美國(guó)藥典（USP）對(duì)宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的規(guī)定：美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘余限度不得超過(guò)100pg/劑量，對(duì)于大劑量的如單克隆抗體的生物制品，根據(jù)其殘余DNA來(lái)源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10ng/劑量...

如今，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)是一種優(yōu)先的支原體檢測(cè)方法，因?yàn)樗鼫?zhǔn)確、靈敏且省時(shí)。與常規(guī)PCR不同，qPCR允許實(shí)時(shí)觀察支原體DNA的DNA擴(kuò)增，因?yàn)樘禺愋砸镌跓晒馓结槾嬖诘那闆r下與其靶序列結(jié)合，從而導(dǎo)致DNA擴(kuò)增和熒光增強(qiáng)。此外，qPCR比常...

磁珠法核酸提取過(guò)程中的常見(jiàn)誤區(qū)--洗滌次數(shù)越多，洗滌效果越好提取得到的核酸雜質(zhì)過(guò)多時(shí)，使用者會(huì)考慮多進(jìn)行幾次洗滌，以得到更為純凈的核酸。增加洗滌次數(shù)確實(shí)有利于提純核酸，但考慮到每次洗滌都會(huì)損失一定量的核酸，且增加了核酸斷裂水解的可能性，所以一般來(lái)說(shuō)洗滌次數(shù)控制...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)：《美國(guó)藥典》和《歐洲藥典》將高靈敏度、高特異性的qPCR法和非序列特異性的DNA結(jié)合蛋白法作為宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的推薦方法；《中國(guó)藥典》則收錄了特異性高的定量熒光探針qPCR法和半定量的DNA探針雜交法以及非序列特異性的熒光染色法。...

南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的支原體檢測(cè)試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些？①操作簡(jiǎn)單：樣品操作十分簡(jiǎn)便，無(wú)需自配試劑，且樣品無(wú)需離心富集，節(jié)省大量時(shí)間；②樣品需求量少：只需500uL樣品進(jìn)行前處理即可，無(wú)需進(jìn)行樣品離心富集。③檢測(cè)用時(shí)較短：蕞快2h即可出結(jié)果，是CGT領(lǐng)...

傳統(tǒng)核酸提取方法和磁珠法核酸提取的優(yōu)缺點(diǎn)比較：傳統(tǒng)核酸提取法磁珠法技術(shù)簡(jiǎn)單高質(zhì)量、高通量手工提取自動(dòng)化流程操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力免去了復(fù)雜的人工提取不適合大量樣品核酸提取減少酚類、氯仿等有機(jī)試劑對(duì)操作人員傷害不適合臨床分子診斷極大滿足如今對(duì)核酸提取效率的需求 ...

磁珠法核酸提取常見(jiàn)問(wèn)題之磁珠結(jié)塊：導(dǎo)致磁珠結(jié)塊的可能原因：①磁珠吸附了過(guò)多雜質(zhì)，包括蛋白、脂質(zhì)、多糖等；②磁珠粒徑太?。虎巯礈焱戤?，乙醇干燥時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。④磁珠磁吸附時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；⑤操作中途含磁珠的樣品管離心速率過(guò)高、離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；磁珠結(jié)塊的解決辦法：①優(yōu)化裂解液、結(jié)...

各國(guó)藥典對(duì)于宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)方法的推薦：理想的定量檢測(cè)方法其靈敏度應(yīng)能檢測(cè)到約10pg/劑量的殘留DNA。雜交法、基于DNA結(jié)合蛋白的免疫色譜法（閾值法）和定量PCR方法因靈敏度均可達(dá)到檢測(cè)要求，都屬于經(jīng)典方法。①《美國(guó)藥典》將高靈敏度、高特異性的qPC...

宿主細(xì)胞DNA殘留問(wèn)題備受關(guān)注。研究表明，生物制品中來(lái)源于宿主細(xì)胞的外源性DNA具有傳遞**或病毒相關(guān)基因的可能性。各國(guó)藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對(duì)生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA有明確的檢測(cè)要求和標(biāo)準(zhǔn)。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細(xì)胞殘留核酸提取純化試...

