在腺病毒載體或脂質體的全身遞送后，轉基因表達相對短暫。靜脈注射脂叢的肺表達比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達量每周減少約1log。造成這種現象的機制可能有以下幾種:(a)產生針對外源基因產物的新***抗體，(b)細胞因子介導的啟動子關閉，(c)通過凋亡、先天或適應性免疫反應根除表達細胞以及（d）表達基因的細胞因細胞凋亡而減少是導致表達減少。這些機制具有重要意義，因為不可能重復給藥，而且轉基因凈表達會隨著時間的推移而減少。盡管通過中和或消除細胞因子的產生可以提高肺中的基因表達水平。靜脈給藥引起的毒性可能是由于小鼠轉氨酶水平的增加，在相同劑量下，小鼠肝臟出現組織病理學病變，但肺部沒有不良反應...

Severinoetal.進行的研究也指出了陽離子脂質作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實現了人動力蛋白的表達，但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細胞毒性，并導致活細胞數量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復合物和由魚精蛋白、DNA和脂質層組成的納米顆粒在不同細胞系上的轉染效率:CHO(中國倉鼠卵巢細胞)、HEK293(人胚胎腎細胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細胞)和A17(小鼠*細胞)。魚精蛋白/DNA/脂質納米顆粒在每種細胞系中更有效地實現綠色和紅色熒光蛋白的表達，即使不同細胞系對轉染的敏感性不同。陽離子脂質的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物。不同的β-氨基酯聚...

基于病毒的轉染，或者更具體地稱為轉導，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。逆轉錄病毒，如慢病毒，通常用于穩定轉染。相比之下，腺病毒、腺相關病毒(AAV)和皰疹病毒是不能保證穩定轉染的病毒載體。與非病毒轉染相比，病毒轉導被***認為是一種轉染難以轉染的細胞(如原代細胞)的高效方法。一般來說，逆轉錄病毒只能用于轉染分裂細胞，而腺病毒、AAV和皰疹病毒可用于轉染分裂細胞和非分裂細胞。然而，病毒轉導與較高的細胞毒性相關，并可能造成病毒***的風險。病毒載體通常包含一個病毒包膜，它包圍并保護病毒。表面蛋白可能存在于某些類型的病毒(如腺病毒)的表面，以促進與宿主細胞的接觸和通信。病毒遺傳物質被包...

基于病毒的轉染，或者更具體地稱為轉導，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。逆轉錄病毒，如慢病毒，通常用于穩定轉染。相比之下，腺病毒、腺相關病毒(AAV)和皰疹病毒是不能保證穩定轉染的病毒載體。與非病毒轉染相比，病毒轉導被***認為是一種轉染難以轉染的細胞(如原代細胞)的高效方法。一般來說，逆轉錄病毒只能用于轉染分裂細胞，而腺病毒、AAV和皰疹病毒可用于轉染分裂細胞和非分裂細胞。然而，病毒轉導與較高的細胞毒性相關，并可能造成病毒***的風險。病毒載體通常包含一個病毒包膜，它包圍并保護病毒。表面蛋白可能存在于某些類型的病毒(如腺病毒)的表面，以促進與宿主細胞的接觸和通信。病毒遺傳物質被包...

脂質復合物又稱陽離子脂質-核酸復合物(CLNACs)，是由非離子核酸與陽離子脂質體（CLs）表面結合，**終形成多層脂質-核酸復合物而形成的。帶負電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面，**初與?？吭陉栯x子囊泡表面的核酸分子形成復合物，然后發展到核酸分子持續粘在脂質分子上的階段，脂質雙分子層圍繞緊實的核脂質顆粒。復合物形態的這種異質性可能歸因于囊泡的脂質組成、復合物形成的方式、脂質:核酸比例、核酸結構的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復合物的技術。除了靜電吸引外，疏水相互作用被認為有助于脂質和核酸之間的復合物形成。因此，根據正電荷(陽離子脂質)與負電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比，脂質...

除了mRNA疫苗，DNA疫苗也是不錯的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下，研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進了PG和PAMAM G4復合物的大小、運動性和表面電荷，然后在BALB/c小鼠中測試疫苗設計的免疫原性。根據研究結果，由于同時包裝在PG和PAMAM G4包膜中，DNA疫苗的免疫原性增加。在給予PG包被的DNA疫苗復合物的小鼠中，觀察到**強的t細胞反應，并且這些反應明顯高于給予裸DNA組合和PAMAM 4G包被的DNA組合的動物組。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質體囊泡中的技術，開發出了...

