常用的病毒載體有腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體只能感ran分裂期細(xì)胞，而且容量有限，腺病毒一般不能整合到染色體上，只能進(jìn)行瞬時(shí)感ran。與其它逆轉(zhuǎn)錄病毒相比，慢病毒（LV）具有可以感ran非分裂期細(xì)胞、容納外源性基因片段大，可以長(zhǎng)期表達(dá)等xian zhu優(yōu)點(diǎn)。慢病毒不產(chǎn)生任何有效的細(xì)胞免疫應(yīng)答，可作為一種體外基因運(yùn)輸?shù)墓ぞ摺Ｂ《据d體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因表達(dá)能持續(xù)數(shù)月，且無可觀察到的病理學(xué)現(xiàn)象。慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)...

1.慢病毒生物學(xué)慢病毒生存所需的基本基因是gag、pol和env；gag編碼結(jié)構(gòu)蛋白，pol編碼逆轉(zhuǎn)錄酶和整合酶，env編碼病毒包膜糖蛋白。所有逆轉(zhuǎn)錄病毒都有相似的生命周期。當(dāng)成熟病毒通過直接膜融合或通過包膜糖蛋白與靶細(xì)胞表面同源受體結(jié)合而介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞時(shí)，生命周期就開始了。融合之后是脫殼過程，在此階段，一些病毒蛋白（包括部分Gag亞基）從病毒核xin解離。病毒RNA經(jīng)過復(fù)雜的多步逆轉(zhuǎn)錄過程轉(zhuǎn)化為前病毒雙鏈DNA。該前病毒DNA與病毒蛋白形成復(fù)合物，進(jìn)入細(xì)胞核并整合到宿主基因組中。整合過程由關(guān)鍵的病毒蛋白（例如整合酶）和內(nèi)源性宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子（例如LEDGF）輔助完成。野生型慢病毒的前...

細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能的研究，是細(xì)胞生物學(xué)的基本課題，其重要的研究手段之一是分離純的亞細(xì)胞組分 。這種拆離的方法，使細(xì)胞中各種生物學(xué)過程彼此分開，互不干擾，便于確定一種復(fù)雜過程中的細(xì)節(jié)，從而深化我們對(duì)細(xì)胞整體功能的認(rèn)識(shí)。 常規(guī)分離提取方法往往一次jin能提取1-2種細(xì)胞組分，同時(shí)不僅對(duì)設(shè)備要求高，而且操作起來費(fèi)時(shí)費(fèi)力，*后的效果還不佳。作為生命科學(xué)領(lǐng)域知ming的解決方案供應(yīng)商，艾美捷科技為您推薦市場(chǎng)上唯yi一款能夠一次性提取4種組分的試劑盒，能夠滿足絕大多數(shù)科研工作者的分離需求，不僅高效便捷，更確保蛋白以及組分的完整。 熒光亮度更高，熒光偶聯(lián)物特異性好，熒光溢出效應(yīng)減弱。微生物鐵氧還原...

微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MicrosatelliteInstability，MSI），是指由于在DNA復(fù)制時(shí)插入或缺失突變引起的微衛(wèi)星（Microsatellite,MS）序列長(zhǎng)度改變的現(xiàn)象，常由錯(cuò)配修復(fù)功能（Mismatchrepair,MMR）缺陷引起。MS序列，是一些短而重復(fù)的DNA序列，一般由1～6個(gè)核苷酸組成，串聯(lián)重復(fù)排列，常見類型為雙堿基CA/GA/GT或單堿基A/T等。MS序列可以位于基因的重要非編碼區(qū)，也可以位于基因的編碼區(qū)，多態(tài)性分布于整個(gè)基因組，個(gè)體差異大。MSI現(xiàn)象于1993年被Jacobs等人在結(jié)直腸ai中*先發(fā)現(xiàn)。隨著針對(duì)MSI的研究深入，發(fā)現(xiàn)MSI現(xiàn)象不止存在于結(jié)直腸a...

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很...

