膜片鉗是一種用于研究生物膜電生理特性的技術,它可以在單細胞或組織切片上記錄膜電位的變化。這種技術可以用來研究細胞膜中的離子通道、離子泵以及神經元的電活動等。在膜片鉗實驗中,研究者會將單細胞或組織切片放置在一個稱為膜片電極的微小玻璃管中。這個電極會緊密地貼合在細胞或組織的表面,形成一個高阻抗的界面,使得研究者可以精確地測量細胞膜電位的變化。膜片鉗實驗的結果通常以電流-時間曲線(i-t曲線)的形式呈現。這些曲線可以顯示出在給定的時間內通過特定通道的電流強度,從而幫助研究者了解通道的性質和功能。除了測量電流外,膜片鉗還可以用來記錄膜電位的變化。這些變化可以反映出細胞對于各種刺激的反應,例如神經元的興奮或抑制。因此,膜片鉗是一種非常有用的工具,可以幫助研究者深入了解細胞和組織的生理學特性??偟膩碚f,膜片鉗是一種強大的電生理技術,可以用來研究細胞膜中的離子通道和離子泵的功能,以及神經元的電活動等。它對于理解細胞和組織的生理學特性,以及開發新的藥物和zhi療策略都具有重要的意義。在青蛙肌細胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,記錄到ACh啟動的單通道離子電流,從而產生了膜片鉗技術。芬蘭單電極膜片鉗報價
向電極連續施加1mV、10~50ms的階躍脈沖,電極入水后電阻約為4~6mΩ。此時,在計算機屏幕顯示框中可以看到測試脈沖產生的電流波形。剛開始的時候增益不要設置太高,一般可以是1~5mV/PA,避免放大器飽和。由于細胞外液和電極液離子組成的差異導致液體接界電位,電極剛入水時測試波形的基線不在零線上。因此,需要將保持電壓設置為0mV,并調整“電極不平衡控制”,使電極DC電流接近于零。當使用微操作器使電極靠近細胞時,當電極前緣接觸細胞膜時,密封電阻指標Rm會上升,當電極輕微下壓時,Rm指標會進一步上升。當通過細塑料管對電極施加輕微負壓,且細胞膜特性良好時,Rm一般會在1min內迅速上升,直至形成Gω級高阻密封。一般在Rm達到100MΩ左右時,在電極前端施加一個輕微的負電壓(-30~-30~-10mV),有利于gω密封的形成。此時的現象是電流波形再次變平,使電極從-40到-90mV超極化,有助于加速形成密封。為了確認gωseal的形成,可以提高放大器的增益,因此可以觀察到除了脈沖電壓開始和結束時的容性脈沖超前電流外,電流波形仍然是平坦的。芬蘭細胞膜片鉗參數想要深入了解離子通道?膜片鉗技術是您不可或缺的研究工具!
把膜電位鉗位電壓調到-80--100mV,再用鉗位放大器的控制鍵把全細胞瞬態充電電流調定至零位(EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標為全細胞電容和系列電阻)。寫下細胞的電容值Cc和未補整的系列電阻值Rs,用于消除全細胞瞬態電流,計算鉗位的固定時間(即RsCc),然啟根據歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細胞的電阻RC。緩慢調節Rs旋鈕注意測定脈沖反應的變化,逐漸增加補整的比例。如果RS補整非常接近振蕩的閾值,RS或Cc的微細變化都會達到震蕩的閾值,產生電壓的振蕩而使細胞受損。因此應當在RS補整水平寫不穩定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準備資料收集和脈沖序列的測定。
一、記錄設備首先,盡可能完善膜片鉗記錄設備是實驗前的重要步驟,如用模型細胞測定電子設備、安裝并測試應用軟件、調節光學顯微鏡、檢驗防震工作臺等。二、微電極的制備膜片鉗電極是用外徑為1-2mm的毛細玻璃管拉制成的。標準的毛細玻璃管(外經1.5mm,管壁厚0.3mm)適合于制作單通道記錄的微電極,而全細胞記錄則應選管壁較薄(0.16mm)的毛細玻璃管,這樣可以使電極阻抗較低。三、封接(Sealing)技術封接(seal)是膜片鉗記錄的關鍵步驟之一。封接不好噪聲太大必然影響細胞膜電信號的記錄,一般要求封接阻抗至少20GΩ才可進行常規記錄。為了形成良好封接必須保持清潔的溶液、良好的視野以及適當的電極鍍膜。為了獲得較好的"千兆歐封接",細胞表面必須裸露以便微電極前列能接觸細胞,細胞的大小也是成功記錄的個因素,一般選擇10-20um的細胞比較理想。細胞膜由脂類雙分子層和和蛋白質構成。
電壓鉗技術,是20世紀初由Cole發明,Hodgkin和Huxley完善,其設計的主要目的是為了證明動作電位的產生機制,即動作電位的峰電位是由于膜對鈉的通透性發生了一過性的增大過程。但當時沒有直接測定膜通透性的方法,于是就用膜對某種離子的電導來**該種離子的通透性,膜電導測定的依據是電學中的歐姆定律,如膜的Na電導GNa與電化學驅動力(Em-ENa)和膜電流INa的關系GNa=INa/(Em-ENa).因此可通過測量膜電流,再利用歐姆定律來計算膜電導,但是,利用膜電流來計算膜電導時,記錄膜電流期間的膜電位必須保持不變,否則膜電流的變化就不能**膜電導的變化。這一條件是利用電壓鉗技術實現的。下張幻燈中的右邊兩張圖是Hodgkin和Huxley在半個世紀以前利用電壓鉗記錄的搶烏賊的動作電位和動作電位過程中的膜電流的變化圖,他們的實驗***證明參與動作電位的離子流由Na,k,漏(Cl)三種成分組成。并對這些離子流進行了定量分析。這一技術對闡明動作電位的本質和離子通道的的研究做出了極大的貢獻。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業團隊,7*34小時隨時人工在線咨詢.膜片鉗通常用于實驗室、制造業和電子工業等領域,用于夾持薄膜、塑料薄膜、金屬箔等材料。日本單通道膜片鉗蛋白質分子水平
膜片鉗記錄技術與較早的單電極電壓鉗位相比進步了很多,尤其在單離子通道鉗位記錄方面。芬蘭單電極膜片鉗報價
80年代初發展起來的膜片鉗技術(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門控動力學特征及通透性、選擇性膜信息提供了直接的手段。該技術的興起與應用,使人們不僅對生物體的電現象和其他生命現象更進一步的了解,而且對于疾病和藥物作用的認識也不斷的更新,同時還形成了許多病因學與藥理學方面的新觀點。膜片鉗技術是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的或多個的離子通道分子活動的技術。它和基因克隆技術(genecloning)并架齊驅,給生命科學研究帶來了巨大的前進動力。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業團隊,7*27小時隨時人工在線咨詢.芬蘭單電極膜片鉗報價