PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質)制成的，是***個用作基因載體的聚酯。在生理環境中，PHP可以在不到兩個小時的時間內失去其初始分子量的50%。然而，PHP完全分解為其等效單體需要三個月的時間，分解產物是單體羥脯氨酸。雖然PHP酯在溶液中單獨存在時降解很快，但與DNA絡合時更穩定。將PHP酯/pSV-gal復合物轉染CPAE細胞，測定PHP酯作為基因傳遞載體的活性。由于聚L-賴氨酸是**常用的基因轉運聚合物，PHP酯的轉染效率與聚L-賴氨酸相當。轉染效果隨著PHP酯濃度高于DNA濃度而增加。PHP酯轉染細胞的能力不受FBS存在的影響。結果表明，PHP酯是一種潛在的基...

目前核酸遞送系統的局限性之一是無法深入穿透組織和***，如實體瘤和大腦。通常情況下，只能到達并轉染細胞的外層，從而導致***效果不佳。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)，一種人類**病原體，似乎通過劫持**微環境中的外泌體進行細胞間通訊來克服這一點。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm)，起源于內吞。在被釋放到細胞外環境后，由于其表面存在細胞識別分子，它們可以與鄰近細胞融合。外泌體外泌體是細胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號因子的載體，通過經歷細胞內化和釋放的幾個周期，能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細胞分泌，包括腫瘤細胞、樹突狀細胞、B細胞、T細胞、上皮細胞和神經元。利用外泌體途徑的一...

肌內注射脂質體不能引起強烈的毒性反應，這與肺內或靜脈注射途徑的情況不同。幾項體內研究表明，pDNA載體的肺內遞送是促炎th1樣細胞因子的產生和隨后浸潤細胞涌入肺區域的原因。在任何情況下，陽離子脂質本身不會引起免疫反應，而且這種效果不是由于pDNA制備中存在內***。在一項囊性纖維化臨床試驗中，急性輕度流感樣癥狀被認為是由DNA依賴效應引起的，而對照組(*脂質組)沒有觀察到這種效應。有幾種方法可以降低載體CpG基序的免疫刺激作用。這些包括這些基序中胞嘧啶堿基的甲基化，中和序列的添加，CpG基序的消除，使用化學或生物方法的免疫抑制，將載體靶向遠離網狀內皮系統的細胞，以及抑制內粒體酸化。研究表明，系...

選擇合適的轉染試劑可能取決于幾個因素，包括轉染核酸的類型和轉染的復雜性(單轉染或共轉染)。一些試劑如Effectene和TransIT-X2是專門用于質粒DNA轉染的，而一些試劑如Lipofectamine RNAiMAX更適合于小寡核苷酸的轉染。哺乳動物原代細胞由于其有限的壽命和有限的擴增能力，通常比其他細胞類型更不容易受到轉染。非脂質體試劑在轉染人原代細胞方面優于脂質體試劑，包括PEC、HASMC和HAEC、人原代成肌細胞和AGS。相比之下，據報道，基于脂質體的試劑(如Lipofectamine和DharmaFECT家族)在轉染其他原代人細胞(如原代臍帶靜脈內皮細胞(HUVEC)和BM-M...

流式細胞術可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞，以評估轉染效率。另一種評估轉染效率的方法是通過監測轉染后的特定蛋白表達。將轉基因引入細胞可能會改變由轉基因或細胞中其他基因編碼的蛋白質的表達。同樣，轉染小RNA也可以調節宿主細胞中特定下游遺傳靶點的表達。免疫印跡和免疫熒光染色可用于評估轉染后蛋白表達的變化。在這兩種方法中，使用特異性抗體結合靶蛋白是至關重要的，后者需要使用與一抗結合的熒光標記二級抗體來檢測感興趣的蛋白質。另一方面，在免疫印跡中，可以使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯的二抗與一抗結合，進行特異性蛋白檢測。免疫印跡法允許對蛋白質表達進行半定量，而免疫熒光染色法允許通過熒光顯微鏡或流式...

**近的研究已經確定了陽離子脂質體（CLs）的某些特征，這些特征增強了它們在體內轉運核酸的能力。這些特征包括陽離子頭基團及其鄰近的脂肪鏈在主鏈上呈1,2關系，醚鍵用于橋接脂肪鏈到主鏈，成對的油基鏈作為疏水系鏈。無論如何，這些特征雖然不能決定細胞培養中更好的轉染能力，但可以在體內實現更好的核酸遞送。因此，必須謹慎對待體外和細胞培養的結果，不能必然地用來推斷核酸載體在體內的潛力。當這些囊泡在體內引入時，其他因素(如顆粒直徑)變得更加重要。使用脂質體時遇到的毒性通常與制劑中陽離子脂質與核酸之間的電荷比、所使用的制劑類型以及所給脂質體的劑量密切相關。較高的電荷比通常對多種細胞類型的毒性更大，包括*細胞...