細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑盒描述： 正常的哺乳動(dòng)物細(xì)胞分裂有限數(shù)量的種群倍增，并*終進(jìn)入停滯狀態(tài)，在該狀態(tài)下細(xì)胞保持存活，但不響應(yīng)有絲分裂原而增殖，并呈現(xiàn)出特征性的擴(kuò)大，扁平的形態(tài)。這個(gè)過程稱為衰老，被認(rèn)為是一種**抑zhi機(jī)制和衰老的根本原因。衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）是一種廣fan用于評(píng)估培養(yǎng)細(xì)胞衰老的生化制劑。ScienCell細(xì)胞衰老試驗(yàn)提供了一種易于使用的方法，通過用pH6.0的5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷（X-gal）染色細(xì)胞來檢測(cè)SA-β-gal，抑zhi溶酶體β-半乳糖苷酶活性的pH條件足以確保非衰老細(xì)胞保持未染色。 ...

ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到全世界科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 ...

Cell Counting Kit-8簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），適用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。 實(shí)驗(yàn)原理：WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。 用途：CCK-8法應(yīng)用非常廣fan，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、**...

細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能的研究，是細(xì)胞生物學(xué)的基本課題，其重要的研究手段之一是分離純的亞細(xì)胞組分 。這種拆離的方法，使細(xì)胞中各種生物學(xué)過程彼此分開，互不干擾，便于確定一種復(fù)雜過程中的細(xì)節(jié)，從而深化我們對(duì)細(xì)胞整體功能的認(rèn)識(shí)。 常規(guī)分離提取方法往往一次jin能提取1-2種細(xì)胞組分，同時(shí)不僅對(duì)設(shè)備要求高，而且操作起來費(fèi)時(shí)費(fèi)力，*后的效果還不佳。作為生命科學(xué)領(lǐng)域知ming的解決方案供應(yīng)商，艾美捷科技為您推薦市場(chǎng)上唯yi一款能夠一次性提取4種組分的試劑盒，能夠滿足絕大多數(shù)科研工作者的分離需求，不僅高效便捷，更確保蛋白以及組分的完整。 示蹤試劑盒中所使用的熒光探針具有極低細(xì)胞毒性和無生物活性的特點(diǎn)。P...

細(xì)胞增殖是通過細(xì)胞分裂引起的細(xì)胞數(shù)量增加，在整個(gè)生命周期中對(duì)正常組織發(fā)育和維持是必須的。一些類型的細(xì)胞會(huì)處于持續(xù)增殖狀態(tài)，如皮膚和骨髓細(xì)胞，但許多成人組織中的細(xì)胞會(huì)處于非增殖狀態(tài)，只有在損傷或感ran時(shí)，才能被激huo來補(bǔ)充細(xì)胞。與之相反，細(xì)胞周期關(guān)鍵基因突變引起的細(xì)胞增殖失調(diào)是各類cancer的標(biāo)志，會(huì)造成**異常的不受控制的生長(zhǎng)。增殖檢測(cè)一般用于分析分裂中的細(xì)胞數(shù)量的變化，進(jìn)而反應(yīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)及活性，細(xì)胞增殖檢測(cè)是細(xì)胞分析和藥物研發(fā)中經(jīng)常會(huì)使用的手段。目前廣泛應(yīng)用于**生物學(xué)，分子生物學(xué)，藥代動(dòng)力學(xué)等領(lǐng)域。CCK-8試劑盒是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞活性和細(xì)胞毒性檢測(cè)的快...

