檢測新鮮培養基是否有支原體污染，可以采用以下五種方案： 1. 培養法：這是一種傳統且可靠的方法，通過將培養基接種到適宜支原體生長的微生物培養基或瓊脂平板上，觀察是否有支原體生長。這種方法較為耗時，但成本較低。 2. 熒光染色法：使用特定的熒光染料（如Hoechst 33258）對細胞進行染色，然后在熒光顯微鏡下觀察。如果存在支原體污染，可以看到細胞表面或細胞間隙中支原體DNA的熒光染色。 3. PCR法：通過設計針對支原體特定序列的引物，利用PCR技術特異性擴增目標DNA。PCR產物通過瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，如果出現條帶則表明存在支原體污染。 4. 電鏡觀察法：使...

支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養基。在細胞培養中，支原體污染是常見的問題，因此需要對細胞和培養基進行檢測。細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床用細胞等都需要進行支原體檢查，這通常包括培養法和指示細胞培養法（DNA染色法）。同時，病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養法檢查支原體，必要時，也可以采用指示細胞培養法篩選培養基。 此外，支原體檢測的培養基推薦使用支原體肉湯培養基和精氨酸支原體肉湯培養基等，這些培養基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體。在進行支原體檢測時，需要取培養物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養基或瓊脂平板上。 因此，支原體檢測的樣本既可以是細胞，...

支原體是一類細菌，由于缺乏細胞壁，具有靈活的膜結構。這使得支原體的形態多變，很難在高倍顯微鏡下識別。并且能夠抵抗壓力、溫度、滲透壓和脫水，對許多針對細胞壁合成的常見抗*素具有抗性。它們的體積非常小，直徑通常在0.15~0.3μm，因此能夠輕易地穿過過濾系統。支原體能在哺乳動物細胞培養中可以高濃度生長，而不引起明顯的混濁或其他可見的污染跡象。 支原體通過特殊的前端細胞器與宿主細胞結合。支原體前端細胞器富含粘附素，可以附著在真核細胞上并穿透宿主細胞。支原體缺乏剛性細胞壁，可能有助于其與宿主細胞膜融合，并交換其膜和細胞質成分。支原體的對細胞的毒性包括支原體侵襲性、分泌的致病酶和一些膜成分...

LAMP法，即環介導等溫擴增技術（Loop-mediated isothermal amplification），是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法。它由日本學者Notomi于2000年開發。LAMP法檢測有以下特性： 快速高效：LAMP技術可以在1小時內把幾拷貝的目的序列迅速擴增到10^9^～10^10^拷貝，擴增效率高。 簡便性：LAMP技術不需要進行模板的預變性，減少了PCR技術升降溫帶來的影響以及對昂貴、精密實驗儀器的要求，同時擴增效率高，可以在較短時間內完成檢測。 LAMP法因其快速、高效、特異、靈敏和經濟等優點，已經應用于病原菌、寄生蟲、病毒、疾病和轉基因產...

在科研中，支原體檢測是確保細胞培養純凈性的重要環節。以下是一些在科研中常見的支原體檢測方法： 1. 支原體培養法：這是一種傳統的檢測方法，通過將細胞培養物接種到特定的培養基中，觀察是否有支原體生長。這是直接的檢測方法，但耗時較長，通常需要數周時間。 2. DNA染色法：使用熒光染料（如Hoechst或DAPI）染色細胞核，然后通過熒光顯微鏡觀察。這種方法操作簡便，可以快速得到結果，但特異性不高，可能會有假陽性。 3. 聚合酶鏈反應（PCR）法：這是一種分子生物學技術，通過設計特異性的引物，擴增支原體DNA，從而檢測支原體的存在。PCR法具有高靈敏度和特異性，已成為日常...

支原體的預防可通過以下方式： 1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細胞培養中的支原體污染，確保細胞培養體系內無支原體存在，從而獲得準確有效的實驗數據。 2. 改善無菌操作技術：通過提高實驗人員的操作技術和意識，避免在細胞培養過程中引入支原體污染。 3. 使用無菌設備和耗材：使用無菌的細胞培養設備和耗材，如無菌培養基、血清等，減少支原體污染的風險。 4. 定期消毒和清潔：對實驗室環境進行定期的消毒和清潔，包括工作臺、培養箱等，以減少支原體的潛在污染。 5. 使用預防性試劑：使用專門針對支原體的預防性試劑，如加入細胞培養基中的預防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預防和細胞培...

細胞庫支原體檢測的必要性主要體現在以下幾個方面： 1. 確保細胞庫的質量與安全性：細胞庫的建立需要為生物制品的生產提供檢定合格、質量相同、能持續穩定傳代的細胞。支原體檢測是確保細胞庫中細胞質量的重要環節。 2. 符合監管要求：支原體檢測是生物制品安全性監管的一部分，全球范圍內的藥典、法規和指導文件中都有支原體檢測的相關說明。 3. 避免對生物制品的影響：支原體污染可能會影響生物制品的安全性和有效性，因此需要通過檢測來避免這種風險。 4. 維護細胞培養的穩定性：支原體是真核細胞和干細胞培養中最常見的問題之一，它們可以改變細胞的代謝、減緩增殖速度，甚至引起染色體畸變。 ...

