對于容易轉染的貼壁細胞如人胚腎細胞(HEK293)和人宮頸*細胞(HeLa),脂質體轉染效率相對較高。這些細胞具有較強的內吞能力,能夠有效地攝取脂質體-核酸復合物。例如,在標準的轉染條件下,HEK293細胞的轉染效率可以達到50%-70%。而對于一些難轉染的貼壁細胞,如原代肝細胞和某些神經細胞,其轉染效率較低。這是因為它們的細胞膜結構比較復雜,可能存在較厚的糖萼或者緊密的細胞間連接,阻礙了脂質體-核酸復合物的進入。例如,原代肝細胞的轉染效率可能只有10%-20%。
一般來說,貼壁細胞對脂質體的耐受性相對較好。但是,在高濃度脂質體轉染的情況下,即使是耐受性好的細胞也會受到影響。例如,HeLa細胞在高濃度脂質體轉染時,可能會出現細胞膜完整性受損,表現為細胞內乳酸脫氫酶(LDH)釋放增加,細胞的代謝活動也會受到一定程度的干擾。對于難轉染的貼壁細胞,由于其本身比較脆弱,較低濃度的脂質體也可能產生明顯的細胞毒性。比如原代神經細胞,脂質體可能會破壞其精細的神經突起結構,影響細胞的正常生理功能。 是由非離子核酸與陽離子脂質體(CLs)表面結合,形成多層脂質-核酸復合物而形成的。上海DOTAP 轉染試劑
三、脂質體組成對轉染效率的影響不同脂質組成的影響:研究發現脂質體的組成對不同類型細胞的轉染效率有影響。例如,四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質體配方對不同細胞系的轉染效率不同。Huh7和AGS細胞的比較好脂質體組成是T1P0和T3P1;COS7細胞是T3P1和T1P1;A549細胞是T1P1和T1P36。脂質體結構的影響:脂質體復合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結構變為倒六角形結構,但在所有使用的細胞系中,特定結構在轉染效率上沒有明確的優勢6。四、其他因素的影響血清的影響:對于某些細胞,血清的存在會影響轉染效率。如Siha細胞在無血清培養基中培養時轉染效率更高,而在Caco-2細胞的轉染中,血清在本實驗室條件下并不影響轉染效率19。細胞傳代次數:Caco-2細胞在2-5次細胞傳代時轉染效率比較高9。綜上所述,脂質體轉染對不同類型細胞的影響存在多方面的差異,包括轉染效率、影響因素以及脂質體組成等。在進行脂質體轉染實驗時,需要根據不同的細胞類型優化轉染條件,以獲得比較好的轉染效果。武漢轉染試劑現貨PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時,它與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。
轉染時間對奶牛子宮內膜原代上皮細胞轉染的影響:在奶牛子宮內膜原代上皮細胞中,應用帶有FAM標記的miRNA-185mimics為報告基因,檢測兩種不同轉染試劑(LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000)在細胞接種不同時間后的轉染效率33。結果顯示,無論使用哪種轉染試劑,12h的轉染效率均極***高于18、24h,LipofectamineRNAiMAX各時間點的轉染效率均極***高于Lipofectamine2000。并且,使用LipofectamineRNAiMAX作為轉染試劑時,12h的熒光強度也比較高。這說明在奶牛子宮內膜原代上皮細胞中,選擇合適的轉染試劑和轉染時間可以提高轉染效率。同時,該研究未明確轉染對細胞死亡的影響,但可以進一步研究不同轉染條件下細胞的存活率,以確定在提高轉染效率的同時降低細胞死亡的比較好條件。
