逆轉錄病毒生命周期的兩個獨特步驟，即逆轉錄和整合，是慢病毒載體功能的重要組成部分。脫殼后，剩余的病毒核酸和蛋白復合物稱為逆轉錄復合物（RTC），RTC通過主動運輸進入細胞核。轉運過程中，病毒RNA在RTC中通過以下方式逆轉錄為前病毒DNA。首先tRNA與病毒RNA基因組5'端引物結合位點（primer binding site，PBS）結合，并生成一個短片段的反義單鏈DNA，稱為強終止拷貝DNA（strong-stop copy DNA，sscDNA）。該sscDNA段隨后被轉移至病毒RNA的3'端，作為合成負鏈DNA的引物。在此過程中，重建了病毒生命周期必不可少的U3RU5序列。ELISA試...

實驗注意事項：建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時，建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基頁面下加，容易產生氣泡，會干擾OD值讀數。白細胞可能需要培養較長時間。當使用標準96孔板時，貼壁細胞的*小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL 培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。如果沒有450nm的濾光片，可...

擴增潛力高：每次傳代可實現10倍以上細胞擴增，14天細胞數量達到1×106；多種培養形式兼容：可在多種容器形式下進行各種規模培養：基質膠、低吸附孔板和生物反應器懸浮培養；簡化的工作流程：而無需在培養或傳代過程中使用微載體或細胞濾網，可在基質膠中形成球狀體；較好的成本效益比：GMP級別生產條件下制備，批次質量穩定，試劑含量是常規市售干細胞培養基的2倍，培養基可通過補液方式維持細胞生長。14天實現**類器guan細胞數量達到1×106可實現手術組織、穿刺組織及胸腹水來源的樣本很大程度維持非小細胞肺ai類器guan與體內**組織細胞的生物學特征及遺傳分子特征。熒光亮度更高，熒光偶聯物特異性好...

來源于生物體內的熒光素，常見的有螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶和Guassia熒光素酶。這些熒光素酶作為“報告蛋白”被用于分子生物學研究中，這種技術被稱為報告基因檢測法或螢光素酶檢測法（LuciferaseAssay）。跟普通融合蛋白標簽不同，使用熒光素酶構建的報告基因可用作目的基因的定量分析。因此常用于研究啟動子、miRNA3'UTR克隆的功能與調控，因為它們對目的基因的調控可以是漸變的，而不是簡單的開和關兩種狀態。優點：靈敏度高，檢測幅度寬；不是哺乳動物細胞內源性基因；重復性好；與HTS兼容等。螢火蟲和海腎熒光素酶已經被廣泛應用于協同報告并進行均一化研究。由于它們都是快速，容易和高靈敏的監測...

在酶聯免疫實驗操作中，加樣是必不可少的項步驟，這步驟在整個實驗中都有著很大的影響。那么酶聯免疫加樣步驟問題應如何解決處理呢？ 一、加樣問題的可能原因 1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱等待時間過長(特別是室內溫度較高時)； 3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。 二、解決方法 1.標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，**后必須立即顛倒**管混合5-10次，放置段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢...

常用的病毒載體有腺病毒、逆轉錄病毒和慢病毒。逆轉錄病毒載體只能感ran分裂期細胞，而且容量有限，腺病毒一般不能整合到染色體上，只能進行瞬時感ran。與其它逆轉錄病毒相比，慢病毒（LV）具有可以感ran非分裂期細胞、容納外源性基因片段大，可以長期表達等xian zhu優點。慢病毒不產生任何有效的細胞免疫應答，可作為一種體外基因運輸的工具。慢病毒載體介導的轉基因表達能持續數月，且無可觀察到的病理學現象。慢病毒包裝系統一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉...

自然殺傷（NK）細胞在識別和殺死**和病毒感ran的先天和后天免疫反應中扮演著關鍵的角色。因此，已有許多研究嘗試研發在體外激huo和擴增NK細胞的方法，以用于和免疫細胞相關研究，而目前的方法包括使用細胞因子、化學試劑以及飼養細胞1，其中細胞因子在調節NK細胞的活性中具有核xin作用。據報道，IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21和IFN-γ被歸類為NK細胞的細胞毒性和增殖的活化細胞因子，并增強NK細胞對各種**的細胞毒性作用2。然而，這些激huoNK細胞的細胞因子組合仍需研究人員進一步優化。該試劑盒中提供了所有必需的PCR試劑。只需添加DNA模板并進行PCR反應。...

