無菌補料:通過分裝口可以定量添加無菌添加劑。大尺寸的分裝口帶有安全鎖。通過使用一個瓶子將添加劑添加到分裝開口或通過一個septum膜,使用注射器將添加劑加入,確保了添加劑的無菌添加。無菌分裝:培養基制備器的分裝口可以在分裝的時候打開,用于無菌分裝培養基。硅膠管是使用分裝接頭連接到分裝口。為了確保培養基的無菌分裝,硅膠管和分裝接頭必須提前在滅菌器中滅菌。培養基可以通過集成的空壓機產生的無菌空氣壓力分裝或通過連接到常見的蠕動泵或其他集成成泵的裝置,來進行培養基的分裝。培養基制備器放入燒杯或瓷缸中,慢慢加入少量所需水,邊加入邊用玻璃棒攪拌。河北瓊脂培養基 培養基制備器
實驗室在制作培養基時候的經驗總結:培養基分裝:培養基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養基時,分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為恰當。分裝容器應預先清洗干凈并經干烤消毒,以利于培養基的徹底滅菌。每批培養基應另外分裝20ml培養基于一小玻璃瓶中,隨該批培養基同時滅菌,以為測定該批培養基較終pH之用。江蘇培養基滅菌 培養基制備器在液體培養基中的培養稱為液中培養、液體培養或液內培養。
血清培養基主要問題:血清的成份可能有幾百種之多,對其準確的成份、含量及其作用機制不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難。血清都是批量生產,各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標準化和連續性受到限制。對大多數細胞,在體內狀態,血清不是它們接觸的生理學液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內的正常狀態,血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時抑制另一類細胞生長(表皮細胞)。
配制培養基的原則:控制培養基的條件,控制培養基的pH配制培養基必須根據微生物的特點調節pH。各大類微生物要求的適宜生長pH范圍不同。如霉菌與酵母菌一般為5.0-6.0,細菌為6.5-7.5.放線菌為7.5-8.5.培養基的pH與其C/N有極大關系。C/N高的培養基,例如培養各種的培養基,經培養后其pH明顯下降;相反,C/N低的培養基,例如培養一般細菌的培養基,經培養后,其pH則明顯上升。這是由于營養物質的消耗與代謝產物的積累,改變了培養基的pH,若不及時控制,將導致菌體生長停止。有時需要在培養基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產生,或適當提高滅菌溫度。
微生物檢驗培養基制備的要點:培養基分裝,準備好的中.海培養基根據用途不同分為燒瓶、試管等容器,分裝試管量大采用自動分液器,分裝試管量小,可以用漏斗分液。分液量不超過容器體積的三分之二。三角瓶不要超過體積的二分之一;瓊脂斜面不要超過試管長度的五分之一。滅菌后斜面應為培養基量的三分之一,底層應為培養基量的三分之二;半固態瓊脂的體積為三分之一;用于接種或保護細菌的高級瓊脂,分裝試管長度的三分之一和四分之一,接種厭氧菌的量應達到三分之二;瓊脂平板90毫米內徑13~15毫升,內徑70毫米8~10毫升。如果瓊脂平板表面較水,可將平板倒置,置于37℃培養箱中三十分鐘,晾干后使用。每批培養基分裝在二十毫升左右的小玻璃瓶中,與該批培養基同時滅菌,在以確定這批培養基的很終pH值。全自動培養基制備儀主要特點:儀器蓋設計保護鎖,超過100度自動加鎖,使實驗環境更安全。江蘇培養基滅菌 培養基制備器
全自動培養基制備儀主要特點:力攪拌,確保培養基受熱均勻,營養均一。河北瓊脂培養基 培養基制備器
血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理:血清中沉淀物的出現有許多種原因,但好普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成的,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物并不影響血清本身的質量。若想去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。何謂熱滅活:一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟可以使補體去活化,而補體所參與的反應有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和啟動。河北瓊脂培養基 培養基制備器