基于細(xì)胞培養(yǎng)法和qPCR快檢法都能實(shí)現(xiàn)對(duì)重組腺相關(guān)病毒載體(rAAV)中復(fù)制型腺相關(guān)病毒(rcAAV)的污染率的檢測(cè)，但兩者在實(shí)際檢測(cè)中都存在檢測(cè)值不夠準(zhǔn)確的風(fēng)險(xiǎn)（基于細(xì)胞培養(yǎng)法存在低于實(shí)際值的風(fēng)險(xiǎn)qPCR快檢法存在高于實(shí)際值的風(fēng)險(xiǎn)）。南京正揚(yáng)生物科技有限公司...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的全自動(dòng)核酸提取儀是針對(duì)生物制品核酸提取的技術(shù)平臺(tái)，內(nèi)置專業(yè)優(yōu)化的前處理程序，配套本公司的自動(dòng)化前處理試劑盒和配套耗材，只需一鍵操作即可完成各類生物材料和制品中的宿主細(xì)胞、微生物、病毒因子等各類微量DNA/RNA的提取純化。...

慢病毒載體是以人類免疫缺陷Ⅰ型病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV-1）為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的基因醫(yī)治載體，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒家族，又區(qū)別于一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，比逆轉(zhuǎn)錄病毒載體具有更強(qiáng)的***能力，具有容納外源性目的基因片段大、穩(wěn)定整...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)過(guò)程中，qPCR反應(yīng)體系配制環(huán)節(jié)有哪些注意事項(xiàng)？①qPCR的整個(gè)操作要低溫環(huán)境進(jìn)行，防止模板的降解，試劑避免反復(fù)凍融。②配制反應(yīng)體系前試劑要充分混勻，除了模板外的反應(yīng)體系要統(tǒng)一配制，然后再分配至qPCR管中，配制的時(shí)候考慮到操作或耗材帶來(lái)...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的全自動(dòng)核酸提取儀的優(yōu)點(diǎn)：①操作簡(jiǎn)單：只需2步手工操作；②快速提取：只需26min即可完成樣品微量核酸的提取純化；③精確控溫：提高裂解和洗脫效率，避免系統(tǒng)誤差；④穩(wěn)定可靠：避免人工操作引起的差異及錯(cuò)誤，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好；⑤...

南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些？①重復(fù)性好，同一樣品重復(fù)檢測(cè)20次，CV＜15%；②提取回收率好，尤其對(duì)于低濃度樣品；③操作簡(jiǎn)便，無(wú)需自行配制試劑；④檢測(cè)時(shí)間短，從樣品提取純化到出結(jié)果只需2.5h；⑤適應(yīng)性...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)：用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①如出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象：反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機(jī)前確保管蓋密閉，反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān)，需咨詢硬...

如何評(píng)估磁珠法核酸提取產(chǎn)品的提取效果，可以從以下角度進(jìn)行相關(guān)產(chǎn)品的性能評(píng)估：Purity（純度），具體而言就是磁珠提取后的核酸中含有多少非核酸類的雜質(zhì)殘留，如蛋白、鹽、多糖等。該指標(biāo)通常用吸光度比值（A260/A280和A260/A230）來(lái)衡量。Qualit...

常用的支原體檢測(cè)方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法（DNA染色法）、ELISA法、PCR法等。分離培養(yǎng)法基本不會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，因此被譽(yù)為支原體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。不過(guò)也存在四個(gè)弊端，一是檢測(cè)時(shí)間太長(zhǎng)，支原體要長(zhǎng)出明顯克隆至少需要4周時(shí)間；二是盡管可以檢測(cè)絕大多數(shù)...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的方法介紹：①熒光探針qPCR法：可進(jìn)行定量分析，被USP/EP/ChP收錄，檢出限可低至1pg/Sample，蕞小檢測(cè)片段可至50bp，該檢測(cè)方法具備靈敏度高、特異性高、通量高的特點(diǎn)，但是成本相對(duì)其他方法略高。②熒光染色法：該方法可進(jìn)行...

生物檢測(cè)通常用于篩選載體產(chǎn)品中的RCR，而對(duì)輸注后患者的監(jiān)測(cè)則依賴于分子或血清學(xué)檢測(cè)。分子和血清學(xué)檢測(cè)比生物檢測(cè)更快，消耗的資源更少；然而，它們也很容易給出誤報(bào)。蕞常用的RCR病毒檢測(cè)是擴(kuò)展的S+/L-測(cè)定和標(biāo)記拯救測(cè)定。蕞常見(jiàn)的RCL生物測(cè)定方法是通過(guò)在增殖...