隨著病毒生物學的發展，種類繁多的病毒載體已越來越成為向各種實驗系統（如細胞系、原代細胞、組織臟器等）轉運核酸的重要工具。除了在實驗室的組織培養和動物模型生產中發揮重要作用，它們還被用于zhi 療遺傳性疾病的臨床試驗中。目前主流的病毒載體系統主要包括慢病毒（LV）、（γ-）逆轉錄病毒（RV）、腺病毒（Ad）和腺相關病毒（AAV）。我們分述之。慢病毒和逆轉錄病毒均屬于逆轉錄病毒科。其典型特征為其RNA基因組能逆轉錄為cDNA副本，cDNA副本又能穩定整合至宿主細胞基因組中（這就是常說的穩轉）。逆轉錄病毒通常分兩種：簡單的（有時又稱為致ai病毒或γ-逆轉錄病毒，如鼠白血病病毒）和復雜的（如慢病毒）。...

慢病毒載體的研究發展得很快，研究的也非常深入。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達。在感ran能力方面可有效地感ran神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、**細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞，從而達到良好的的基因zhi liao效果，在美國已經開展了臨床研究，效果非常理想，因此具有廣闊的應用前景。慢病毒也被廣fan地應用于表達RNAi的研究中。由于有些類型細胞脂質體轉染效果差，轉移到細胞內的siRNA半衰期短，體外合成siRNA對基因表達的抑zhi作用通常是短暫的，因而使其應用受到較大的限制。采用事先在體外構建能夠表達siRNA的載體，然后轉移到細胞內轉錄siR...

就eGFP而言，相對于GFP，其熒光強度更強、熒光性質更穩定。mCherry是從DsRed演化來的性能*好的一個單體紅色熒光蛋白，可以和GFP系列熒光蛋白共用，實現多色標記。熒光蛋白活性和被融合的目標蛋白功能相互沒有明顯影響。這些熒光標簽蛋白，其融合表達目的蛋白后具有以下優點：1.不用破碎組織細胞和不加任何底物，直接通過熒光顯微鏡就能在活細胞中發出綠色熒光，實時顯示目的基因的表達情況，而且熒光性質穩定，被譽為活細胞探針。2.其自發熒光，不需用目的基因的抗體或原位雜交技術就可推知目的基因在細胞中的定位等情況。3.同時細胞內的其它產物不會干擾標簽蛋白檢測，從而使其檢測更顯得快速、簡便、靈敏度高...

WST-1細胞活力和增殖檢測試劑盒描述： 通過存在于活細胞中的琥珀酸四唑還原酶將四唑鎓鹽還原成有色甲compounds化合物，提供了測量細胞活力和增殖的靈敏且準確的方法。然而，*常用的四唑鹽MTT[3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物]的缺點是由MTT產生的甲dye染料極不溶于水，因此分光光度定量需要額外的提取步驟。ScienCell WST-1細胞活力和增殖測定使用四唑鹽WST-1[2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺苯基）-2H四唑]。WST-1在代謝活性細胞上產生高度水溶性的福爾馬贊，允許直接和用戶友好的細胞活力和...

您想要快速、準確的了解不同處理、來源的組織或細胞樣品之間某一類信號通路相關基因的表達情況嗎？為簡化基因分析研究，美國sciencell公司特推出GeneQueryTM qPCR試劑盒，這款產品能夠快速、簡單的獲得這些不同來源樣品之間您感興趣的信號通路相關基因群之間的精確表達倍數關系，并提供后續基因定量PCR 特異性引物序列信息。該試劑盒主要集中于生物學途徑、ai癥研究、遺傳性疾病和生物標志物等方面的研究，可在一個96 孔板內同時檢測96個相關基因的表達，少至0.1ng cDNA 就可快速準確的檢測和量化靶基因的表達。除了該試劑盒，還提供單獨的引物進行基因表達分析，這些引物組能特異性地識別和...

化學發光免疫分析技術的優勢1.靈敏度高：靈敏度高是化學發光免疫分析關鍵的優越性。化學發光免疫分析能夠檢出放射性免疫分析和酶聯免疫分析等方法無法檢出的物質，對疾病的早期診斷具有十分重要的意義。2.寬的線性動力學范圍：發光強度在4-6個量級之間，與測定物質濃度間呈線性關系。這與顯色酶聯免疫分析吸光度（OD值）2.0的范圍相比，優勢明顯。雖然同位素放射免疫也有較寬的線性動力學范圍，但是放射性限制其應用。3.光信號持續時間長：化學發光免疫分析的光信號持續時間可達數小時甚至一tian，簡化了實驗操作及測量。4.分析方法簡便快速：絕大多數分析測定jin需加入一種試劑（或符合制劑）的一步模式。5.結果穩定、...