對基因表達的影響:在微小RNA-1180轉染對腎*細胞生長的影響的研究中,腎*細胞分為兩組:dsControl組和miR-1180組。實時定量(qRT)-PCR檢測p21mRNA的表達變化,結果顯示轉染miR-1180后,786-O和ACHN細胞中p21mRNA水平分別上調(P〈)和(P〈),p21蛋白表達趨勢與qRT-PCR結果相符,CDK4、CDK6和CyclinD1蛋白的表達明顯下調。同時,流式細胞術(FCM)檢測細胞周期變化顯示細胞周期被阻滯在G0/G1期,MTS結果顯示細胞活力明顯降低,集落形成實驗顯示細胞增殖能力降低。結論是miR-1180能******腎*細胞中p21蛋白的表達,并抑制腎*細胞786-O和ACHN的生長1。在微小RNA-330-5p過表達對宮頸*細胞C33A中腫瘤壞死因子受體相關因子4(TRAF4)基因表達的抑制作用和對C33A細胞增殖的影響的實驗中,通過Lipofectamine2000轉染試劑分別向宮頸*細胞系C33A瞬時轉染miR-330-5p模擬物(設為實驗組)或者轉染miR-NC(設為對照組),結果顯示與對照組相比,實驗組C33A細胞中TRAF4mRNA下降(p<),TRAF4蛋白下降(p<)。集落形成實驗顯示,實驗組C33A細胞的增殖能力明顯下降(p<)。結論是miR-330-5p可通過降低宮頸*細胞C33A中TRAF4的表達抑制宮頸*細胞C33A的增殖。 小RNA和質粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。
動物視網膜成像技術為基礎研究提供了有力工具。從小鼠視網膜多種成像方式探討眼科光學成像技術進展:張鵬飛、張廷瑋、宋維業闡述了近年來在小鼠和人眼視網膜高精度光學成像領域出現的技術突破6。幾種在人眼視網膜成像中廣泛應用的光學成像技術在動物視網膜中得到了成功應用,實現了對動物視網膜的高精度細胞級別成像,為科研工作者提供了有力工具。同時,動物視網膜的研究工作也開發了一些新型成像技術或增強了對人眼視網膜功能機理的理解。綜上所述,動物成像技術在磁共振成像、熱成像、X射線發光成像、近紅外高光譜成像、非人靈長類動物超高場磁共振腦成像、新型動物搖籃的小動物多重成像、紅外成像以及動物視網膜成像等方面都取得了***的發展,為動物研究和相關領域的發展提供了重要的技術支持。轉染時推薦使用血清減少或無血清培養基包括陽離子轉染試劑,如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。安徽轉染試劑便宜
化學轉染的效率可能取決于幾個因素,如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質,以及選擇的DNA與試劑比例。上海DOTAP 轉染試劑
RNA轉染試劑在不同細胞類型中的轉染機制存在多種差異。以下將詳細闡述不同RNA轉染試劑在不同細胞類型中轉染機制的差異表現。脂質體轉染試劑:機制概述:脂質體轉染試劑通常由陽離子脂質和中性脂質組成,其轉染機制主要是通過與帶負電的RNA分子結合,形成脂質體-RNA復合物。這個復合物能夠與細胞膜相互作用,通過內吞作用或膜融合等方式進入細胞。進入細胞后,脂質體-RNA復合物逐漸釋放RNA分子,使其能夠在細胞內發揮作用。在不同細胞類型中的表現:在腎*細胞系786-O和ACHN中,目前雖未明確提及脂質體轉染試劑的作用,但可以推測其可能通過類似的機制進入細胞,影響細胞內的基因表達和細胞生長。例如,微小RNA-1180(miR-1180)轉染對腎*細胞生長產生影響,雖然未明確指出轉染試劑類型,但脂質體轉染試劑可能在類似的研究中發揮作用1。在MEF細胞、3T3細胞、Hela細胞及MCF-7細胞中,MessageMax脂質體轉染試劑能將modGFP高效轉染入細胞,并實現modGFP和modmCherry在MEF細胞中的共轉及核內因子nGFP和mTBX5在MEF細胞核中的定位。這表明脂質體轉染試劑在不同類型的細胞中能夠有效地將RNA分子轉運到細胞內,并實現特定蛋白的表達。上海DOTAP 轉染試劑