湖南重慶轉染試劑

脂質復合物又稱陽離子脂質-核酸復合物(CLNACs)，是由非離子核酸與陽離子脂質體（CLs）表面結合，**終形成多層脂質-核酸復合物而形成的。帶負電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面，**初與停靠在陽離子囊泡表面的核酸分子形成復合物，然后發展到核酸分子持續粘在脂質分子上的階段，脂質雙分子層圍繞緊實的核脂質顆粒。復合物形態的這種異質性可能歸因于囊泡的脂質組成、復合物形成的方式、脂質:核酸比例、核酸結構的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復合物的技術。除了靜電吸引外，疏水相互作用被認為有助于脂質和核酸之間的復合物形成。因此，根據正電荷(陽離子脂質)與負電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比，脂質體可能通過與細胞表面的蛋白聚糖基團等帶電殘基的靜電相互作用，或通過與質膜疏水區域的疏水相互作用進入細胞。轉染時推薦使用血清減少或無血清培養基包括陽離子轉染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。湖南重慶轉染試劑

**近一項與抗血管生成基因傳遞高度相關的發現是，陽離子脂質體（CLs）選擇性地靶向**的血管系統。陰離子或電中性脂質體沒有發現這種作用。Campbell和他的同事[95]發現，與電中性脂質體相比，使用CLs在**血管內皮細胞(VECs)中積累更多，CLs通過添加5mol%聚乙二醇來穩定。在兩種人類**類型(LS174T和MCAIV)和兩個位置(顱窗和背側皮膚褶腔)中發現了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的，這可能與該技術是否足以根除足夠數量的**VECs以實現**消退反應有關。有趣的是，注射后24小時，脂質體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。四川轉染試劑公司在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前，應先確定其實驗需要。

RNA和信使RNA與DNA轉染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。與涉及DNA的轉染相比，RNA轉染可能產生更高的轉染效率，因為后者不需要穿越核膜。在不需要基因組整合、轉錄和轉錄后處理的情況下，RNA轉染也可能加速所需蛋白質的產生。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發癥，從而允許表達特定的，所需的蛋白質。然而，RNA轉染后，蛋白質表達是短暫的，與DNA相比，RNA的穩定性相對較差，因此在細胞內運輸時更容易降解。小RNA是長度為18-200個堿基對(bp)的RNA分子，具有調控轉錄后基因調控和RNA修飾的能力。小RNA包括microRNAs(miRNAs)、小干擾RNA(siRNA)、短發夾RNA（shRNA）等。microRNAs和piRNAs都是內源性單鏈小RNA。miRNAs(18-25bp)通過抑制目標mRNA或干擾其翻譯起始，參與下游mRNA的轉錄后調控。與miRNAs和piRNAs類似，siRNA也在調控轉錄后基因表達中發揮作用。siRNA的長度通常為20-24bp，可表達為內源性或外源性雙鏈小RNA。shRNA是一種具有發夾環的內源性雙鏈小RNA。shRNA可以結合mRNA上的互補序列來降解它。

肌內注射脂質體不能引起強烈的毒性反應，這與肺內或靜脈注射途徑的情況不同。幾項體內研究表明，pDNA載體的肺內遞送是促炎th1樣細胞因子的產生和隨后浸潤細胞涌入肺區域的原因。在任何情況下，陽離子脂質本身不會引起免疫反應，而且這種效果不是由于pDNA制備中存在內***。在一項囊性纖維化臨床試驗中，急性輕度流感樣癥狀被認為是由DNA依賴效應引起的，而對照組(*脂質組)沒有觀察到這種效應。有幾種方法可以降低載體CpG基序的免疫刺激作用。這些包括這些基序中胞嘧啶堿基的甲基化，中和序列的添加，CpG基序的消除，使用化學或生物方法的免疫抑制，將載體靶向遠離網狀內皮系統的細胞，以及抑制內粒體酸化。研究表明，系統地消除pDNA載體中約50%的CpG基序，可導致體外小鼠脾細胞和靜脈注射或鼻內滴注小鼠肺中細胞因子分泌減少。該方案還增加了轉基因表達水平。利用肌內注射等途徑，遠離網狀上皮系統進行被動靶向，也能提高轉基因表達水平。在腺病毒載體或脂質體的全身遞送后，轉基因表達相對短暫。

轉染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉染效率的潛在因素。Lipofectamine2000試劑與非冷凍對照相比，至少經歷一次凍融循環后，HEK293、Neuro2α、C2C12成肌細胞和肌管、hTERTMSC、SMA和HepG2細胞系的轉染效率更高，且細胞活力不受影響。一種可能的解釋是，冷凍解凍可以增強分子重排分散，從而允許更高的分散率，從而允許核酸之間很大程度的接觸，形成更多的轉染復合物。然而，還需要更多的研究來支持這一做法，因為凍融過程也被認為會導致再結晶，從而破壞一些化學物質的結構。在轉染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質粒)轉運到宿主細胞中。貴州DOTAP 轉染試劑

轉染是將外源核酸送入細胞的過程，其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細胞中表達。湖南重慶轉染試劑

為了在體外和體內可重復地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉染試劑。雖然有幾項研究已經調查了血液成分如何使脂質和聚合物納米顆粒不穩定，對于介導細胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統給藥進入血液后會發生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質體成分不強烈附著于復合物將從顆粒中脫落，而新的成分，如脂蛋白，可以粘附在復合物的表面。這不僅會導致顆粒的不穩定，還會改變生物分布或促進體內***。了解在體內遞送的每個階段(在給藥部位，在血液循環過程中，在***和組織的細胞外基質中，以及**終進入靶細胞時)，多聚物和脂聚物的組成如何變化，可能有助于設計具有更高穩定性的合成載體系統。湖南重慶轉染試劑