在該自適應光學雙光子熒光顯微鏡中,她們將空間光位相調制器光學共軛到顯微物鏡的后焦平面,通過位相調制器將入射光分成若干子區域,每一塊子區域的波前都可以被控制。同時,她們用數字微陣列光處理器,以不同的頻率同時調制其中一半子區域的入射光強度,以另一半子區域作為“參考波前”。來自所有子區域光束會在焦點處會聚干涉,通過監測焦點激發的雙光子信號隨時間的變化情況,并進行傅里葉變換分析,可以“分解”得到被調制的每一塊子區域的“光線”的貢獻信息,從而可以實現對一半子區域波前的并行測量。對另一半子區域重復這一測量過程,從而獲得整個入射波前的信息并進行校正。該方法耗時很短,通常約1~3分鐘左右即可完成像差的測量和校正,無需復雜的計算,適用于任何標記密度和標記類型的樣品。更重要的是,得到的像差校正圖案可以用于提高較大視場范圍內的成像質量。該方法無疑為在體研究小鼠大腦皮層深層區域的生物、醫學問題提供了可行性方案。雙光子顯微鏡已延伸到各個領域研究中,它能對樣品進行三維觀察。國內熒光雙光子顯微鏡多少錢
研究人員通過用不同激光波長并行化激光掃描(wavelengthmultiplexing),增加了相同時間內可以成像的體積,并同時保持較高的時間和空間分辨率。通過引入兩種波長不同的鈣信號熒光探針,研究人員將神經元群體的活動標記為兩個不同顏色,并同時用兩個不同波長的激光激發探針,實現了兩個顏色的并行化數據記錄。為了實現三維空間成像,研究人員還分別在兩個激光光路上配置了快速變焦系統,分別為電可調節透鏡(electricaltunablelens)和空間光調制器(spatiallightmodulator)。由此,可以同時以10赫茲的速度記錄500微米500微米的10個平面,覆蓋縱深達600微米,涵蓋了從腦皮層第2層到第5層的結構,體積內記錄到的神經元可以達到2000個以上。國內ultimainvestigator雙光子顯微鏡雙光子顯微鏡放大倍數是多少?
而配合了雙光子激發技術,激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發揮功效。那么,什么是雙光子激發技術呢?在高光子密度的情況下,熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級,經過一個很短的時間后,電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子(P=h/λ)。利用這個原理,便誕生了雙光子激發技術。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光,通過物鏡匯聚,由于雙光子激發需要很高的光子密度,而物鏡焦點處的光子密度是比較高的,所以只有在焦點處才能發生雙光子激發,產生熒光,該點產生的熒光再穿過物鏡,被光探頭接收,從而達到逐點掃描的效果。
為了驗證動物生物樣品的時間分辨成像能力,本實驗觀察了活海拉細胞高爾基體中的青色熒光蛋白mTFP1,見圖3(a),(c)-(i)。使用的物鏡及尺寸與熒光顆粒成像一致,對比可見v2PE在空間分辨率、激發深度級圖像對比度較常規寬場顯微鏡都有所提高。此外,v2PE可以同時激發多個波長的熒光蛋白,這種技術還可以應用于細胞內分子的三維動力學多色成像。在此基礎上,實驗對海拉細胞中的高爾基體(mTFP1)和纖顫蛋白(EGFP)進行了在體成像,見圖3(j)-(n),青色為mTFP1,綠色為EGFP,實驗中兩種熒光蛋白同時成像,終采用光譜分離法將不同蛋白的熒光信號分離出來。雙光子顯微鏡有哪些應用呢?
2020年,臨研所、病理科和科研處邀請北京大學王愛民副教授做了題目為“新一代微型雙光子顯微成像系統介紹及其在臨床醫療診斷”的學術報告。學術報告由臨研所醫學實驗研究平臺潘琳老師主持。王愛民,北京大學信息科學技術學院副教授,畢業于北京大學物理系,獲學士、碩士學位,后于英國巴斯大學物理系獲博士學位。該研究組研發的微型雙光子顯微鏡,第1次在國際上獲得了小鼠大腦神經元和神經突觸清晰穩定的動態信號,該成果獲得了2017年度“中國光學進展”和“中國科學進展”,并被NatureMethods評為2018年度“年度方法--無限制行為動物成像”。目前,該研究組正在研究新一代雙光子顯微成像技術在臨床診斷中的應用,為未來即時病理、離體組織檢測、術中診斷等提供新的影像手段和分析方法。雙光子顯微鏡非常適合對細胞組織進行長時間在體成像。進口ultimainvestigator雙光子顯微鏡代理商
雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖器。國內熒光雙光子顯微鏡多少錢
雙光子顯微成像技術不是什么新技術,早在20多年前就有了,目前已經在生命科學和材料科學中廣泛應用。幾年前雙光子**過期后,已經推出自己的雙光子顯微鏡的廠家估計不少于10家以上。即便如此,世界上很多實驗室都搭雙光子,自己搭的好處有很多,首先是便宜,尤其是實驗室已經有飛秒激光器,那就更很省錢了。其次是靈活,可以選擇針對特殊用途的搭配,改動也靈活。結束后的好處就是可以鍛煉隊伍,一趟走下來可以把新手帶出來,后期維護也更加自由。當然壞處也不少,首先是操心,特別是第1次搭的時候,開始要想方案,后來要解決各種實際問題。其次是花時間,加上買配件的時間,比買一臺現成的商業化雙光子耗時長?,F在已經有不少關于如何搭雙光子顯微鏡的文章,各種protocol,大多是老外寫的,中文的較少。其實完全自己搭一套好用的系統還是不容易的,尤其是沒有經驗的時候,容易走彎路,多花錢,也多花時間,再加上雙光子的重要器件都需要從國外購買,在國內買這些東西耗時較長。因此,我想總結一下我們的經驗,貼出來分享,希望能幫到想自己動手的實驗室國內熒光雙光子顯微鏡多少錢
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