核酸內切酶VIII(EndonucleaseVIII)是一種來自大腸桿菌的DNA損傷修復酶,具有以下特點:1.**雙功能活性**:核酸內切酶VIII具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。2.**釋放受損嘧啶堿基**:N-糖基化酶活性可以釋放雙鏈DNA上受損的嘧啶堿基,如胸腺嘧啶乙二醇和尿嘧啶乙二醇,生成一個脫嘌呤(apurinic,AP)位點。3.**切割AP位點**:AP裂解酶活性可以切割AP位點的3'和5'端,產生一個具有3'和5'磷酸的堿基缺口(Gap)。4.**識別并切除受損堿基**:核酸內切酶VIII可以識別并切除多種受損堿基,包括尿素、5,6-二羥基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羥基-5-甲內酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羥基-5,6-二氫胸腺嘧啶和甲基羥丙二酰脲。5.**與EndonucleaseIII的區別**:雖然核酸內切酶VIII與核酸內切酶III相似,但核酸內切酶VIII具有β和δ裂解酶活性,而核酸內切酶III具有β裂解酶活性。6.**應用領域**:核酸內切酶VIII可以應用于單細胞凝膠電泳、NGS建庫中DNA損傷修復、酶法合成DNA中釋放DNA鏈、堿洗脫,搭配尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)進行含U片段的克隆等。
磁珠法在基因克隆中的應用主要體現在以下幾個方面:1.**質粒DNA的提取**:磁珠法可以用于從細菌細胞中提取質粒DNA,這對于質粒的克隆和表達至關重要。通過磁珠法提取的質粒DNA純度高,適合用于后續的酶切、連接、轉化等分子克隆步驟。2.**基因組DNA的提取**:磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA,這對于基因組的克隆和分析非常重要。提取的基因組DNA可以用于PCR擴增、基因表達分析、基因突變檢測等。3.**mRNA的提取和純化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和純化mRNA,這對于cDNA的合成和基因表達分析非常關鍵。磁珠法提取的mRNA純度高,可以用于后續的cDNA合成和RT-PCR等實驗。4.**PCR產物的純化**:磁珠法可以用于純化PCR產物,去除反應中的酶、dNTPs和其他雜質,為克隆PCR產物提供高純度的DNA模板。5.**DNA片段的篩選和回收**:在基因克隆過程中,可能需要從多個DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收,提高克隆效率。6.**自動化和高通量操作**:磁珠法易于與自動化設備結合,適合高通量樣本處理,這對于大規模基因克隆項目尤為重要。自動化操作減少了人為操作誤差,提高了實驗的重復性和可靠性。Recombinant Cynomolgus CD69/CLEC2C Protein,His TagProbe qPCR Mix (2×) 支持多重qPCR,即在單個反應中同時檢測多個靶標基因 。
磁珠法病毒RNA/DNA抽提試劑盒是一種高效、便捷的工具,適用于從各種生物樣本中提取病毒核酸。以下是一些相關產品的信息和特點:1.**德諾優品病毒DNA/RNA提取試劑盒**:-采用自主磁珠純化技術,適合從血漿、血清等樣本中分離純化病毒的DNA或RNA。-操作簡單,整個過程可在12-25分鐘內完成,提取的核酸可直接用于下游應用,如PCR和NGS等。-提取的核酸純度高,質量穩定可靠,適合低拷貝數的病毒檢測。2.**MolPure®磁珠法病毒DNA/RNA提取試劑盒**:-適用于從全血、血清、腦脊液等樣本中提取病毒核酸。-無需使用有毒的酚氯仿,安全快捷,提取過程可在40分鐘內完成。-提取的產物可直接用于PCR、qPCR等實驗。3.**FineMag快速磁珠法病毒DNA/RNA提取試劑盒**:-適合從全血、唾液、拭子等樣本中純化高質量病毒核酸,提取過程只需13分鐘。-無需使用有毒的化學試劑,操作安全便捷。4.**MagMAX病毒RNA/DNA提取試劑盒**:-適用于從全血、血清、口腔液等樣本中提取病毒核酸。-該試劑盒支持高通量提取,適合自動化操作,提取效率高,適合直接用于PCR和RT-PCR。