細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能的研究，是細(xì)胞生物學(xué)的基本課題，其重要的研究手段之一是分離純的亞細(xì)胞組分 。這種拆離的方法，使細(xì)胞中各種生物學(xué)過程彼此分開，互不干擾，便于確定一種復(fù)雜過程中的細(xì)節(jié)，從而深化我們對(duì)細(xì)胞整體功能的認(rèn)識(shí)。 常規(guī)分離提取方法往往一次jin能提取1-2種細(xì)胞組分，同時(shí)不僅對(duì)設(shè)備要求高，而且操作起來費(fèi)時(shí)費(fèi)力，*后的效果還不佳。作為生命科學(xué)領(lǐng)域知ming的解決方案供應(yīng)商，艾美捷科技為您推薦市場(chǎng)上唯yi一款能夠一次性提取4種組分的試劑盒，能夠滿足絕大多數(shù)科研工作者的分離需求，不僅高效便捷，更確保蛋白以及組分的完整。 使用ELISA讀數(shù)器對(duì)溶解的甲臜產(chǎn)物進(jìn)行分光光度計(jì)量化。醛脫氫酶分...

報(bào)告基因被廣泛應(yīng)用于篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞和組織。在過去的10年里，熒光蛋白已經(jīng)成為活細(xì)胞成像研究中不可或缺的一部分。DsRED是可與其他篩選標(biāo)記進(jìn)行雙標(biāo)記，同時(shí)又能避免植物葉綠素自發(fā)熒光的理想報(bào)告基因。本研究利用含有表達(dá)DsRED的雙元載體pKGWRR轉(zhuǎn)化核桃體細(xì)胞胚，并對(duì)這種紅色熒光蛋白可視報(bào)告基因?qū)ε咛ズ驮偕仓甑挠绊戇M(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明，DsRED熒光強(qiáng)度在7~10d達(dá)到*高，24個(gè)存活的體細(xì)胞胚中有14個(gè)檢測(cè)到紅色熒光。這些E0胚每2周可以獲得25個(gè)全熒光E1胚和43個(gè)全熒光E2胚。DsRED陽性胚的發(fā)芽率達(dá)80%以上，獲得了45株可以檢測(cè)到紅色熒光的轉(zhuǎn)基因核桃植株。再生轉(zhuǎn)基因植株的組織中...

CCK-8試劑（Cell Counting Kit-8 細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑 [1] ）中含有WST–8：化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan），生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已被廣fan用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗**藥物篩選、細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)...

Elisa試劑盒對(duì)于間接ELISA標(biāo)本般都要進(jìn)行稀釋，如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)造成誤差，尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí)，很小的絕dui誤差，會(huì)導(dǎo)致較大的相對(duì)誤差，使陰性（或弱陽性）標(biāo)本呈陽性（或陰性）。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。目，大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本，可較好地避免以上誤差。 在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健步，ELISA試劑盒應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機(jī)器操作，得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān)，ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與...

ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到全世界科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 ...

實(shí)驗(yàn)流程：1根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列，序列號(hào)等），構(gòu)建含有外源基因或siRNA的重組載體。2對(duì)于測(cè)序正確的重組質(zhì)粒，提取和純化高質(zhì)量的不含內(nèi)du素的重組質(zhì)粒。3使用高效重組載體和病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T 細(xì)胞，進(jìn)行病毒包裝和生產(chǎn)，收集病毒液；4濃縮、純化病毒液。5用高質(zhì)量的病毒液感ran細(xì)胞。6通過定量PCR精確測(cè)定病毒滴度（高精確滴定方法）和Western 分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。7用高質(zhì)量的病毒液感ran宿主細(xì)胞；檢測(cè)基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用藥物進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選，通常狀況下，篩選的細(xì)胞克隆株具有長(zhǎng)期的表達(dá)穩(wěn)定性。bing毒液足夠用于一般的動(dòng)物活ti實(shí)驗(yàn)。CCK-8試劑盒可...