作為一般指導原則，建議使用早期傳代的細胞以獲得良好的轉染效率，特別是涉及原代或干細胞的轉染。另一個有趣的觀察結果是，37℃是可以幫助原代細胞達到更高轉染效率的比較好培養溫度。這種現象可能是因為37攝氏度是哺乳動物細胞的比較好培養溫度。同時，在轉染原代細胞時，化學轉染似乎不如病毒和物理轉染有吸引力，尤其是在人類原代干細胞中。當在相似條件下使用相同的轉染試劑進行轉染時，細胞系的來源(如人類與動物細胞系)也可能有助于不同程度的效率。在一項涉及轉染人類和大鼠平滑肌細胞的研究中，大多數轉染試劑在轉染大鼠平滑肌細胞(α-10SMCs)方面的效率高于轉染人主動脈平滑肌細胞(HASMCs)。轉染試劑的凍融被認...

由于CRISPR/Cas的發現，基因組編輯領域經歷了一場**。細菌免疫系統的CRIPSR/Cas成分導致全基因組雙鏈DNA斷裂，并通過內部DNA修復過程促進基因編輯。有研究指出，陽離子聚合物聚乙二胺-環糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質粒的有效遞送。當大質粒通過PC傳遞時，它們可以以高N/P比聚結并包裹質粒;這有效地編輯了兩個基因組位點:血紅蛋白亞基β(19.1%)和菱形5同源物1(RHBDF1(7.0%))。研究人員開發了巨噬細胞特異性啟動子驅動的Cas9表達質粒(pM458和pM330)，并將其包裹在陽離子脂質輔助PEG-b-PLGA納米顆粒中，以解決無法在靶組織和細胞中進行精...

影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。例如，電穿孔技術依賴于電場來增加宿主細胞膜的通透性，以內化外來核酸。因此，電穿孔過程中的電壓和持續時間是決定電穿孔成功與否的重要因素。施加高壓的長時間電穿孔可能會導致細胞損傷并降低轉染效率。通過增加電脈沖的數量也可以提高電轉染效率，但這可能會降低細胞活力。另一方面，電轉染效率取決于所使用的細胞類型，每當要電轉染一種新的細胞類型時，應優化電穿孔條件。一些細胞如T淋巴細胞，即使在標準的電穿孔條件下也可能轉染不良，而電轉染成纖維細胞通?？梢援a生良好的轉染結果。電穿孔緩沖液的組成是影響轉染效率的另一個關鍵參數。據報道，電穿孔緩沖液中...

納米顆粒的尺寸很小，但它們比其他顆粒具有更大的粘附表面，同時具有高穩定性。正因為如此，它們能夠成功地穿過細胞膜，進入細胞，并與自然發生的細胞內途徑結合，具有將特定顆粒帶到預定目標位置的***準確性。由于納米顆粒在細胞內運輸和保護化合物方面具有巨大的潛力，可以避免酶的消化或儲存在核內體中，因此納米顆粒作為細胞過程成像的工具，作為將藥物攜帶到細胞內的各種系統的一部分，或**終用于基因傳遞。納米顆粒通過官能團和非共價鍵之間的特異性和非特異性鍵與核酸結合的特性類似于體內DNA和抑制蛋白之間的自然結合。在細胞內運輸外源DNA的效率受到兩個主要因素的限制:內吞作用，穿過細胞膜的方式，或適當的細胞受體***...

除了mRNA疫苗，DNA疫苗也是不錯的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下，研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進了PG和PAMAM G4復合物的大小、運動性和表面電荷，然后在BALB/c小鼠中測試疫苗設計的免疫原性。根據研究結果，由于同時包裝在PG和PAMAM G4包膜中，DNA疫苗的免疫原性增加。在給予PG包被的DNA疫苗復合物的小鼠中，觀察到**強的t細胞反應，并且這些反應明顯高于給予裸DNA組合和PAMAM 4G包被的DNA組合的動物組?；瘜W轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。四川大鼠轉染試劑攜帶要轉染...

