培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配制好的培養液中取少量加入營養瓊脂于恒溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果;前者應在投產前及其后的每6個月進行驗證,后者應在每次除菌前、后進行驗證工作(至少應在除菌后進行一次)。另外,應將有毒區與無毒區嚴格分開,并有各自獨自的空氣凈化系統及孵室,有毒區對無毒區應保持相對負壓,防止病毒對培養細胞(尤其是細胞庫)的污染。培養基,是指供給微生物、植物或動物生長繁殖的,由不同營養物質組合配制而成的營養基質。浙江培養基制備器哪個品牌好
利用三角培養瓶制備培養基:包扎,分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。滅菌,按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養成分會被破壞,培養基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。擺斜面,滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個斜面,約占試管長度的1/2。貯存,培養基在30℃下放置,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。培養基是細胞生長的必需營養物質,利用三角培養瓶制備培養基可按照以上步驟操作,在使用前需確保培養基的無菌性,以免影響細胞正常繁殖。內蒙古瓊脂培養基制備器對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基),較長時間的貯存,必須放在3~6℃的冰箱內。
培養基的性能測試:外觀控制:制備好的培養基應有相應的顏色,一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化,是否蒸發/脫水。污染控制:從每批制備好的培養基中選取部分進行污染測試(空白試驗),確定無微生物生長方可使用。同一種培養基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標準方法,應嚴格按其規定進行配制外,一般均應盡量收集有關資料,加以比較核對,再依據自己的使用目的,加以選用,記錄其來源。每次制備培養基均應有記錄,包括培養基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號,很終pH值、消毒的溫度和時間制備的日期和制備者等,記錄應復制一份,原記錄保存備查,復制記錄隨制好的培養基一同存放、以防發生混亂。
培養基的類型-根據培養基的物理狀態來區分,可以分為固體培養基、液體培養基和半固體培養基。1)液體培養基所配制的培養基是液態的,其中的成分基本上溶于水,沒有明顯的固形物,液體培養基營養成分分布均勻,易于控制微生物的生長代謝狀態。2)固體培養基在液體培養基中加入適量的凝固劑即成固體培養基。常用作凝固劑的物質有瓊脂、明膠、硅膠等,以瓊脂較為常用。固體培養基在實際中用得十分多方面。在實驗室中,它被用作微生物的分離、鑒定、檢驗雜菌、計數、保藏、生物測定等。3)半固體培養基如果把少量的凝固劑加入到液體培養基中,就制成了半固體培養基。以瓊脂為例,它的用量在0.2~1%之間。這種培養基有時可用來觀察微生物的動力,有時用來保藏菌種。培養酵母菌一般用麥芽汁培養基,培養霉菌則一般用查氏合成培養基。
培養基配制:配制用水,培養基的大部分是水,所以水的質量直接影響培養基的質量。按Waymouth標準,水的電阻應為200萬歐姆,一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。培養基:培養基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調pH至7.2-7.4,若pH值超過7.6或遠低于6.8,則大多數細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。血清:培養中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養細胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制,可選用無血清培養基。平板培養基要除去冷凝水,否則將影響平板分離培養效果。內蒙古瓊脂培養基制備器
培養基的實驗室制備:正確制備培養基時微生物檢驗的較基礎步驟之一。浙江培養基制備器哪個品牌好
微生物檢驗培養基制備的要點:調培養基pH,雖然中海培養基中含有緩沖物質,可以盡量使培養基的pH值保持在標準范圍內,但如果配制的培養基不能要求,則必須進行必要的調整。如果您有校準過的pH計,則可以使用pH計。如果沒有,可以使用精確的pH試紙,然后根據需要使用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸進行微調。使用0.1氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸進行調整至所需的pH值。培養基有酸性或堿性,pH值一般為7.4~7.6。對于需要用氫氧化鈉高壓滅菌的介質,將pH調至比要求值高0.1~0.2個單位,因為用氫氧化鈉調節時,高壓滅菌后介質的pH值要降低0.1~0.2。如果微生物培養基中含有碳酸鈣,則無需調整pH值。浙江培養基制備器哪個品牌好
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