培養基制備的基本方法和注意事項:1.培養基配方的選定同一種培養基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標準方法,應嚴格按其規定進行配制外.一般均應盡量收集有關資料.加以比較核對.再依據自己的使用目的加以選用,記錄其來源。2.培養基的制備記錄每次制備培養基均應有記錄,包括培養推各稱,配方及其來源.和各種成份的牌號。好終pH值、消毒的溫度和時間制各的日期和制備者等,記錄應復制一份,原記錄保存備查,復制記錄隨制好的培養基一同存放、以防發生混亂。培養基制備器滅菌鍋關閉放氣閥前,將鍋內氣體排干凈。中國香港瓊脂培養基 培養基制備器
天然培養基中血清主要作用:對培養中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞,如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發現的,則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經被較廣用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護細胞免受機械損傷,特別是在懸浮培養攪拌時,粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝中起重要作用,如SeO3、硒等。廣東不銹鋼內桶培養基制備器培養基成份的混合與溶化:培養基所用化學藥品均應是化學純的。
配制培養基的原則:調節氧化還原電位(Eh)各種微生物對培養基的Eh要求不同。適宜好氧微生物生長的Eh值一般為+0.3~+0.4V,厭氧微生物只能在+0.1V以下生長,因此,培養好氧微生物必須保證氧的供應,可在培養基中加入氧化劑提高Eh值。調節滲透壓多數微生物能耐受較大范圍滲透壓的變化。培養基中營養物質的濃度過大,會使滲透壓過高,使細胞發生質壁分離而抑制微生物生長。低滲溶液則使細胞吸水膨脹易破裂,因此,配制培養基時要掌握營養物質的濃度。常在培養基中加人適量的Nacl以提高滲透壓。原料來源的選擇力求節約:配制培養基還應遵循力求節約的原則,盡量選用價格便宜、來源方便的原料。特別是在工業發酵中,培養基用量大,更應注意利用低成本的原料,降低產品成本。
微生物檢驗培養基制備的要點:對LST培養基進行滅菌時,發酵管內可能存在氣泡。為了防止發酵管內形成氣泡,可以采取以下措施:倒置的小管充滿培養基,不留氣泡,然后加入含有LST的試管中。在關閉殺菌鍋的排氣閥之前,將鍋內的氣體排空。試管塞不要塞得太緊。使用硅膠塞時,請勿使用橡膠塞。不可過早打開殺菌鍋,等殺菌鍋內的氣壓和溫度降到與室溫相同或相差不大時再打開殺菌鍋。如果按照以上方法操作還有氣泡,可以用水作為培養基組的對照試驗。如果培養基組有氣泡,對照組沒有氣泡,可以確定培養基本身原因。在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養基時,常需在培養基中加入少量螯合劑。
培養基的脫氣:必要時,在使用前將養基放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15min,加熱時松開容器蓋子;加熱后蓋緊蓋子,并迅速冷卻至使用溫度。3.添加成分的加入:對熱不穩定的添加成分應在培養基冷卻至47℃~50℃時加入,滅菌的添加成分加入前應冷卻至室溫,避免冷的液體會造成瓊脂凝膠或形成片狀物。4.培養基的棄置:所有污染和未使用的培養基的棄置應采用安全的方式,并符合相關法律法規的規定。每批培養基應另外分裝20ml培養基于一小玻璃瓶中,隨該批培養基同時滅菌,以為測定該批培養基較終pH之用。培養基制備器內部的管道和容器可以更換,方便移除和清洗。海南全自動培養基制備器
制備培養基的操作要點:易于控制微生物的生長代謝狀態。中國香港瓊脂培養基 培養基制備器
培養基的質量測試:每批培養基制備好以后,應仔細檢查一遍,如發現破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染等、均應挑出棄去。并測定其較終pH.將全部培養基放入36±1°C恒溫箱培養過夜,如發現有菌生長,即棄去。用有關的標準菌株接種1~2管或瓶培養基,培養24~48小時,如無菌生長或生長不好。應追查原因并重復接種一次,如結果仍同前,則該批培養基即應棄去,不能使用。培養基的保存:培養基應存放于冷暗處,較好能放于普通冰箱內。放置時間不宜超過一周,傾注的平板培養基不宜超過3天。每批培養基均必須附有該批培養基制備記錄副頁或明顯標簽。中國香港瓊脂培養基 培養基制備器