評估轉染效率至關重要，特別是在需要高轉染效率以保證特定下游靶標轉錄后調控的功能研究中?？梢赃x擇多種策略來評估轉染效率。實時聚合酶鏈反應(qPCR)是一種通過直接測量特定外源蛋白表達水平來評估轉染效率的定量方法。細胞內核酸或其他可能受到外源核酸(如miRNAs)影響的細胞內核酸。在瞬時轉染的情況下，每次轉染后都應進行qPCR，以確保良好的轉染效率，然后再進行下游實驗。與質粒報告系統共轉染是另一種策略，可以通過表達特定的報告蛋白(如熒光素酶或β-半乳糖苷酶)來評估轉染效率。采用小RNA熒光素酶報告系統以干擾(RNAi)研究為例，miRNA轉染成功的標志是熒光素酶活性下調，這是由于miRNA與轉錄的...

流式細胞術可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞，以評估轉染效率。另一種評估轉染效率的方法是通過監測轉染后的特定蛋白表達。將轉基因引入細胞可能會改變由轉基因或細胞中其他基因編碼的蛋白質的表達。同樣，轉染小RNA也可以調節宿主細胞中特定下游遺傳靶點的表達。免疫印跡和免疫熒光染色可用于評估轉染后蛋白表達的變化。在這兩種方法中，使用特異性抗體結合靶蛋白是至關重要的，后者需要使用與一抗結合的熒光標記二級抗體來檢測感興趣的蛋白質。另一方面，在免疫印跡中，可以使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯的二抗與一抗結合，進行特異性蛋白檢測。免疫印跡法允許對蛋白質表達進行半定量，而免疫熒光染色法允許通過熒光顯微鏡或流式...

在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前，應先確定其實驗需要。例如，siRNA*對一個靶標具有高度特異性，而miRNA具有調節多個下游靶標的潛力。如今，可以人工合成各種類型的短長度寡核苷酸來模仿小RNA分子，以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA)，其結構使其能夠與目標mRNA結合以抑制其功能，從而導致特定基因的翻譯抑制。相反，拮抗劑是一種寡核苷酸，它將與互補的小RNA鏈(如miRNA)結合以拮抗其活性，從而增加目標基因的表達。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質體核...

陽離子脂質體合成中常用的分子是中性脂質二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進膜融合，并有助于質膜或核內體的不穩定。此外，由于陽離子脂質相互排斥，因此需要DOPE等輔助脂質來穩定陽離子脂質體（CLs）懸浮液，并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉染作用。沒有中性脂質的脂質體具有較低的轉染率，盡管情況并非總是如此。不同的轉染率可能是由用于配制脂質體的陽離子:中性脂質的不同比例引起的。如上所述，CLs介導的核酸轉移的成功取決于許多因素，這些因素可能解釋了脂質體(脂質體介導的轉染)的內在變異性，特別是在體內。評估轉染效率至關重要，特別是在需要高轉染效...

**近的研究已經確定了陽離子脂質體（CLs）的某些特征，這些特征增強了它們在體內轉運核酸的能力。這些特征包括陽離子頭基團及其鄰近的脂肪鏈在主鏈上呈1,2關系，醚鍵用于橋接脂肪鏈到主鏈，成對的油基鏈作為疏水系鏈。無論如何，這些特征雖然不能決定細胞培養中更好的轉染能力，但可以在體內實現更好的核酸遞送。因此，必須謹慎對待體外和細胞培養的結果，不能必然地用來推斷核酸載體在體內的潛力。當這些囊泡在體內引入時，其他因素(如顆粒直徑)變得更加重要。使用脂質體時遇到的毒性通常與制劑中陽離子脂質與核酸之間的電荷比、所使用的制劑類型以及所給脂質體的劑量密切相關。較高的電荷比通常對多種細胞類型的毒性更大，包括*細胞...

Severinoetal.進行的研究也指出了陽離子脂質作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實現了人動力蛋白的表達，但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細胞毒性，并導致活細胞數量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復合物和由魚精蛋白、DNA和脂質層組成的納米顆粒在不同細胞系上的轉染效率:CHO(中國倉鼠卵巢細胞)、HEK293(人胚胎腎細胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細胞)和A17(小鼠*細胞)。魚精蛋白/DNA/脂質納米顆粒在每種細胞系中更有效地實現綠色和紅色熒光蛋白的表達，即使不同細胞系對轉染的敏感性不同。陽離子脂質的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物。不同的β-氨基酯聚...