擴(kuò)增潛力高：每次傳代可實(shí)現(xiàn)10倍以上細(xì)胞擴(kuò)增，14天細(xì)胞數(shù)量達(dá)到1×106；多種培養(yǎng)形式兼容：可在多種容器形式下進(jìn)行各種規(guī)模培養(yǎng)：基質(zhì)膠、低吸附孔板和生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)；簡(jiǎn)化的工作流程：而無需在培養(yǎng)或傳代過程中使用微載體或細(xì)胞濾網(wǎng)，可在基質(zhì)膠中形成球狀體；較好的成本效益比：GMP級(jí)別生產(chǎn)條件下制備，批次質(zhì)量穩(wěn)定，試劑含量是常規(guī)市售干細(xì)胞培養(yǎng)基的2倍，培養(yǎng)基可通過補(bǔ)液方式維持細(xì)胞生長(zhǎng)。14天實(shí)現(xiàn)**類器guan細(xì)胞數(shù)量達(dá)到1×106可實(shí)現(xiàn)手術(shù)組織、穿刺組織及胸腹水來源的樣本很大程度維持非小細(xì)胞肺ai類器guan與體內(nèi)**組織細(xì)胞的生物學(xué)特征及遺傳分子特征。ELISA試劑盒標(biāo)本凝集不全時(shí)，...

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時(shí)，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會(huì)干擾OD值讀數(shù)。白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的*小接種量至少為1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。如果沒有450nm的濾光片，可...

其局限性：① ELISA數(shù)據(jù)不能提供單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生因子的能力和頻率；②因受刺激細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生是短暫的，并且不同細(xì)胞因子基因的表達(dá)動(dòng)力學(xué)可以變化，故可能需要在幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集測(cè)試樣品以更好地表征實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或培養(yǎng)細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生。③在任何一個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)量的細(xì)胞因子蛋白濃度可能反映細(xì)胞因子分泌，細(xì)胞因子攝取的并發(fā)過程。通過細(xì)胞和細(xì)胞因子蛋白降解。由于這些過程，測(cè)量的細(xì)胞因子蛋白水平可能xian zhu低估細(xì)胞的實(shí)際細(xì)胞因子產(chǎn)生潛力。④試劑不統(tǒng)一，標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，故定量不準(zhǔn)確等。使用ELISA讀數(shù)器對(duì)溶解的甲臜產(chǎn)物進(jìn)行分光光度計(jì)量化。sciencell試劑盒 來自蛋白質(zhì)的生物熒光，如綠色熒光蛋白(GF...

人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒(CTX)ELISA試劑盒對(duì)體內(nèi)各種重要生理功能的實(shí)現(xiàn)以及疾病的發(fā)生進(jìn)程不可或缺，如造血作用、淋巴組織發(fā)育、炎癥反應(yīng)、白細(xì)胞遷移、過敏、傷口修復(fù)、新血管生成、cancer發(fā)生和**遷移等。顧名思義，人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒(CTX)ELISA試劑盒的功能主要是趨化各種細(xì)胞。典型的例子，如人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒(CTX)ELISA試劑盒通過趨化作用向炎癥部位招募各種白細(xì)胞。 其中包括兩個(gè)步驟：首先是白細(xì)胞在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的初始性滾動(dòng)轉(zhuǎn)換成穩(wěn)定性結(jié)合，并穿越血管內(nèi)皮細(xì)胞層；然后，引導(dǎo)這些細(xì)胞向gan染部...

免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何優(yōu)zhi的診斷試劑離不開優(yōu)zhi的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑，各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。ELISA試劑盒反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)，酶被滅活，反應(yīng)時(shí)間過短，酶與血清中的微生物抗原和抗體不能完全結(jié)合。定性檢測(cè)試劑盒細(xì)胞增殖是通過細(xì)胞分裂引起的細(xì)胞數(shù)量增加...

ELISPOT法源自ELISA，又突破傳統(tǒng)ELISA法，是定量ELISA技術(shù)的延伸和新的發(fā)展。兩者都是檢測(cè)細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子或其他可溶性蛋白，它們*大的不同在于：ELISA通過顯色反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得出定量的可溶性蛋白總量。ELISPOT通過顯色反應(yīng)，在細(xì)胞分泌這種可溶性蛋白的相應(yīng)位置上顯現(xiàn)清晰可辨的斑點(diǎn)，可直接通過ELISPOT分析系統(tǒng)對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)，從而計(jì)算出分泌該蛋白或者細(xì)胞因子的細(xì)胞的頻率。由于是單細(xì)胞水平檢測(cè)，需細(xì)胞量少， 比ELISA更靈敏。捕獲抗體為高親和力、高特異性、低內(nèi)du素單抗，在研究者以刺激劑激huo細(xì)胞時(shí)，不會(huì)影響活化細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。但該方...