核酸與轉染試劑的比例對轉染效率也有影響。在一項涉及原代人成肌細胞的研究中，使用不同的核酸比例來比較轉染效率的影響，轉染試劑包括FuGENE6、Effectene和ExGen500(一種基于pei的試劑)。該研究的一個***發現是，轉染效率可能不一定與所用試劑的體積直接相關。例如，2μgDNA與5μLFuGENE6試劑的比例被證明可以產生比較好的轉染效率，而更低或更高的DNA與試劑的比例并不能提高效率。在另一項涉及轉染人胃腺*細胞系的研究中也觀察到類似的發現，即在一系列組合中使用比較高轉染試劑與DNA比體積測試時，轉染效率并未達到比較好。使用不成比例的高轉染試劑量會導致不必要的細胞毒性，從而降低...

評估轉染效率至關重要，特別是在需要高轉染效率以保證特定下游靶標轉錄后調控的功能研究中?？梢赃x擇多種策略來評估轉染效率。實時聚合酶鏈反應(qPCR)是一種通過直接測量特定外源蛋白表達水平來評估轉染效率的定量方法。細胞內核酸或其他可能受到外源核酸(如miRNAs)影響的細胞內核酸。在瞬時轉染的情況下，每次轉染后都應進行qPCR，以確保良好的轉染效率，然后再進行下游實驗。與質粒報告系統共轉染是另一種策略，可以通過表達特定的報告蛋白(如熒光素酶或β-半乳糖苷酶)來評估轉染效率。采用小RNA熒光素酶報告系統以干擾(RNAi)研究為例，miRNA轉染成功的標志是熒光素酶活性下調，這是由于miRNA與轉錄的...

基因***是陽離子聚合物作為轉染劑的主要應用。通過攜帶質粒DNA、mRNA和siRNA，陽離子聚合物實現了與***相關的功能，如基因增強、基因抑制和基因組編輯?；?****直接、或許也是**簡單的策略是添加新的蛋白質編碼基因。在當前**背景下，mRNA疫苗的大規模使用點燃了人們對核酸藥物的濃厚興趣。理論上，mRNA能夠表達任何一種蛋白質;因此，除了作為疫苗預防傳染病外，它還可以用于***其他疾病。目前的mRNA傳遞技術是基于脂質納米顆粒平臺，該技術的**掌握在少數幾家公司手中。此外，由脂質納米顆粒組成的mRNA疫苗應在**溫下儲存和運輸，這嚴重限制了疫苗在高溫或條件有限的地區的使用。因此，陽...

脂質復合物(CLNACs)通過網格蛋白參與的內吞作用進入細胞，并被困在核內小體中，從這些囊泡結構中釋放出來，進入核周區域，***進入細胞核。內吞作用在一定程度上取決于脂質體載體的物理化學性質。Friend和同事描述了可能由脂質體與核膜融合而形成的囊泡和網狀核內膜。**近有研究表明，很大一部分從核內體釋放到細胞質質的質粒由于與細胞質中的大離子凝聚劑結合而失去活性。這可能解釋了脂質轉染所觀察到的低且可變的轉染率。雖然這些脂質載體從細胞外部到細胞核的路徑尚未完全確定，但核酸能夠產生其效果本身就是一項驚人的壯舉。至少對于質粒而言，較小的結構體比較大的質粒具有更高的轉染率。核酸外排，雖然不是常見的報道，...

基因***是陽離子聚合物作為轉染劑的主要應用。通過攜帶質粒DNA、mRNA和siRNA，陽離子聚合物實現了與***相關的功能，如基因增強、基因抑制和基因組編輯。基因*****直接、或許也是**簡單的策略是添加新的蛋白質編碼基因。在當前**背景下，mRNA疫苗的大規模使用點燃了人們對核酸藥物的濃厚興趣。理論上，mRNA能夠表達任何一種蛋白質;因此，除了作為疫苗預防傳染病外，它還可以用于***其他疾病。目前的mRNA傳遞技術是基于脂質納米顆粒平臺，該技術的**掌握在少數幾家公司手中。此外，由脂質納米顆粒組成的mRNA疫苗應在**溫下儲存和運輸，這嚴重限制了疫苗在高溫或條件有限的地區的使用。因此，陽...

基因注射包括通過注射將所需的核酸物質直接輸送到宿主細胞核中。當細胞轉染具有挑戰性時，特別是當需要對宿主細胞進行遺傳修飾時，這種方法是一種很好的替代方法。與其他非病毒基因傳遞方法一樣，沒有一種方法可以適用于所有不同的細胞類型，選擇合適的細胞類型和核酸大小對于確?；蜃⑸涞某晒χ陵P重要。例如，先前的一項研究報道了成功生成表達cre重組酶(大小～1,000bp)的轉基因小鼠細胞系。另一方面，在一項體內研究中，表達轉基因的小鼠肌纖維數量與注射次數和給藥質粒劑量相關。另一項體外研究進一步支持了這一觀點，該研究報道了表達報告基因的宿主細胞的數量與注入細胞的核酸量密切相關。此外，微針的大小、形狀和額外涂層的...