對于同一個樣品，如果一步法恒溫試劑盒檢測結果為陽性，而PCR檢測為陰性，可能的原因包括： 1. 檢測的支原體種類不同：一步法恒溫試劑盒可能檢測的支原體種類更多，例如可以涵蓋27種支原體，而PCR檢測可能只針對常見的12種支原體進行檢測。因此，如果樣品中污染的支原體種類不在PCR檢測的范圍內，就可能出現一步法檢測為陽性而PCR檢測為陰性的情況。 2. 靈敏度的差異：PCR方法的靈敏度可能高于一步法恒溫檢測法。PCR可以檢測到低至單個拷貝的支原體，而一步法恒溫檢測可能需要更高的支原體拷貝數，例如10^3^個拷貝。如果樣品中支原體的數量低于一步法檢測的靈敏度閾值，PCR檢測可能無法檢...

支原體去除試劑使用后，對支原體的檢測可能會有影響。一些支原體去除試劑通過特異性地與支原體膜結合、改變支原體膜的通透性來殺死支原體，而對真核細胞幾乎沒有影響。然而，某些情況下，去除試劑可能會對細胞的活力和形態產生一定的影響，尤其是在去除劑作用期間。此外，如果去除劑的效果不徹底，可能會導致細胞再次被支原體污染。 需要注意的是，某些支原體去除試劑可能會在去除支原體的過程中導致支原體膜溶解，從而釋放出支原體的DNA，這可能會在隨后的支原體核酸檢測中引起假陽性結果。因此，在去除支原體后，建議在繼續正常傳代培養幾代細胞后再進行支原體檢測，以確保檢測結果的準確性。 支原體去除試劑使用之后...

支原體污染一旦發生，不僅對細胞培養造成嚴重影響，甚至可能導致實驗結果失真。而且支原體污染在細胞培養實驗中相當常見。因此，預防措施是確保細胞培養環境和實驗結果可靠性的重要手段。 01/ 良好的無菌技術及實驗操作，保證操作不會引入新的污染 02/ 保持實驗空間的清潔 03/ 確保從可靠的來源獲取細胞，減少不同細胞之間的交叉傳染 04/ 防止交叉污染 05/ 減少氣溶膠生成 06/ 謹慎使用抗*素 07/ 定期支原體篩查 08/ 丟棄或處理受到支原體污染的細胞 09/ 保持良好的記錄 支原體檢測有哪些方法？北京細胞培養支原...

對于同一個樣品，如果PCR檢測結果為陽性而一步法恒溫檢測試劑盒結果為陰性，可能的原因包括： 1. 靈敏度差異：PCR方法通常具有較高的靈敏度，可以檢測到單個拷貝的支原體DNA。相比之下，一步法恒溫檢測試劑盒可能需要更高的支原體拷貝數才能檢測出陽性結果，例如需要10^3個拷貝。如果樣品中的支原體數量低于一步法試劑盒的檢測閾值，就可能出現PCR陽性而一步法陰性的情況。 2. 檢測范圍：PCR檢測可以針對特定的支原體序列設計引物，如果樣品中的支原體種類或序列與一步法試劑盒的檢測范圍不完全匹配，可能導致一步法檢測不出。 3. 樣品處理和提取：一步法恒溫檢測試劑盒可能對樣...

支原體預防的實驗步驟主要包括以下幾個方面： 1. 無菌操作技術：在細胞培養過程中，嚴格遵守無菌操作規程，包括穿戴適當的實驗服、手套，使用無菌工具和耗材。 2. 環境控制：保持實驗室環境清潔，定期消毒工作臺和實驗室表面，使用層流罩或生物安全柜進行細胞操作。 3. 細胞培養基和試劑的無菌過濾：所有加入到細胞培養基中的試劑和補充物，如血清、抗*素等，都應通過無菌過濾以去除支原體。 4. 細胞培養基和試劑的檢測：在添加到細胞培養物之前，對新的細胞培養基和試劑進行支原體檢測，以確保它們沒有被污染。 5. 定期檢測：即使采取了預防措施，也應定期對細胞培養物進行支...

細胞培養中支原體檢測出現假陽性結果可能由以下原因引起： 1. 擴增產物污染：PCR擴增產生的大量DNA拷貝若未妥善處理，極微量的污染就可能導致假陽性結果。 2. 引物設計不當：引物設計不夠特異性，可能會與非目標序列發生反應，導致非特異性擴增。 3. 試劑質量問題：使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等試劑質量不佳，可能引起非特異性擴增或假陽性結果。 4. 操作技術問題：實驗操作不規范，如混合樣本、標簽錯誤或樣本標識不清等，可能導致假陽性結果。 5. PCR反應條件設置不當：不恰當的PCR反應條件，如溫度和時間選擇不當，可能導致非特異性擴增。 6. DNA...