各國(guó)藥典對(duì)于宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)方法的推薦：理想的定量檢測(cè)方法其靈敏度應(yīng)能檢測(cè)到約10pg/劑量的殘留DNA。雜交法、基于DNA結(jié)合蛋白的免疫色譜法（閾值法）和定量PCR方法因靈敏度均可達(dá)到檢測(cè)要求，都屬于經(jīng)典方法。①《美國(guó)藥典》將高靈敏度、高特異性的qPC...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的全自動(dòng)核酸提取儀是針對(duì)生物制品核酸提取的技術(shù)平臺(tái)，內(nèi)置專業(yè)優(yōu)化的前處理程序，配套本公司的自動(dòng)化前處理試劑盒和配套耗材，只需一鍵操作即可完成各類生物材料和制品中的宿主細(xì)胞、微生物、病毒因子等各類微量DNA/RNA的提取純化。...

E.coli宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)在mRNA藥物生產(chǎn)中的應(yīng)用。mRNA藥物的制備流程包括模板DNA制備、mRNA原液制備和成品制備，其中DNA原液的制備過(guò)程中，需借助大腸桿菌作為宿主細(xì)胞擴(kuò)增質(zhì)粒DNA，線性化的質(zhì)粒DNA作為體外轉(zhuǎn)錄（IVT）的模板，因此，模板...

如何選擇正確的方法進(jìn)行細(xì)胞的支原體檢測(cè)？支原體的檢測(cè)方法有哪些？目前實(shí)驗(yàn)室常用的支原體檢測(cè)方法有培養(yǎng)法、熒光指示細(xì)胞法、PCR法、掃描電子顯微鏡法，這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。各實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)具體情況，選擇不同的方法，或幾種方法聯(lián)合使用。PCR作為一種快速、靈敏、特異且...

磁珠法核酸提取的基本原理：核酸結(jié)合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。細(xì)胞或組織在裂解液作用下，其中的DNA/RNA被釋放出來(lái)。此時(shí)經(jīng)過(guò)表面修飾的超順磁性氧化硅納米磁珠即與核酸進(jìn)行“特異性結(jié)合”，形成“核酸-磁珠復(fù)合物”。然后在外加磁場(chǎng)的作用下，復(fù)合...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)試劑盒簡(jiǎn)介：rcAAV檢測(cè)試劑盒（PCR熒光探針?lè)ǎ┦且豢罴冗m用于基于細(xì)胞培養(yǎng)法對(duì)rcAAV的檢測(cè)，也適用于對(duì)rcAAV的直接檢測(cè)的試劑盒，可達(dá)到兩種方法間相互驗(yàn)證、相互補(bǔ)充的目的。試劑盒中Refere...

磁珠法核酸提取過(guò)程中的常見(jiàn)誤區(qū)--和某種試劑盒比對(duì)效果不好就是磁珠不好很多客戶在篩選磁珠過(guò)程中都是在已經(jīng)成熟試劑體系下，簡(jiǎn)單地等量替換磁珠，用于比較磁珠效果。這樣就會(huì)很容易得出某種磁珠效果不好的結(jié)論，但實(shí)際上，由于不同磁珠適合的體系和用量是不同的，往往需要調(diào)整...

CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題：①檢測(cè)靈敏度：qPCR法可以達(dá)到非常低的檢測(cè)靈敏度，通?？梢詸z測(cè)到1個(gè)CHO細(xì)胞殘留DNA分子。這種高靈敏度可以有效地避免生物制品中CHO細(xì)胞殘留DNA對(duì)患者的潛在風(fēng)險(xiǎn)。②特異性：qPCR法的特異性非常高，可以準(zhǔn)確區(qū)分CH...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)與重組人源化膠原蛋白行業(yè)：①外源性DNA：作為醫(yī)療器械使用的原材料,宜根據(jù)預(yù)期臨床用途(作為植入物體內(nèi)使用,還是作為敷料等體表、黏膜使用)、使用量等,確定外源性DNA殘留量限值。如含重組人源化膠原蛋白的產(chǎn)品預(yù)期為體內(nèi)植人劑,推薦參考生物制...

盡管逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體被設(shè)計(jì)為具有復(fù)制缺陷，但仍有可能在生產(chǎn)過(guò)程中或輸注到患者體內(nèi)后發(fā)生重組，從而產(chǎn)生新的具有復(fù)制能力的逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒（RCR/RCL）。FDA在有關(guān)細(xì)胞產(chǎn)品和患者中檢測(cè)RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/RCL復(fù)制型慢病毒的指南中建議使用適當(dāng)?shù)纳?..