在大腸桿菌細胞中復制的質粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細菌DNA中的頻率相似。CpG免疫刺激的兩個應用領域是疫苗接種和腫瘤免疫***。許多出版物表明，免疫刺激CpG基序可以用于疫苗接種策略，包括給藥編碼抗原的pDNA載體或給藥抗原本身。通過不同的給藥途徑給藥含CpG的脂叢可以抑制**生長。這些結果來源于使用表達促炎細胞因子(如IL-12)的轉基因或甚至不含外源轉基因的載體的研究。**的生長抑制似乎是由CpG基序引起的，因為這些序列的甲基化否定了這種作用。雖然有***效果，但含CpG基序對**生長的抑制的確切性質尚不清楚。產生的細胞因子對腫瘤細胞和**脈管系統都有多重作用。一...

化學轉染的效率在很大程度上取決于幾個因素，如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質，以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸，并將其靶標傳遞給非分裂細胞和分裂細胞，因此在基因***中非常有用。有幾個因素已被證明可能影響病毒轉導的效率，如靶細胞類型、使用的啟動子類型、載體濃度和使用的轉導介質條件。在一項評估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進行基因轉導的體外研究中，觀察到這兩種病毒在來自人類、倉鼠、貓、狗、馬和豬的不同細胞系上的不同程度的效率。在大多數細胞類型上，使用HIV的轉導效率普遍優于EIAV，而這兩種病毒對嚙齒動物細胞的***性較弱。在...

攜帶要轉染的特定核酸的載體構建可以進一步分為病毒載體或質粒載體。病毒和質粒通過存在合適的真核啟動子促進外源轉基因的表達。病毒載體可能在宿主細胞中觸發免疫原性反應，而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機制來促進靶向核酸或載體結構轉移到宿主細胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用遞送載體，可能是脂質載體或非脂質載體，以幫助增強載體載體復合物與宿主細胞膜之間的接觸，從而促進復合物進入細胞。設計和啟動轉染試驗可能具有挑戰性，特別是可供選擇的轉染方法或策略種類繁多的情況下。脂質顆粒的加入導致內體DNA釋放增加。河南脂質體轉染試劑RNA和信使RNA與DNA轉染類似，RNA可以通過基于RNA的...

PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它可以與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。研究人員發現，配體在PLL上的共價附著可通過受體介導的途徑***增強內吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細胞上表達。當ASOR共價附著在PLL上時，受體介導的內吞作用和質粒的細胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉鐵蛋白相關的PLL已被開發出來，并在將pDNAs轉染到*細胞中取得了實質性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更...

基因和RNAi***在臨床上的應用需要安全高效的載體。迄今為止，核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關的安全問題有很多:誘導免疫反應的風險、不必要的突變和**。因此，在開發基于脂質或聚合載體的非病毒載體是勢在必行的。1965年，Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖，這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年，Felgner引入了DOTMA，這是第一種用于DNA轉染的陽離子脂質。從那時起，大量不同的脂質和聚合物被開發出來。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質體囊泡中的技術，開發出了Gemate系列轉染試劑。作為一般指導原則，建議使用早期傳代的細...

在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前，應先確定其實驗需要。例如，siRNA*對一個靶標具有高度特異性，而miRNA具有調節多個下游靶標的潛力。如今，可以人工合成各種類型的短長度寡核苷酸來模仿小RNA分子，以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA)，其結構使其能夠與目標mRNA結合以抑制其功能，從而導致特定基因的翻譯抑制。相反，拮抗劑是一種寡核苷酸，它將與互補的小RNA鏈(如miRNA)結合以拮抗其活性，從而增加目標基因的表達。PEI的分子量對細胞毒性和基因轉移活性有...

共轉染是將一種以上類型的核酸引入真核細胞的過程。組合的一些例子包括多個質粒DNA ,siRNA和質粒DNA ，以及多個miRNAs進入同一個細胞。通常，多質粒DNA共轉染的目的是將一種以上的外源基因導入宿主細胞。其應用之一是生產由幾種質粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個例子是在HEK293細胞系中，用轉移、包膜和包裝載體等幾種質粒載體生成慢病毒。此外，多個質粒DNA的共轉染也可以應用于蛋白質-蛋白質相互作用(PPI)研究，以研究一種蛋白質與另一種蛋白質之間的關系。陽離子脂質體合成中常用的分子是中性脂質二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。PEI 轉染試劑公司在轉染實驗中使用對照對于確定所使用...