在PCR實驗中,防止非特異性擴增的關鍵在于優化實驗條件和采取一些特定的策略。以下是一些有效的方法:1.**優化引物設計**:引物設計是PCR成功的關鍵。應確保引物序列具有高度特異性,避免與非目標序列互補。使用在線工具進行引物設計,并進行BLAST搜索以確認特異性。2.**使用熱啟動PCR**:熱啟動PCR技術可以抑制室溫下的DNA聚合酶活性,減少非特異性擴增。這種方法通過在高溫下激起酶的活性,從而在PCR體系配制階段降低引物與模板或引物與引物之間的非特異性結合。3.**調整Mg2+濃度**:Mg2+濃度對PCR擴增的特異性和產量有重要影響。過高的Mg2+濃度可能導致非特異性擴增,因此需要優化Mg2+濃度以獲得比較好的結果。4.**退火溫度優化**:退火溫度對PCR特異性至關重要。較高的退火溫度有助于減少非特異性結合,但過高的退火溫度可能會降低引物與模板的結合效率。通常,退火溫度設置比引物的Tm值低5°C左右。5.**使用降落PCR**:降落PCR(TouchdownPCR)通過在初始循環中使用較高的退火溫度,然后逐漸降低退火溫度,從而在PCR開始時減少非特異性擴增,同時在后續循環中保持特異性擴增。去泛素化酶可以去除泛素化標記,這一步驟是泛素化過程的逆轉過程,它允許細胞對泛素化事件進行精細調控。
Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌(Thermophilic Geobacillus sp)DNA聚合酶I衍生的酶,缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關鍵信息:來源和特性:Bst Plus DNA Polymerase 具有更強的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性,適合用于抗污染的等溫擴增反應,如LAMP和CPA等。應用:主要應用于等溫DNA擴增,包括環介導等溫擴增(LAMP)和其他等溫擴增技術。規格:活性定義:1 U指的是在65°C下30分鐘內將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質中的酶的量。溶液成分:包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油,pH 7.5 @ 25℃。產品形式:提供的產品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL),貨號14402ES,以及凍干粉形式的產品,貨號14405ES,不含甘油。靈敏度和穩定性:Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度,低至5copies目的基因可測,且在飛克(fg)級別的模板量下也能快速達到閾值。在37°C下,該酶可以保持相對穩定的效應長達5天,并且在-20℃下可以穩定保存2年。儲存條件:建議在-25℃至-15℃下儲存,以保持產品活性,并避免反復凍融。Ultra-Long Master Mix 是一種用于長片段PCR擴增的預混液,它含有經過特殊修飾的熱穩定Taq DNA聚合酶。Recombinant Human Nectin-2/CD112 Protein
泛素激起酶E1(Ubiquitin-activating enzyme E1)在ATP的存在下激發泛素分子,形成E1-泛素硫酯中間體。Recombinant Human S100B
Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,簡稱λExonuclease)是一種具有特定特性和應用的酶,以下是其主要特點和應用:1.**特異性作用**:λExonuclease是一種5'→3'核酸外切酶,能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。2.**酶切活性**:對單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低,不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**嗜磷酸性**:該酶具有非常強的嗜磷酸性,磷酸化的核酸鏈與非磷酸化的核酸鏈的切割效率相差達200倍以上。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一種具有高度持續性的堿性核酸外切酶,可以連續地將核酸切割成為單個堿基,切割比較高速率可以達到1000nt/S。5.**應用領域**:-生成單鏈PCR產物用于DNA測序。-DNA單鏈構象多態性(SSCP)分析。-滾環擴增。-從雙鏈DNA片段生成單鏈DNA。-PCR產物的克隆。-質粒制備凈化。6.**酶活性定義**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37oCin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。Recombinant Human S100B