血清培養基主要問題:血清的成份可能有幾百種之多,對其準確的成份、含量及其作用機制不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難。血清都是批量生產,各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標準化和連續性受到限制。對大多數細胞,在體內狀態,血清不是它們接觸的生理學液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內的正常狀態,血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時抑制另一類細胞生長(表皮細胞)。培養基的滅菌:一般培養基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。福建自動攪拌培養基制備器
Systec培養基準備器可以快速的準備好滅菌,放入滅菌鍋,“水套系統”里加入夾層水(滅菌鍋與滅菌鍋腔體之間的夾套水用于有效的熱傳導),加入培養基原料,準備啟動滅菌程序。培養基可以直接在Sampleprep內懸浮溶解。強力磁力攪拌確保培養基在內腔里混合的均勻性,并防止凝結。培養基可以在滅菌前用WATERBATH(水浴)模式預先溶解。同時,直觀的圖形化界面使沒有經過專門培訓的人員也能方便的操作。用戶可以自定義設置多達50個滅菌程序,比如滅菌溫度、時間、分裝溫度等。它們可以被儲存起來并隨時調用。寧夏不銹鋼內桶培養基制備器全自動培養基制備儀主要特點:不會產生氣泡。
培養基的類型-根據培養基的物理狀態來區分,可以分為固體培養基、液體培養基和半固體培養基。1)液體培養基所配制的培養基是液態的,其中的成分基本上溶于水,沒有明顯的固形物,液體培養基營養成分分布均勻,易于控制微生物的生長代謝狀態。2)固體培養基在液體培養基中加入適量的凝固劑即成固體培養基。常用作凝固劑的物質有瓊脂、明膠、硅膠等,以瓊脂較為常用。固體培養基在實際中用得十分多方面。在實驗室中,它被用作微生物的分離、鑒定、檢驗雜菌、計數、保藏、生物測定等。3)半固體培養基如果把少量的凝固劑加入到液體培養基中,就制成了半固體培養基。以瓊脂為例,它的用量在0.2~1%之間。這種培養基有時可用來觀察微生物的動力,有時用來保藏菌種。
實驗室在制作培養基時候的經驗總結:1、培養基pH值的調正:pH因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,培養基各成分完全溶解后,應進行pH的初步調正。例如,牛肉浸液約可降低pH0.2,而腸浸液pH卻會有明顯的升高。因此,對這個步驟,操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的較終pH,保證培養基的質量。pH調整后,還應將培養基煮沸數分鐘,以利培養基沉淀物的析出。2、培養基過濾澄清:液體培養基必須澄清,瓊脂培養基也應透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養基可用濾紙過濾法,濾紙應折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。培養基制備器系統自動調整供給樣品劑量保證了重現性結果。
分接觸和利用培養基中的養料,適于作生理等研究,由于發酵率高,操作、方便,也常用于發酵工業。(3)半固體培養基。是在液體培養基中加入少量凝固劑而呈半固體狀態。固體培養基的制作步驟:1、首先我們要準備好一個裝有1000ml的燒杯,然后在準備好的杯中在放入500ml的蒸餾水,在將牛肉膏和蛋白胨、氯化鈉這些都溶解在水中。2、其次我們在調節PH值,調節時需要百分之10的氫氧化鈉溶液,將PH值調到7.2,在此也要定容到1000ml,較后在將這些液體都分別放入10個錐形瓶內,每一瓶都裝100ml。分裝容器應預先清洗干凈并經干烤消毒,以利于培養基的徹底滅菌。寧夏不銹鋼內桶培養基制備器
一般培養基用0.IMPa(121℃)維持15~30min即可徹底滅菌。福建自動攪拌培養基制備器
對LST(月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯)培養基進行滅菌時,有時發酵管內會有氣泡。為防止發酵管內產生氣泡,可以采取以下幾項措施:(1)小倒管浸滿培養基(不留氣泡)后再加入到盛LST的試管中。(2)滅菌鍋關閉放氣閥前,將鍋內氣體排干凈。(3)試管塞不要塞得太緊(使用硅膠塞的時候),勿使用橡皮塞。(4)不要過早打開滅菌鍋,要等滅菌鍋內氣體和溫度都降到與室溫一致或相差不大時再打開滅菌鍋。如果以上情況都做到還有氣泡,可用水做培養基組的對照試驗,若培養基組有氣泡,而對照組沒有氣泡,可確定是培養基自身的原因。福建自動攪拌培養基制備器