CCK8試劑盒提供了一種靈敏度高，操作簡便，使用安全，重現性好的細胞增殖與活性檢測方法。與傳統的MTT相比無需有機溶劑和放射性同位素，步驟少，無損失，結果準確！本試劑盒檢測非常便捷。試劑盒jin一管已經配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無須再進行任何配制等操作 。無須使用同位素，所有的檢測步驟jin在同一塊96孔板內完成。不必洗滌細胞，不必收集細胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan。可以用于大批量樣品的檢測。1. MTT實驗生成的甲臜不是水溶性的，需要使用DMSO等有機溶劑溶解；而本方法產生的甲臜是水溶性的，不僅省去了溶解的步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差。2. 與MT...

注意事項：1、酚紅和血清對CCK-8法的檢測不會造成干擾，可以通過減去空白孔中本底的吸光度而消除。2、CCK-8試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養基顏色接近，不注意的話容易產生漏加或多加。3、當在培養箱內培養時，培養板*外一圈的孔容易干燥揮發，導致體積不準確而增加誤差。一般情況下，*外一圈的孔只加培養基，不作為測定孔用。4、金屬對CCK-8顯色有影響：終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會5%、15%、90%的抑zhi顯色反應，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM，將會100%抑zhi顯色反應。5、部分懸浮細胞由于染色比較困難，一般需要增加細胞數量并延長培養時間。熒光亮度更高，熒光偶...

您想要快速、準確的了解不同處理、來源的組織或細胞樣品之間某一類信號通路相關基因的表達情況嗎？為簡化基因分析研究，美國sciencell公司特推出GeneQueryTM qPCR試劑盒，這款產品能夠快速、簡單的獲得這些不同來源樣品之間您感興趣的信號通路相關基因群之間的精確表達倍數關系，并提供后續基因定量PCR 特異性引物序列信息。該試劑盒主要集中于生物學途徑、ai癥研究、遺傳性疾病和生物標志物等方面的研究，可在一個96 孔板內同時檢測96個相關基因的表達，少至0.1ng cDNA 就可快速準確的檢測和量化靶基因的表達。除了該試劑盒，還提供單獨的引物進行基因表達分析，這些引物組能特異性地識別和...

您想要快速、準確的了解不同處理、來源的組織或細胞樣品之間某一類信號通路相關基因的表達情況嗎？為簡化基因分析研究，美國sciencell公司特推出GeneQueryTM qPCR試劑盒，這款產品能夠快速、簡單的獲得這些不同來源樣品之間您感興趣的信號通路相關基因群之間的精確表達倍數關系，并提供后續基因定量PCR 特異性引物序列信息。該試劑盒主要集中于生物學途徑、ai癥研究、遺傳性疾病和生物標志物等方面的研究，可在一個96 孔板內同時檢測96個相關基因的表達，少至0.1ng cDNA 就可快速準確的檢測和量化靶基因的表達。除了該試劑盒，還提供單獨的引物進行基因表達分析，這些引物組能特異性地識別和...

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很...

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很...

人抗補體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒(CTX)ELISA試劑盒對體內各種重要生理功能的實現以及疾病的發生進程不可或缺，如造血作用、淋巴組織發育、炎癥反應、白細胞遷移、過敏、傷口修復、新血管生成、cancer發生和**遷移等。顧名思義，人抗補體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒(CTX)ELISA試劑盒的功能主要是趨化各種細胞。典型的例子，如人抗補體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒(CTX)ELISA試劑盒通過趨化作用向炎癥部位招募各種白細胞。 其中包括兩個步驟：首先是白細胞在血管內皮細胞表面的初始性滾動轉換成穩定性結合，并穿越血管內皮細胞層；然后，引導這些細胞向gan染部...

來源于生物體內的熒光素，常見的有螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶和Guassia熒光素酶。這些熒光素酶作為“報告蛋白”被用于分子生物學研究中，這種技術被稱為報告基因檢測法或螢光素酶檢測法（LuciferaseAssay）。跟普通融合蛋白標簽不同，使用熒光素酶構建的報告基因可用作目的基因的定量分析。因此常用于研究啟動子、miRNA3'UTR克隆的功能與調控，因為它們對目的基因的調控可以是漸變的，而不是簡單的開和關兩種狀態。優點：靈敏度高，檢測幅度寬；不是哺乳動物細胞內源性基因；重復性好；與HTS兼容等。螢火蟲和海腎熒光素酶已經被廣泛應用于協同報告并進行均一化研究。由于它們都是快速，容易和高靈敏的監測...

