靶向特定基因座提高穩(wěn)定轉(zhuǎn)染效率:在布魯氏錐蟲中,利用RNAi的構(gòu)建體和(GFP)標(biāo)記的蛋白的表達(dá),靶向(hyg)標(biāo)記的核糖體RNA(RRNA)基因座,可以規(guī)避位置效應(yīng)并提高靶向效率。該系統(tǒng)還利用新的誘導(dǎo)型RRNA啟動子來驅(qū)動T7RNA聚合酶(T7RNAP)轉(zhuǎn)錄,然后從誘導(dǎo)型T7啟動子驅(qū)動表達(dá),可減輕當(dāng)前表達(dá)系統(tǒng)的一些問題9。綜上所述,提高RNA轉(zhuǎn)染效率的策略包括選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑、利用魚精蛋白、優(yōu)化電轉(zhuǎn)方法、采用RNA電穿孔、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法以及靶向特定基因座等。這些策略可以根據(jù)不同的實驗需求和細(xì)胞類型進行選擇和組合,以提高RNA轉(zhuǎn)染效率,為RNA研究和應(yīng)用提供有力支持。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對轉(zhuǎn)染效率也有影響。貴州轉(zhuǎn)染試劑定制
電轉(zhuǎn)染方式:機制概述:電轉(zhuǎn)染是利用電場作用使細(xì)胞膜產(chǎn)生可逆性的通透性增加,從而使RNA分子能夠進入細(xì)胞。在適當(dāng)?shù)碾妶鰲l件下,細(xì)胞膜上會形成微孔,RNA分子通過這些微孔進入細(xì)胞。當(dāng)電場消失后,細(xì)胞膜會逐漸恢復(fù)正常狀態(tài)。在不同細(xì)胞類型中的表現(xiàn):在人脂肪干細(xì)胞(hADSC)中,Optimization6電轉(zhuǎn)方式轉(zhuǎn)染hADSC的效率高于其他電轉(zhuǎn)染方式(Optimization4)和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑RNAiMAX。熒光顯微鏡觀察及流式分析均表明電轉(zhuǎn)染方式的蛋白表達(dá)優(yōu)于RNAiMAX脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染。這說明電轉(zhuǎn)染方式在hADSC中能夠更有效地將modRNA轉(zhuǎn)染入細(xì)胞,并實現(xiàn)特定蛋白的表達(dá)10。魚精蛋白相關(guān)轉(zhuǎn)染試劑:機制概述:魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物,可用于穩(wěn)定和遞送核酸,包括信使RNA(mRNA)等。當(dāng)與RNA混合時,魚精蛋白會自發(fā)地產(chǎn)生粒徑在20-1000nm范圍內(nèi)的顆粒,這些顆??捎糜谝呙缃臃N和免疫刺激。不同等級的魚精蛋白在與mRNA形成復(fù)合物時表現(xiàn)出不同的轉(zhuǎn)染能力,其轉(zhuǎn)染機制可能與魚精蛋白的來源等因素有關(guān)。在不同細(xì)胞類型中的表現(xiàn):魚精蛋白相關(guān)轉(zhuǎn)染試劑在多種細(xì)胞類型中的具體表現(xiàn)目前文獻中未詳細(xì)提及,但研究表明不同來源的魚精蛋白制劑在其組成和轉(zhuǎn)染mRNA的能力上存在很大差異。青海細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑陽離子 RNA 轉(zhuǎn)染試劑在結(jié)合 RNA 分子機制上存在多種差異。
在腺相關(guān)病毒載體(AAV)生產(chǎn)中的應(yīng)用納米凝膠由微流體產(chǎn)生,作為標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染試劑如聚乙烯亞胺-MAX(PEI-MAX)的新型替代品,用于生產(chǎn)具有可比產(chǎn)量的AAV載體。在pDNA重量比為1:1:2和1:1:3(分別為pAAV順式質(zhì)粒、pDG9衣殼反式質(zhì)粒和pHGTI輔助質(zhì)粒)時形成納米凝膠,在小規(guī)模下,載體產(chǎn)量與PEI-MAX相比沒有***差異。氮/磷酸鹽比為5和10的1:1:2重量比的納米凝膠分別產(chǎn)生約8.8×10?vg/mL和約8.1×10?vg/mL的產(chǎn)量,而PEI-MAX約為1.1×10?vg/mL。在大規(guī)模生產(chǎn)中,優(yōu)化的納米凝膠以約7.4×1011vg/mL的滴度產(chǎn)生AAV,與PEI-MAX的約1.2×1012vg/mL相比沒有統(tǒng)計學(xué)差異,表明可以用易于實施的微流體技術(shù)以相對較低的成本實現(xiàn)與傳統(tǒng)試劑相當(dāng)?shù)牡味?0。
