1996年GRaposo等發現類似于B淋巴細胞的免疫細胞也會分泌抗原呈遞外泌體(antigenpresentingvesicle),所分泌的外泌體可以直接刺激效應CD4+細胞的抗一些病癥反應。2007年HValadi等進一步發現細胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質。隨著有關外泌體研究越來越多,研究者發現它普遍參與了機體免疫應答、抗原呈遞、細胞分化、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中。目前的主流觀點認為,外泌體的產生過程為:細胞膜內陷,形成內體(endosome),再形成多泡體(multivesicularbodies,MVB),較后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細胞的多種蛋白質、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體較早見于1981年,EGTrams等在體外培養的綿羊紅細胞上清液中發現了有膜結構的小囊泡,并命名為exosome。對于外泌體的作用,當時推測為細胞排泄廢物的一種方式。如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規化應用的關鍵。蕪湖正規外泌體提取試劑廠家
外泌體的提取方法學規范、統一定量及鑒定等。關于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣,費事費力,而且步驟多導致實驗中容易污染,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩定。而且對于抽提細胞上清來說,更是極為不請便,試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,無論是過濾還是后續的每一步的離心去沉淀,都具有操作極其不便的缺點,總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,造成濃縮效率低,濃縮管重復利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團,造成損失及較后的數據有誤差,對于后續實驗也有影響。寧波外泌體提取試劑廠家推薦同時可獲得高純度和高回收率的外泌體——如新西蘭IZON開發的系列的外泌體排阻劑。
外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,可通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成多泡內涵體,內涵體與細胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間,其中包含RNA、蛋白質、microRNA、DN段等多種物質,存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發現至今已有30多年的歷史,雖然較初被認為可能是細胞的“垃圾”,所以才被排出來,但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞。如今,研究已經發現外泌體在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、一些病癥細胞發生的發展、神經細胞信號轉導過程中都發揮著重要作用。
外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,多角度進行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結構觀察,即通常為茶托型或一側凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標志物檢測:外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細胞質蛋白,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結合蛋白(Annexins);使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,截留完成后。外泌體提取:回收率不穩定(可能與轉子類型有關),純度也受到質疑。
具膜囊泡,當我們使用常規方法分離這些結構時不推薦使用其他的名稱來稱呼它們。外泌體(exosome)適用于通過特殊手段拿到的由胞內體來源的釋放到細胞外的膜泡結構。建議對細胞外囊泡進行細分時使用物理上的界定如小細胞外囊泡(sEV)和中/大細胞外囊泡(m/lEV),或者高密度囊泡(highdensity)和低密度囊泡(lowdensity)等,同時也建議使用表面蛋白來界定如CD63+CD81+細胞外囊泡等。當使用exosomes等稱呼時應當進行嚴謹的實驗證明使用的“exosomes樣品”是由胞內體途徑產生的。小和同學:都是細胞外囊泡,外泌體和微囊泡有啥區別?小光老師:外泌體和微囊泡的區別在于其生成的方式不同。從晚期內體來源產生的細胞外囊泡稱為外泌體,從細胞膜直接出芽產生的細胞外囊泡稱為微囊泡。外泌體的提取方法:色譜法。溫州外泌體提取試劑哪里買
外泌體提取:密度梯度離心。蕪湖正規外泌體提取試劑廠家
外泌體:該研究主要是做了牡蠣基因組測序,并揭示其應激適應和殼結構的復雜性。其中涉及,所鑒定的259種殼蛋白中的84%不是經典分泌蛋白;它們可能是細胞的一部分或被外泌體沉積而來。259個殼蛋白中的61個與外泌體數據庫中的蛋白質匹配,支持了外泌體的存在。在礦化前緣處觀察到含有方解石晶體的細胞和外泌體樣囊泡,盡管它們在殼形成中的重要性是有爭議的。這項研究為它們在殼內的存在及其可能參與殼形成提供了分子證據。Hedgehog(Hh)蛋白的保守家族作為短距離和長距離分泌的形態發生素,在胚胎發育過程中控制組織構型和分化。成熟的Hh攜帶疏水性棕櫚酸和對其細胞外擴散至關重要的膽固醇修飾。蕪湖正規外泌體提取試劑廠家