試劑則可以在血清存在的情況下正常工作。在比較不同商業RNA轉染試劑將黃熱病病毒（YFV）和丙型肝炎病毒（HCV）RNA復制子遞送至Huh7細胞的能力的研究中，討論了與高效轉染相關的因素，以及在存在血清的情況下能夠遞送RNA的優勢3。選擇血清兼容的試劑：如果實驗需要在有血清的條件下進行，那么選擇血清兼容的轉染試劑是必要的。例如，在一些細胞培養實驗中，血清是細胞生長所必需的。 長沙轉染試劑公司