考慮RNA需求較少的RNA需求可以降低實驗成本,同時也可以減少對細(xì)胞的潛在毒性。比較不同試劑的RNA用量:不同的轉(zhuǎn)染試劑可能需要不同量的RNA才能達(dá)到相同的轉(zhuǎn)染效果。在選擇比較好的RNA轉(zhuǎn)染試劑并將其與電穿孔法進行病毒RNA的比較的研究中,某些商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑在適當(dāng)優(yōu)化后,細(xì)胞死亡少得多,RNA需求少,轉(zhuǎn)染效率提高3??紤]實驗規(guī)模:如果實驗需要大量轉(zhuǎn)染細(xì)胞,那么選擇RNA需求較少的試劑可以降低成本。例如,在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)實驗中,選擇RNA需求少的轉(zhuǎn)染試劑可以節(jié)省成本和資源。四、考慮血清兼容性在有血清的情況下能夠遞送RNA的轉(zhuǎn)染試劑可以簡化實驗操作,提高實驗的可重復(fù)性。血清對轉(zhuǎn)染的影響:一些轉(zhuǎn)染試劑在有血清的情況下可能會降低轉(zhuǎn)染效率,而另一些試劑則可以在血清存在的情況下正常工作。在比較不同商業(yè)RNA轉(zhuǎn)染試劑將黃熱病病毒(YFV)和丙型肝炎病毒(HCV)RNA復(fù)制子遞送至Huh7細(xì)胞的能力的研究中,討論了與高效轉(zhuǎn)染相關(guān)的因素,以及在存在血清的情況下能夠遞送RNA的優(yōu)勢3。選擇血清兼容的試劑:如果實驗需要在有血清的條件下進行,那么選擇血清兼容的轉(zhuǎn)染試劑是必要的。例如,在一些細(xì)胞培養(yǎng)實驗中,血清是細(xì)胞生長所必需的。 小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評估轉(zhuǎn)染效率。
開發(fā)新型動物搖籃可以實現(xiàn)小動物的多重成像,提高成像效率。開發(fā)新型動物搖籃的小動物多重成像方式:采集和評估高通量多鼠成像:KimHunnyun、ImGeunHo和YoonYeup開發(fā)了一種可以修改和調(diào)整以適應(yīng)多種成像模型的新型動物搖籃4。與以往只能成像一只小鼠的搖籃不同,這個新的搖籃可以同時成像四只小鼠,還可以獲取具有PET/MRI和PET/CT圖像的高吞吐量多鼠成像的融合圖像。通過將PET動態(tài)成像技術(shù)應(yīng)用于高吞吐量MMI方法,還可以同時獲取動態(tài)腦圖像。七、紅外成像技術(shù)在畜牧業(yè)中的應(yīng)用紅外成像技術(shù)在畜牧業(yè)中具有廣泛的應(yīng)用前景。Infraredimaginganewnon-invasivemachinelearningtechnologyforanimalhusbandry:ManaseeChoudhury、TulikaSaikia和SantanuBanik介紹了紅外成像技術(shù)在畜牧業(yè)中的應(yīng)用5。紅外熱成像技術(shù)因其非侵入性、易于自動化和高靈敏度等特點,在動物疾病檢測和緩解方面的應(yīng)用越來越***。該技術(shù)可以確認(rèn)***動物身體部位溫度的升高,還可用于檢測排卵、雄性生育力、應(yīng)激水平、肉質(zhì)、種群規(guī)模等。由于其易于操作,可以作為疾病診斷的**篩查工具,但仍需要進一步研究以獲得更準(zhǔn)確的診斷結(jié)果。基因注射包括通過注射將所需的核酸物質(zhì)直接輸送到宿主細(xì)胞核中。安徽難轉(zhuǎn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA,含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。貴州轉(zhuǎn)染試劑定制
在人類多能干細(xì)胞衍生的心肌細(xì)胞(HPSC-CMs)中的應(yīng)用低轉(zhuǎn)染效率是實現(xiàn)HPSC-CMs在疾病建模和心臟修復(fù)研究中廣泛應(yīng)用的障礙。通過優(yōu)化四個基本參數(shù),即血清補充劑、復(fù)制和轉(zhuǎn)染之間的時間、試劑與DNA比以及細(xì)胞密度,使用Promega的Viafect?轉(zhuǎn)染試劑能夠?qū)PSC-CMs轉(zhuǎn)染至約95%的效率28。盡管活力有所降低,但轉(zhuǎn)染后的HPSC-CMs仍保持了高純度和結(jié)構(gòu)完整性,確保了至少14天的轉(zhuǎn)染基因持續(xù)表達(dá),為心臟相關(guān)疾病的研究開辟了新機遇。在C2C12細(xì)胞中的應(yīng)用C2C12細(xì)胞在肌肉領(lǐng)域***使用,但它們和原代成肌細(xì)胞一樣難以轉(zhuǎn)染,影響了下游實驗。雖然自2015年以來超過95%的使用C2C12細(xì)胞的報告使用了一種金標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染劑(如Lipofectamine®),但有研究表明其效率低于30%。通過比較五種商業(yè)試劑(Lipofectamine®3000、Viafect?、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®)在C2C12細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率,發(fā)現(xiàn)通過優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細(xì)胞密度,所有試劑都能達(dá)到超過60%的轉(zhuǎn)染效率,且對細(xì)胞生長和活力影響有限。這些試劑還能在C2C12細(xì)胞中轉(zhuǎn)染后高效生成GFP陽性的肌管,但在轉(zhuǎn)染siRNA和對原代肌肉細(xì)胞的轉(zhuǎn)染中表現(xiàn)出較低效率和較高毒性3。貴州轉(zhuǎn)染試劑定制