陽離子聚合物是一種非病毒載體，其結構的一個共同特征是分子中存在許多帶正電的基團，這些基團被質子化成帶正電的聚合物。陽離子聚合物可以通過靜電相互作用結合核酸，并將其凝聚成小的納米顆粒。正電荷改善了與帶負電荷的細胞膜的相互作用，并幫助多聚體在溶酶體降解發生之前逃離核內體。隨后，多聚體通過陽離子聚合物上帶正電基團介導的質子海綿效應從核內體中逸出。此外，核酸必須與陽離子聚合物分離，才能**終發揮其功能。成功的核酸轉染需要轉染效率高、細胞毒性低。在確定陽離子聚合物是否是合適的核酸轉染試劑時，必須考慮這兩個特點。一般認為，陽離子聚合物的分子量越高，其包封核酸和被細胞攝取的能力越強，細胞活力和核酸釋放越差。...

deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。通過用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質子化，這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個用于核酸轉染的陽離子聚合物。早在20世紀50年代，它就極大地增強了脊髓灰質炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳動物細胞中的轉染。隨后，deae -葡聚糖被廣泛應用于RNA或DNA的轉染。然而，由于以下原因，deae -葡聚糖并沒有作為比較好候選物:轉染效率遠低于脂質體等其他試劑;deae -葡聚糖的細胞毒性和免疫原性不容忽視。影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。甘肅轉染試劑定做共轉染是將一...

評估轉染效率至關重要，特別是在需要高轉染效率以保證特定下游靶標轉錄后調控的功能研究中?？梢赃x擇多種策略來評估轉染效率。實時聚合酶鏈反應(qPCR)是一種通過直接測量特定外源蛋白表達水平來評估轉染效率的定量方法。細胞內核酸或其他可能受到外源核酸(如miRNAs)影響的細胞內核酸。在瞬時轉染的情況下，每次轉染后都應進行qPCR，以確保良好的轉染效率，然后再進行下游實驗。與質粒報告系統共轉染是另一種策略，可以通過表達特定的報告蛋白(如熒光素酶或β-半乳糖苷酶)來評估轉染效率。采用小RNA熒光素酶報告系統以干擾(RNAi)研究為例，miRNA轉染成功的標志是熒光素酶活性下調，這是由于miRNA與轉錄的...

陽離子聚合物是一種非病毒載體，其結構的一個共同特征是分子中存在許多帶正電的基團，這些基團被質子化成帶正電的聚合物。陽離子聚合物可以通過靜電相互作用結合核酸，并將其凝聚成小的納米顆粒。正電荷改善了與帶負電荷的細胞膜的相互作用，并幫助多聚體在溶酶體降解發生之前逃離核內體。隨后，多聚體通過陽離子聚合物上帶正電基團介導的質子海綿效應從核內體中逸出。此外，核酸必須與陽離子聚合物分離，才能**終發揮其功能。成功的核酸轉染需要轉染效率高、細胞毒性低。在確定陽離子聚合物是否是合適的核酸轉染試劑時，必須考慮這兩個特點。一般認為，陽離子聚合物的分子量越高，其包封核酸和被細胞攝取的能力越強，細胞活力和核酸釋放越差。...

deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。通過用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質子化，這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個用于核酸轉染的陽離子聚合物。早在20世紀50年代，它就極大地增強了脊髓灰質炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳動物細胞中的轉染。隨后，deae -葡聚糖被廣泛應用于RNA或DNA的轉染。然而，由于以下原因，deae -葡聚糖并沒有作為比較好候選物:轉染效率遠低于脂質體等其他試劑;deae -葡聚糖的細胞毒性和免疫原性不容忽視。但似乎找到一種既能改善基因表達又不影響細胞、不對細胞造成損害的技術也至關重要。福建轉染試劑靠譜流式...

評估轉染效率至關重要，特別是在需要高轉染效率以保證特定下游靶標轉錄后調控的功能研究中。可以選擇多種策略來評估轉染效率。實時聚合酶鏈反應(qPCR)是一種通過直接測量特定外源蛋白表達水平來評估轉染效率的定量方法。細胞內核酸或其他可能受到外源核酸(如miRNAs)影響的細胞內核酸。在瞬時轉染的情況下，每次轉染后都應進行qPCR，以確保良好的轉染效率，然后再進行下游實驗。與質粒報告系統共轉染是另一種策略，可以通過表達特定的報告蛋白(如熒光素酶或β-半乳糖苷酶)來評估轉染效率。采用小RNA熒光素酶報告系統以干擾(RNAi)研究為例，miRNA轉染成功的標志是熒光素酶活性下調，這是由于miRNA與轉錄的...