培養基的制備:(1)稱量:根據培養基的配方,稱取適量藥品于搪瓷杯中;(2)溶解:用量筒量取所需水量,置電爐上加熱,一邊攪拌,至完全溶解,加熱至沸騰,拔掉電源,待冷卻;(3)分裝:根據不同需要,立即趁熱分裝入三角瓶或試管中,分裝三角瓶以不超過三角瓶一半為宜,分裝試管一般為管長的1/5(需根據試管的大小而定).液體培養基如乳糖膽鹽發酵培養基約分裝10毫升左右.(4)塞硅膠塞:裝好培養基的試管應塞上硅膠塞,松緊合適,緊貼管壁,不留縫隙,約1/2塞入內,這樣即可過濾空氣,避免雜菌侵入,又可減緩培養基水分的蒸發.(5)包裝:三角瓶棉塞頭部應用錫箔紙包扎,試管集中于試管簍.2、無菌水的制備:(1)用10ml移液管量取9.2ml蒸餾水(稀釋水)裝入試管中.(2)用100ml量筒量取95ml蒸餾水(稀釋水)裝入150ml的三角瓶中.可置少許玻璃珠于三角瓶內,防止暴沸.(3)量取240ml蒸餾水(稀釋水)于250ml的三角瓶中,塞上瓶塞用牛皮紙包扎好,高壓滅菌備用。培養基是生物制品領域中常用的物質,在細菌和細胞培養中十分必要。湖南培養基制備器安裝調試
配制培養基的原則:控制培養基的條件,控制培養基的pH配制培養基必須根據微生物的特點調節pH。各大類微生物要求的適宜生長pH范圍不同。如霉菌與酵母菌一般為5.0-6.0,細菌為6.5-7.5.放線菌為7.5-8.5.培養基的pH與其C/N有極大關系。C/N高的培養基,例如培養各種的培養基,經培養后其pH明顯下降;相反,C/N低的培養基,例如培養一般細菌的培養基,經培養后,其pH則明顯上升。這是由于營養物質的消耗與代謝產物的積累,改變了培養基的pH,若不及時控制,將導致菌體生長停止。培養基制備器多少錢培養基制備器系統自動調整供給樣品劑量保證了重現性結果。
培養基的實驗室制備:①概述:培養基和試劑的滅菌通常采用濕熱滅菌或過濾滅菌。有些培養基無需高壓滅菌,可煮滅菌。如,含亮綠的腸道菌培養基對光和熱特別敏感,應在煮沸后快速冷卻,避光保存。同樣,一些試劑則不需要滅菌,直接使用(參見相關標準或生產廠商的使用說明)。②濕熱滅菌;p濕熱滅菌在高壓鍋或培養基制備器中進行。高壓霉菌一般采用121℃±3℃霉菌15min。如果培養基的體積超過1000mL,要對滅菌條件進行適當的調整。所有操作均要按照標準和使用說明的規定進行。注:大容量培養基(>1000mL)滅菌時可能會造成過度加熱。加熱后應采取適當的方式冷卻,防止沸溢。這對大容量培養基和敏感性培養基(如含亮綠的培養基)是非常重要的。
實驗室在制作培養基時候的經驗總結:1、培養基成份稱量:培養基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂,較好一次完成,不要中斷。可將配方置于傍側,每稱完一種成分即在配方上做出記號,并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側,每種稱取完畢后,即移放于右側。完全稱取完畢后,還應進行一次檢查。2、培養基成份的混合與溶化:培養基所用化學藥品均應是化學純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養基中,使細菌不易生長。較好使用不銹鋼加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置于高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。全自動培養基制備儀主要特點:保證細菌不被引入容器中。
血清培養基主要問題:血清的成份可能有幾百種之多,對其準確的成份、含量及其作用機制不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難。血清都是批量生產,各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標準化和連續性受到限制。對大多數細胞,在體內狀態,血清不是它們接觸的生理學液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內的正常狀態,血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時抑制另一類細胞生長(表皮細胞)。培養基制備器應存放于冷暗處,較好能放于普通冰箱內。福建自動攪拌培養基制備器
培養基長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質破壞,如使糖類物質形成氨基糖、焦糖。湖南培養基制備器安裝調試
溶化:培養基放入燒杯或瓷缸中,慢慢加入少量所需水,邊加入邊用玻璃棒攪拌。如果培養基中不含有瓊脂,培養基不需要加熱;如果含有瓊脂,則需要用本生燈或電磁爐加熱煮沸,完全溶解后,再補齊所需水,并攪拌均勻。如果配置的培養基量很大,可用不銹鋼鍋加熱溶化,可先用溫水加熱并隨時攪動,防止焦化,如有焦化現象,配制的培養基就不能使用,要重新配制。配制培養基時不可用銅或鐵的容器溶化,因銅或鐵制容器可能會使培養基中的銅和鐵的含量超標,影響實驗(培養基中銅含量大于0.3mg/L,細菌不宜生長,鐵含量超過0.14mg/L,妨礙細菌產有害)。對容易發生反應,產生沉淀的藥品,要分開溶解,較后加入培養基,如磷酸二氫鉀和硫酸鎂。湖南培養基制備器安裝調試
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