慢病毒載體（Lentiviralvector）較逆轉(zhuǎn)錄病毒載體有更廣的宿主范圍，慢病毒能夠有效感ran非周期性和有絲分裂后的細(xì)胞。慢病毒載體能夠產(chǎn)生表達(dá)shRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細(xì)胞、干細(xì)胞、受精卵以及分化的后代細(xì)胞中表達(dá)shRNA，實(shí)現(xiàn)在多種類型的細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因小鼠中特異而穩(wěn)定的基因表達(dá)的功能性沉默，為在原代的人和動(dòng)物細(xì)胞組織中快速而高效地研究基因功能，以及產(chǎn)生特定基因表達(dá)降低的動(dòng)物提供了可能性。慢病毒作為siRNA的攜帶者，不但具備特異性地使基因表達(dá)沉默的能力，而且充分發(fā)揮了慢病毒載體自身所具備的優(yōu)勢(shì)，為基因功能的研究提供了更強(qiáng)有力的工具。慢病毒載體可以將外源基因或外源的...

熒光素(Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱，其中*有代表性的是來自螢火蟲體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類螢光素酶，分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)，可通過熒光測(cè)定儀設(shè)備測(cè)定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。熒光素酶的具體應(yīng)用，主要有以下兩個(gè)方面：(一)：pGL3-Basic---用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)與...

就eGFP而言，相對(duì)于GFP，其熒光強(qiáng)度更強(qiáng)、熒光性質(zhì)更穩(wěn)定。mCherry是從DsRed演化來的性能*好的一個(gè)單體紅色熒光蛋白，可以和GFP系列熒光蛋白共用，實(shí)現(xiàn)多色標(biāo)記。熒光蛋白活性和被融合的目標(biāo)蛋白功能相互沒有明顯影響。這些熒光標(biāo)簽蛋白，其融合表達(dá)目的蛋白后具有以下優(yōu)點(diǎn)：1.不用破碎組織細(xì)胞和不加任何底物，直接通過熒光顯微鏡就能在活細(xì)胞中發(fā)出綠色熒光，實(shí)時(shí)顯示目的基因的表達(dá)情況，而且熒光性質(zhì)穩(wěn)定，被譽(yù)為活細(xì)胞探針。2.其自發(fā)熒光，不需用目的基因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細(xì)胞中的定位等情況。3.同時(shí)細(xì)胞內(nèi)的其它產(chǎn)物不會(huì)干擾標(biāo)簽蛋白檢測(cè)，從而使其檢測(cè)更顯得快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高...

慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，它能夠?qū)谢驅(qū)氲揭恍┹^難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代細(xì)胞等，并且將靶基因隨機(jī)整合到宿主的基因組中，從而大da增加了轉(zhuǎn)染效率，并且能夠在細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)若干代，可以進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的篩選。因?yàn)槭请S機(jī)整合，也有不確定因素，有些公司還能提供定點(diǎn)整合技術(shù)，將靶基因定點(diǎn)整合到基因組特定的部位，從而保證其高效表達(dá)并且對(duì)細(xì)胞不產(chǎn)生隨機(jī)整合可能產(chǎn)生的傷害。 慢病毒表達(dá)載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞...

