Substance P

在質粒DNA提取過程中，確保DNA的完整性和活性至關重要，這通常涉及以下幾個關鍵因素：1.**溫和的裂解條件**：選擇適當的裂解方法對于保持DNA的完整性至關重要。對于大于15kb的質粒DNA，應采用溫和的裂解方法，如將細菌懸浮于等滲的葡萄糖溶液中，加入溶菌酶和EDTA破壞細胞壁和細胞膜，以減少對質粒DNA的機械剪切力，從而保護其完整性。2.**避免過度裂解**：在質粒提取過程中，并非裂解時間越長越好。過長的裂解時間可能會造成基因組DNA片段的污染，影響質粒的純度。3.**適當的洗滌和洗脫**：在純化過程中，適當的洗滌可以去除蛋白質和其他雜質，但過度洗滌可能會導致DNA的損失。洗脫步驟中，確保洗脫液完全浸潤柱膜，以保證結合在柱膜上的質粒得以充分洗脫，避免因洗脫體積過小而影響質粒得率。4.**避免DNA的降解**：在提取過程中，添加核酸酶抑制劑可以防止DNA被核酸酶降解。同時，避免長時間將DNA暴露在室溫下，以及避免多次凍融循環，這些都有助于保護DNA的完整性。5.**低溫操作**：盡量在低溫條件下進行提取操作，以減少核酸酶的活性，從而保護DNA的完整性。

Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌（Thermophilic Geobacillus sp）DNA聚合酶I衍生的酶，缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關鍵信息：來源和特性：Bst Plus DNA Polymerase 具有更強的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性，適合用于抗污染的等溫擴增反應，如LAMP和CPA等。應用：主要應用于等溫DNA擴增，包括環介導等溫擴增（LAMP）和其他等溫擴增技術。規格：活性定義：1 U指的是在65°C下30分鐘內將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質中的酶的量。溶液成分：包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油，pH 7.5 @ 25℃。產品形式：提供的產品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)，貨號14402ES，以及凍干粉形式的產品，貨號14405ES，不含甘油。靈敏度和穩定性：Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度，低至5copies目的基因可測，且在飛克（fg）級別的模板量下也能快速達到閾值。在37°C下，該酶可以保持相對穩定的效應長達5天，并且在-20℃下可以穩定保存2年。儲存條件：建議在-25℃至-15℃下儲存，以保持產品活性，并避免反復凍融。Recombinant Cynomolgus HPX Protein,His Tag泛素分子可以通過其內部的賴氨酸殘基（如Lys48）與其他泛素分子形成多聚泛素鏈。

在PCR實驗中，防止非特異性擴增的關鍵在于優化實驗條件和采取一些特定的策略。以下是一些有效的方法：1.**優化引物設計**：引物設計是PCR成功的關鍵。應確保引物序列具有高度特異性，避免與非目標序列互補。使用在線工具進行引物設計，并進行BLAST搜索以確認特異性。2.**使用熱啟動PCR**：熱啟動PCR技術可以抑制室溫下的DNA聚合酶活性，減少非特異性擴增。這種方法通過在高溫下激起酶的活性，從而在PCR體系配制階段降低引物與模板或引物與引物之間的非特異性結合。3.**調整Mg2+濃度**：Mg2+濃度對PCR擴增的特異性和產量有重要影響。過高的Mg2+濃度可能導致非特異性擴增，因此需要優化Mg2+濃度以獲得比較好的結果。4.**退火溫度優化**：退火溫度對PCR特異性至關重要。較高的退火溫度有助于減少非特異性結合，但過高的退火溫度可能會降低引物與模板的結合效率。通常，退火溫度設置比引物的Tm值低5°C左右。5.**使用降落PCR**：降落PCR（TouchdownPCR）通過在初始循環中使用較高的退火溫度，然后逐漸降低退火溫度，從而在PCR開始時減少非特異性擴增，同時在后續循環中保持特異性擴增。

