雙光子顯微鏡成像原理是什么

Denk很快就將雙光子顯微鏡用于神經元成像，而1997年在Svoboda測量完整老鼠大腦的錐體神經元的感官刺激誘導樹突鈣離子動態后，雙光子顯微鏡的潛能開始完全凸顯。值得一提的是，霍華德·休斯醫學院Svoboda實驗室和Thorlabs在2016年合作推出了一種強大的多光子介觀顯微鏡，其成像視場達到5毫米，能夠跨多個腦區進行高速功能成像。根據清華大學單一采購來源的**指導意見：這種顯微鏡的視場是普通雙光子顯微鏡的10倍。30年來，雙光子顯微鏡已成為較厚***生物組織三維成像中不可或缺的工具。從雙光子到三光子甚至四光子，這種非線性成像技術通常也被統稱為多光子顯微鏡。下圖統計了自1990年以來每年發表的多光子顯微鏡文章數量，發展速度可見一斑。雙光子顯微鏡大量運營在實驗室當中；雙光子顯微鏡成像原理是什么

通過對微型光學系統的重新設計，FHIRM-TPM 2.0成像視野擴大至420×420平方微米，微型物鏡的工作距離擴展至1毫米，以實現非侵入式成像；嵌入了可拆卸的快速軸向掃描模塊，實現了180微米深度的三維體成像和多平面快速切換的實時成像。該模塊由一個快速的電動變焦透鏡和一對中繼透鏡組成，在不同深度成像時保持放大倍率恒定。其中，變焦模塊重量1.8克，研究人員可根據實驗需求自由拆卸。此外，新版微型化成像探頭還可整體即時拔插，極大地簡化了實驗操作，避免了長周期實驗時對動物的干擾。在重復裝卸探頭追蹤同一批神經元時，視場旋轉角小于0.07弧度，邊界偏差小于35微米。ultima雙光子顯微鏡光刺激雙光子顯微鏡已延伸到各個領域研究中，它能對樣品進行三維觀察。

隨著技術的發展，雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優化，結合它的特點，大致可以分成深和活兩個方面的提升。要想讓激發激光進入更深的層面，大致可從兩個方面入手，裝置優化與標本改造。關于裝置優化，我們可以把激光束變得更細，使能量更加集中，就能讓激光穿透更深。關于標本，其中影響光傳播的主要是物質吸收和散射，解決這個問題，我們需要對樣本進行透明化處理。一種方法是運用某種物質將標本浸泡，使其中的物質（主要是脂質）被破壞或溶解。另一種方法是運用電泳將脂質電解，讓標本“透明度”提高。

許多生物醫學成像方式，無論是單光子(共聚焦)或多光子(雙光子)，都使用激光作為光源，并需要兼容的熒光染料。熒光染料有自己的激發波長，它們可以被單個光子以該激發波長的光子能量激發(E=hv=h*c/λ);或者是兩個幾乎同時到達的光子，但每個光子的能量約為單光子能量的一半，即雙波長(0.5E->2λ)。前者是單光子顯微鏡原理，后者是雙光子顯微鏡原理。在對同一種熒光染料進行成像時，雙光子與單光子相比可以使用約兩倍波長，因此雙光子的散射較小(波長較長，散射較小)，可以更深入地滲透到組織中。雙光子顯微鏡能夠進行指標成像；

雙光子顯微鏡為什么穿透能力強？因為組織對可見光區域的較強吸收和散射帶來兩個嚴重的問題第1個是激發光的減弱，第2個就是另外就是由于物鏡本身光的光學特性，單光子激發的背景較強，所以才有共聚焦系統提高成像的分辨率因為組織對可見光區域的較強吸收和散射帶來兩個嚴重的問題第1個是激發光的減弱，第2個就是另外就是由于物鏡本身光的光學特性，單光子激發的背景較強，所以才有共聚焦系統提高成像的分辨率剛好雙光子在這兩點具有很大的優勢上面的內容基本在談到雙光子優勢都會相對說明，在實際操作中成像的深度和樣品的關系很大，雙光子成像利用高亮度的熒光標記材料，已經有做到mm級別的穿透深度雙光子顯微鏡明日之星--FemtoFiber ultra 920 。國內investigator雙光子顯微鏡多少錢

雙光子顯微鏡知多少。雙光子顯微鏡成像原理是什么

雙光子顯微鏡是結合了雙光子激發技術和激光掃描共聚顯微鏡的一種新型熒光顯微鏡，其原理大致是這樣的：首先，讓我們來看看什么是熒光顯微鏡。熒光顯微鏡是以紫外線為光源，照射被檢物體上的熒光物質或是熒光染料，使其發出熒光。相比普通光學顯微鏡，熒光顯微鏡運用了波長更短的紫外線，再將可見光過濾掉，提高了分辨力率。而當被檢物體過厚時，從不同深度發出的熒光都會打在物鏡上，使觀察到的像模糊、發虛，無法清楚的知道被檢物體的結構。而激光掃描共聚顯微鏡就是在熒光顯微鏡的基礎上，增加了激光掃描裝置，從而解決了上述問題。激光共聚掃描顯微鏡脫離了傳統光學顯微鏡的場光源和局部平面成像模式，采用激光束作光源，激光束經照明孔，經由分光鏡反射至物鏡，并聚焦于樣品上，對標本焦平面上每一點進行掃描。組織樣品中的熒光物質受到刺激后發出的熒光經原來入射光路直接反向回到分光鏡，通過探測孔時先聚焦，然后被光探頭收集，轉化為信號輸送到計算機進行處理。這個裝置能讓通過探測***的只有焦平面上發出的熒光，使成像更為清晰準確，同時通過改變物鏡的焦距，能對不同焦平面進行掃描，通過計算機繪出普通顯微鏡無法觀測的三維圖像。雙光子顯微鏡成像原理是什么