細(xì)胞毒性是由合成化合物、細(xì)胞自然產(chǎn)生毒性或免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞(如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞,自然殺傷細(xì)胞等)引起的細(xì)胞殺傷事件。目前主要通過對(duì)受損細(xì)胞釋放的相關(guān)底物(如乳酸脫氫酶-LDH)進(jìn)行定量,從而判斷細(xì)胞膜的受損情況。本期，將為大家講解有關(guān)細(xì)胞毒性的檢測(cè)產(chǎn)品、原理及特點(diǎn)等內(nèi)容。 細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)是生物相容性測(cè)試的一種，檢測(cè)藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況，即通過檢測(cè)材料或者藥物對(duì)細(xì)胞的增殖或者生長(zhǎng)的影響，來評(píng)價(jià)藥物或材料的毒性或者活性，主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、抗**藥效測(cè)定等；常用MTT法或者CCK-8法檢測(cè)，另外也可以通過Live/dead雙染法進(jìn)行細(xì)...

不過也有用單抗做檢測(cè)抗體的情況，尤其是在科研中。雙抗體夾心法具有高靈敏度、高專一性的優(yōu)勢(shì)，但該法只適用于有多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的抗原檢測(cè)，主要用于檢測(cè)各種大分子抗原——例如在醫(yī)學(xué)檢測(cè)中測(cè)定HBsAg、HBeAg、AFP等疾病相關(guān)的，以及在科研中檢測(cè)細(xì)胞因子等。 由于雙抗體夾心法特異性高，在檢測(cè)過程中有時(shí)會(huì)將樣本和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入進(jìn)行反應(yīng)，稱為雙抗體夾心一步法，因?yàn)椴僮鲿r(shí)間短，在商業(yè)化生產(chǎn)中有很大優(yōu)勢(shì)。 但雙抗體夾心一步法要特別注意ELISA中的鉤狀效應(yīng)（hook ffect），因?yàn)榇藭r(shí)如果樣本中抗原含量過高會(huì)導(dǎo)致其與固相抗體和酶標(biāo)抗體均有結(jié)合而無法形成“夾心復(fù)合物”，此時(shí)測(cè)出的結(jié)果將低...

自然殺傷（NK）細(xì)胞在識(shí)別和殺死**和病毒感ran的先天和后天免疫反應(yīng)中扮演著關(guān)鍵的角色。因此，已有許多研究嘗試研發(fā)在體外激huo和擴(kuò)增NK細(xì)胞的方法，以用于和免疫細(xì)胞相關(guān)研究，而目前的方法包括使用細(xì)胞因子、化學(xué)試劑以及飼養(yǎng)細(xì)胞1，其中細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的活性中具有核xin作用。據(jù)報(bào)道，IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21和IFN-γ被歸類為NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性和增殖的活化細(xì)胞因子，并增強(qiáng)NK細(xì)胞對(duì)各種**的細(xì)胞毒性作用2。然而，這些激huoNK細(xì)胞的細(xì)胞因子組合仍需研究人員進(jìn)一步優(yōu)化。熒光亮度更高，熒光偶聯(lián)物特異性好，熒光溢出效應(yīng)減弱。PCR產(chǎn)物純化回收試劑...

報(bào)告基因被廣泛應(yīng)用于篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞和組織。在過去的10年里，熒光蛋白已經(jīng)成為活細(xì)胞成像研究中不可或缺的一部分。DsRED是可與其他篩選標(biāo)記進(jìn)行雙標(biāo)記，同時(shí)又能避免植物葉綠素自發(fā)熒光的理想報(bào)告基因。本研究利用含有表達(dá)DsRED的雙元載體pKGWRR轉(zhuǎn)化核桃體細(xì)胞胚，并對(duì)這種紅色熒光蛋白可視報(bào)告基因?qū)ε咛ズ驮偕仓甑挠绊戇M(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明，DsRED熒光強(qiáng)度在7~10d達(dá)到*高，24個(gè)存活的體細(xì)胞胚中有14個(gè)檢測(cè)到紅色熒光。這些E0胚每2周可以獲得25個(gè)全熒光E1胚和43個(gè)全熒光E2胚。DsRED陽性胚的發(fā)芽率達(dá)80%以上，獲得了45株可以檢測(cè)到紅色熒光的轉(zhuǎn)基因核桃植株。再生轉(zhuǎn)基因植株的組織中...