磁珠法在基因克隆中的應用主要體現在以下幾個方面：1.**質粒DNA的提取**：磁珠法可以用于從細菌細胞中提取質粒DNA，這對于質粒的克隆和表達至關重要。通過磁珠法提取的質粒DNA純度高，適合用于后續的酶切、連接、轉化等分子克隆步驟。2.**基因組DNA的提取**：磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA，這對于基因組的克隆和分析非常重要。提取的基因組DNA可以用于PCR擴增、基因表達分析、基因突變檢測等。3.**mRNA的提取和純化**：在mRNA克隆中，磁珠法可以用于提取和純化mRNA，這對于cDNA的合成和基因表達分析非常關鍵。磁珠法提取的mRNA純度高，可以用于后續的cDNA合成和RT-PCR等實驗。4.**PCR產物的純化**：磁珠法可以用于純化PCR產物，去除反應中的酶、dNTPs和其他雜質，為克隆PCR產物提供高純度的DNA模板。5.**DNA片段的篩選和回收**：在基因克隆過程中，可能需要從多個DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收，提高克隆效率。6.**自動化和高通量操作**：磁珠法易于與自動化設備結合，適合高通量樣本處理，這對于大規?；蚩寺№椖坑葹橹匾Ｗ詣踊僮鳒p少了人為操作誤差，提高了實驗的重復性和可靠性。CRISPR/Cas12a 是一種單一的RNA引導的核酸內切酶，通過CRISPR/Cas9系統為靶向基因組工程提供了新的機會。

嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶I（BstDNAPolymeraseI）是一種熱穩定的酶，它在高溫下（55-65°C）仍然保持活性，這使得它在分子生物學實驗中非常有用，尤其是在需要高溫反應的實驗中，如熱循環擴增（PCR）。BstDNAPolymeraseI具有以下特性：1.**熱穩定性**：BstDNAPolymeraseI在高溫下具有較高的穩定性，適用于高溫反應的實驗，如PCR。2.**3'到5'外切酶活性**：這種酶具有3'到5'外切酶活性，能夠切除DNA末端上的非特異性引物和雜交DNA，使其成為等溫擴增應用的理想酶。3.**耐鹽性**：BstDNAPolymeraseI在高鹽條件下仍能保持穩定活性，這在一些特殊的PCR應用中非常有用。4.**等溫擴增**：由于其3'到5'外切酶活性，BstDNAPolymeraseI用于等溫擴增反應，如LAMP技術，這種技術能夠在恒溫下進行DNA擴增，無需繁瑣的溫度循環。5.**快速PCR**：由于其高溫穩定性，BstDNAPolymeraseI也可用于快速PCR反應，縮短了實驗時間。6.**高GC含量模板擴增**：BstDNAPolymeraseI對高GC含量模板的擴增效果較好，因此在一些難擴增的模板中表現出色。通過工程化改造，如將FnCas12a與單鏈DNA外切酶融合，可以提高基因編輯效率，擴大FnCas12a可以靶向的范圍 。Recombinant Protein A/G（Freeze-Dried）重組蛋白A/G (凍干）

Multiplex Probe qPCR Mix 已預混了低濃度ROX參比染料，適用于需要低濃度ROX校正的熒光定量PCR儀 。Substance P

Lambda核酸外切酶（λExonuclease）在PCR產物的克隆中主要應用在以下幾個方面：1.**單鏈DNA的生成**：-Lambda核酸外切酶可以用于從雙鏈DNA中生成單鏈DNA。由于該酶沿5'→3'方向逐步切去5'單核苷酸，底物是5'磷酸化的雙鏈DNA，因此可以用來消化PCR產物中的一條鏈，從而生成單鏈DNA，這對于某些克隆技術來說是必要的步驟。2.**PCR產物的克隆**：-在克隆過程中，有時需要將PCR產物的5'端磷酸化，以便與載體連接。Lambda核酸外切酶可以消化非磷酸化的DNA，從而在一定程度上幫助準備適合克隆的PCR產物。3.**減少自身環化和非特異性連接**：-在連接反應中，為了減少質粒載體的自身環化，可以使用堿性磷酸酶處理質粒DNA以去除5'磷酸基團。而Lambda核酸外切酶可以消化5'端磷酸化的DNA，因此在某些情況下，它可以輔助減少PCR產物的自身環化，尤其是在PCR產物和質粒載體的連接反應中。4.**提高克隆效率**：-通過消化PCR產物中的一條鏈，Lambda核酸外切酶可以幫助減少PCR產物的非特異性連接，從而提高克隆的效率和準確性。綜上所述，Lambda核酸外切酶在PCR產物的克隆中主要通過生成單鏈DNA、準備適合克隆的PCR產物、減少自身環化和非特異性連接以及提高克隆效率等方面發揮作用。Substance P