培養基的配制:1、配料:在容器中加入少量水,按照配方稱取各種藥品,加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。2、溶解:淀粉溶解:少量冷水調成糊狀,加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。3、調PH:用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養基調節到所要求的值。4、過濾:濾紙或棉花進行過濾。5、分裝:一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。(1)三角瓶:若作靜置培養,則100ml培養基/250ml的三角瓶,較多不能超過150ml培養基/250ml的三角瓶,否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養,則15-20ml培養基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。(2)試管分裝:液體培養基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度。固體斜面培養基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。6、包扎:分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。7、滅菌:按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養成分會被破壞,培養基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。低滲溶液則使細胞吸水膨脹易破裂,因此,配制培養基時要掌握營養物質的濃度。江西瓊脂滅菌 培養基制備儀
制作牛肉膏蛋白胨固體培養基:(1)方法步驟:計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(2)倒平板操作的步驟:①將滅過菌的培養皿放在火焰旁的桌面上,右手拿裝有培養基的錐形瓶,左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶,將瓶口迅速通過火焰。③用左手的拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養基(約10~20mL)倒入培養皿,左手立即蓋上培養皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固,大約需5~10min。然后,將平板倒過來放置,使培養皿蓋在下、皿底在上。倒平板操作的討論1.培養基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時,才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時,就可以進行倒平板了。西藏培養基制備儀培養基長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質破壞,如使糖類物質形成氨基糖、焦糖。
固體斜面培養基配制:培養基的過濾澄清,液體培養基必須一定澄清,瓊脂培養基也應透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養基可用濾紙過濾法,濾紙應折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。瓊脂培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的培養基放入大的三角燒瓶內,裝入量不得超過燒瓶容量的1/2,每1000ml培養基加入1~2個雞蛋的蛋白,強力振搖3~5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。培養基的分裝,培養基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。
培養基的使用:1.瓊脂培養基的融化:將培養基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高壓鍋中的蒸汽)融化。經過高壓滅菌的培養基盡量減少重新加熱的時間,避免過度加熱。培養基融化后立即移開,室溫靜置片刻(約2min),以免玻璃容器發生破裂。融化后的培養基放入47℃~50℃恒溫水浴鍋中保溫,冷卻到47℃~50℃所需的時間取決于培養基的類型、體積和在水鍋里的分裝量。融化后內培養基應盡快使用,放置時間一般不超過4h。剩余的培養基固后不得再次融化使用。特別是靈敏性培養基,應根據相關標準,縮短融化后放置的時間。固體培養基根據性質又分為固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態培養基、濾膜。
培養基的制備步驟有哪些:第1,用水:培養基制備用水應使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水,較好不使用離子交換器生產的去離子水。第二,稱量。稱量時要用獨有的角匙,避免交叉污染而影響檢驗結果;干粉培養基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養基。第三,復水,復水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養基中,影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養基溢出;含有瓊脂粉的培養基,在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘;加熱培養基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養基較好使用沸水浴進行加熱。液體培養基是培養基物理分類一種,是相對固體培養基而言的,是微生物或動植物細胞的液狀培養基。培養基滅菌 培養基制備儀價格
培養基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料。江西瓊脂滅菌 培養基制備儀
培養基的稱量和溶解:小心稱量所需量的脫水合成培養基(必要時佩戴口罩或在通風柜中操作,以防吸入含有有毒物質的培養基粉末),先加入適量的水,充分混合(注意避免培養基結塊),然后加水至所需的量后適當加熱,并重復或連續攪拌使其快速分散,必要時應完全溶解。含瓊脂的培養基在加熱前應浸泡幾分鐘。注意:培養基的加熱溶解或高溫滅菌盛放使用的容器不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養基中,使細菌不易生長。較好使用不銹鋼鍋加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時攪動、以防焦化、如發現有焦化現象、該培養基即不能使用,應重新制備。江西瓊脂滅菌 培養基制備儀
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