進口全細胞膜片鉗離子通道

目前，絕大多數離子通道的一級結構得到了闡明但根本的還是要搞清楚各種離子通道的三維結構，在這方面，美國的二位科學家彼得阿格雷和羅德里克麥金農做出了一些開創性的工作，他們到用X光繞射方法得到了K離子通道的三維結構，二位因此獲得2003年諾貝系化學獎。有關離子通道結構不是本PPT的重點，可參考楊寶峰的<離子通道藥理學>和Hill的

膜片鉗的基本原理則是利用負反饋電子線路，將微電極前列所吸附的一個至幾個平方微米的細胞膜的電位固定在一定水平上，對通過通道的微小離子電流作動態或靜態觀察，從而研究其功能。膜片鉗技術實現膜電流固定的關鍵步驟是在玻璃微電極前列邊緣與細胞膜之間形成高阻密封，其阻抗數值可達10～100GΩ(此密封電阻是指微電極內與細胞外液之間的電阻)。由于此阻值如此之高，故基本上可看成絕緣，其上之電流可看成零，形成高阻密封的力主要有氫健、范德華力、鹽鍵等。此密封不僅電學上近乎絕緣，在機械上也是較牢固的。又由于玻璃微電極前列管徑很小，其下膜面積只約1μm2，在這么小的面積上離子通道數量很少，一般只有一個或幾個通道，經這一個或幾個通道流出的離子數量相對于整個細胞來講很少，可以忽略，也就是說電極下的離子電流對整個細胞的靜息電位的影響可以忽略，那么，只要保持電極內電位不變，則電極下的一小片細胞膜兩側的電位差就不變，從而實現電位固定。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業團隊,7*28小時隨時人工在線咨詢.美國全自動膜片鉗實驗操作準確、穩定、高效，膜片鉗技術讓您的研究更上一層樓！

把膜電位鉗位電壓調到-80--100mV，再用鉗位放大器的控制鍵把全細胞瞬態充電電流調定至零位（EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標為全細胞電容和系列電阻）。寫下細胞的電容值Cc和未補整的系列電阻值Rs，用于消除全細胞瞬態電流，計算鉗位的固定時間（即RsCc），然啟根據歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細胞的電阻RC。緩慢調節Rs旋鈕注意測定脈沖反應的變化，逐漸增加補整的比例。如果RS補整非常接近振蕩的閾值，RS或Cc的微細變化都會達到震蕩的閾值，產生電壓的振蕩而使細胞受損。因此應當在RS補整水平寫不穩定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準備資料收集和脈沖序列的測定。

1980年，Sigworth、Hamill、Neher等在記錄電極內施加負壓吸引，得到了10~100GΩ的高阻封接（gigaseal），降低記錄噪聲，實現了單根電極既鉗制膜電位又記錄單通道電流。獲1991年Nobel獎。1955年，Hodgkin和Keens應用電壓鉗（Voltageclap）在研究神經軸突膜對鉀離子通透性時發現放射性鉀跨軸突膜的運動很像是通過許多狹窄空洞的運動，并提出了"通道"的概念。1963年，描述電壓門控動力學的Hodgkin-Hx上模型（簡稱H-H模型）榮獲譜貝爾醫學/生理學獎。1976年，Neher和Sakmann建立膜片鉗（Patchclamp）按術。1983年10月，《Single-ChannelRecording》一書問世，奠定了膜片鉗技術的里程碑。1991年，Neher和Sakmann的膜片鋪技術榮獲諾貝爾醫學/生理學獎。膜電位Vm由高輸入阻抗的電壓跟隨器所測量。

膜片鉗技術是當前研究細胞膜電流及離子通道的蕞重要的技術。從技術層面來解釋的話，膜片鉗技術(patchclamp)是指利用鉗制電壓或者電流的方法(通常為鉗制電壓)來記錄細胞膜離子通道電活動的微電極技術。膜片鉗技術的原理為：使用一個一頭尖一頭粗的錐狀玻璃管，管中設有微電極，管的前列直徑約1.5~3.0μm，通過負壓吸引使前列口與細胞膜形成千兆歐姆級的阻抗封接，前列口內的細胞膜區域與周圍其他區域形成了電學分隔，然后人工鉗制此片區域細胞膜的電位，即可達到對膜片上離子通道電流的監測與記錄。膜片鉗技術原理膜片鉗技術是用玻璃微電極接觸細胞，形成吉歐姆（GΩ）阻抗。日本全細胞膜片鉗廠家

了解離子通道的功能以及結構的關系對于從分子水平深入探討某些疾病措施等均具有十分重要的理論和實際意義。進口全細胞膜片鉗離子通道

高阻密封技術還***降低了電流記錄的背景噪聲，從而大幅提高了時間、空間和電流分辨率，如10μs的時間分辨率、1平方微米的空間分辨率和10-12年的電流分辨率。影響電流記錄分辨率的背景噪聲不僅來自膜片鉗放大器本身，還來自信號源的熱噪聲。信號源就像一個簡單的電阻，其熱噪聲為σn=4Kt△f/R其中σn為電流均方差的平方根，k為玻爾茲曼常數，t為溫度，△f為測量帶寬，R為電阻值。可以看出，為了獲得低噪聲電流記錄，信號源的內阻必須非常高。如果在1kHz帶寬、10%精度的條件下記錄1pA的電流，信號源的內阻應該大于2gω。電壓鉗技術只能測量內阻為100kω~50mω的大電池的電流，常規技術和制備無法達到所需的分辨率。進口全細胞膜片鉗離子通道