不過也有用單抗做檢測抗體的情況，尤其是在科研中。雙抗體夾心法具有高靈敏度、高專一性的優勢，但該法只適用于有多個結合位點的抗原檢測，主要用于檢測各種大分子抗原——例如在醫學檢測中測定HBsAg、HBeAg、AFP等疾病相關的，以及在科研中檢測細胞因子等。 由于雙抗體夾心法特異性高，在檢測過程中有時會將樣本和酶標抗體同時加入進行反應，稱為雙抗體夾心一步法，因為操作時間短，在商業化生產中有很大優勢。 但雙抗體夾心一步法要特別注意ELISA中的鉤狀效應（hook ffect），因為此時如果樣本中抗原含量過高會導致其與固相抗體和酶標抗體均有結合而無法形成“夾心復合物”，此時測出的結果將低...

1996年第yi次報道其蛋白質結構是一個包含有11個β折疊的“桶”形結構，發色團隱藏在結構的中心，不被水溶劑猝滅。這種緊密排列的結構對整個GFP蛋白是很重要的，它幾乎可以完全維持熒光活性;少量的斷裂是可以平衡的，少量的點突變也是可以接受的。與當時的傳統熒光染料相比，GFP的主要優勢在于它無毒，并且可以在活細胞中表達，從而能夠用于研究動態的生理過程。 幾乎就在它的序列被闡明的同時，科學家們就開始通過誘導突變來設計新的綠色熒光蛋白版本。1995年，RogerY.Tsien描述了一個S65T點突變，該突變增加了GFP的熒光強度和光穩定性。這也使其主激發峰從395nm轉移到488nm，有效地...

慢病毒載體（Lentiviralvector）較逆轉錄病毒載體有更廣的宿主范圍，慢病毒能夠有效感ran非周期性和有絲分裂后的細胞。慢病毒載體能夠產生表達shRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細胞、干細胞、受精卵以及分化的后代細胞中表達shRNA，實現在多種類型的細胞和轉基因小鼠中特異而穩定的基因表達的功能性沉默，為在原代的人和動物細胞組織中快速而高效地研究基因功能，以及產生特定基因表達降低的動物提供了可能性。慢病毒作為siRNA的攜帶者，不但具備特異性地使基因表達沉默的能力，而且充分發揮了慢病毒載體自身所具備的優勢，為基因功能的研究提供了更強有力的工具。慢病毒載體可以將外源基因或外源的...

細胞結構及功能的研究，是細胞生物學的基本課題，其重要的研究手段之一是分離純的亞細胞組分 。這種拆離的方法，使細胞中各種生物學過程彼此分開，互不干擾，便于確定一種復雜過程中的細節，從而深化我們對細胞整體功能的認識。 常規分離提取方法往往一次jin能提取1-2種細胞組分，同時不僅對設備要求高，而且操作起來費時費力，*后的效果還不佳。作為生命科學領域知ming的解決方案供應商，艾美捷科技為您推薦市場上唯yi一款能夠一次性提取4種組分的試劑盒，能夠滿足絕大多數科研工作者的分離需求，不僅高效便捷，更確保蛋白以及組分的完整。 示蹤試劑盒中所使用的熒光探針具有極低細胞毒性和無生物活性的特點。小...

hela細胞*早起源于20世紀50年代早期的一種高度侵襲性的宮頸ai細胞，作為第yi個不朽的人類細胞系，hela細胞是目前世界上*受研究者歡迎的細胞系之一。hela細胞在培養過程中很容易繁殖，如果hela細胞污染了其他細胞，它們很快就會超過原來的細胞。因此，hela細胞污染已成為科學界的一個重大課題。由于細胞系中hela細胞污染的可能性很高，建議進行常規評估。 Sciencell的Hela細胞污染檢測試劑盒（HLCC）專為敏感、快速和pcr法檢測人培養細胞中hela細胞污染的簡易方法。hela基因組學DNA（gdna）檢測引物集（hld）識別并放大hela細胞...

報告基因被廣泛應用于篩選轉化的細胞和組織。在過去的10年里，熒光蛋白已經成為活細胞成像研究中不可或缺的一部分。DsRED是可與其他篩選標記進行雙標記，同時又能避免植物葉綠素自發熒光的理想報告基因。本研究利用含有表達DsRED的雙元載體pKGWRR轉化核桃體細胞胚，并對這種紅色熒光蛋白可視報告基因對胚胎和再生植株的影響進行評估。結果表明，DsRED熒光強度在7~10d達到*高，24個存活的體細胞胚中有14個檢測到紅色熒光。這些E0胚每2周可以獲得25個全熒光E1胚和43個全熒光E2胚。DsRED陽性胚的發芽率達80%以上，獲得了45株可以檢測到紅色熒光的轉基因核桃植株。再生轉基因植株的組織中...