支原體的預防可通過以下方式： 1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細胞培養中的支原體污染，確保細胞培養體系內無支原體存在，從而獲得準確有效的實驗數據。 2. 改善無菌操作技術：通過提高實驗人員的操作技術和意識，避免在細胞培養過程中引入支原體污染。 3. 使用無菌設備和耗材：使用無菌的細胞培養設備和耗材，如無菌培養基、血清等，減少支原體污染的風險。 4. 定期消毒和清潔：對實驗室環境進行定期的消毒和清潔，包括工作臺、培養箱等，以減少支原體的潛在污染。 5. 使用預防性試劑：使用專門針對支原體的預防性試劑，如加入細胞培養基中的預防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預防和細胞培...

支原體是一類細菌，由于缺乏細胞壁，具有靈活的膜結構。這使得支原體的形態多變，很難在高倍顯微鏡下識別。并且能夠抵抗壓力、溫度、滲透壓和脫水，對許多針對細胞壁合成的常見抗*素具有抗性。它們的體積非常小，直徑通常在0.15~0.3μm，因此能夠輕易地穿過過濾系統。支原體能在哺乳動物細胞培養中可以高濃度生長，而不引起明顯的混濁或其他可見的污染跡象。 支原體通過特殊的前端細胞器與宿主細胞結合。支原體前端細胞器富含粘附素，可以附著在真核細胞上并穿透宿主細胞。支原體缺乏剛性細胞壁，可能有助于其與宿主細胞膜融合，并交換其膜和細胞質成分。支原體的對細胞的毒性包括支原體侵襲性、分泌的致病酶和一些膜成分...

細胞培養中支原體檢測出現假陰性結果可能由以下原因引起： 1. 樣本質量問題：如果采集的樣本中含有抑制劑或者樣本在處理、存儲過程中出現問題，可能會影響PCR反應，導致假陰性。 2. 技術或操作問題：實驗操作中的誤差，如樣本處理不當、試劑配制錯誤、儀器設備問題等，都可能導致假陰性結果。 3. 檢測方法的局限性：某些檢測方法可能存在靈敏度或特異性不足的問題，導致無法準確檢測到病原體。 4. 培養基和培養條件的影響：培養法的靈敏度容易受到培養基和培養條件的影響，如果培養條件不適宜，可能導致支原體無法生長或生長緩慢，從而檢測不到。 5. 支原體種類問題：不是所有的支原體...

支原體檢測的應用場景非常廣*，以下是一些主要的應用領域： 1. 細胞培養：在實驗室和生物制品工廠中，細胞培養過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導致細胞功能改變，影響實驗結果和生物制品的質量。因此，支原體檢測在細胞培養的質量控制中至關重要。科研中常用等溫擴增的方法簡單便捷。 2. 生物制品生產：在生物制品的生產過程中，如疫苗、生物藥物等，需要確保產品無支原體污染，以保證其安全性和有效性。監管機構要求在生產的關鍵階段進行支原體檢測。通常采用qPCR的方式進行。 支原體污染源和主要類型？上海細胞培養支原體檢測如何取樣 細胞培養中支原體污染的檢測方法有多種，以下是一些常用的檢測...

細胞培養中建議使用支原體檢測的原因主要有以下幾點： 1. 支原體污染率高：常規細胞培養中支原體污染率保守估計在15-35%之間。 2. 影響實驗結果：支原體污染會嚴重干擾實驗結果的可信度，影響培養細胞的形態和生理特征。 3. 難以用光學顯微鏡檢測：支原體是極小的細菌，其細胞膜周圍沒有細胞壁，無法用光學顯微鏡檢測到。 4. 難以消滅：支原體能夠迅速滲透整個實驗室，一旦污染很難徹底消滅。 5. 影響產品質量：支原體污染會影響細胞培養產物的質量，監管機構推薦檢測所有細胞培養產物中是否存在支原體。 6. 保證實驗準確性：定期進行支原體檢測和去除，確保無支原體存在...

對于同一個樣品，如果一步法恒溫試劑盒檢測結果為陽性，而PCR檢測為陰性，可能的原因包括： 1. 檢測的支原體種類不同：一步法恒溫試劑盒可能檢測的支原體種類更多，例如可以涵蓋27種支原體，而PCR檢測可能只針對常見的12種支原體進行檢測。因此，如果樣品中污染的支原體種類不在PCR檢測的范圍內，就可能出現一步法檢測為陽性而PCR檢測為陰性的情況。 2. 靈敏度的差異：PCR方法的靈敏度可能高于一步法恒溫檢測法。PCR可以檢測到低至單個拷貝的支原體，而一步法恒溫檢測可能需要更高的支原體拷貝數，例如10^3^個拷貝。如果樣品中支原體的數量低于一步法檢測的靈敏度閾值，PCR檢測可能無法檢...

支原體污染后的細胞是否應該直接丟棄還是嘗試重新培養，這取決于多種因素，包括細胞的重要性、污染的程度、以及是否有有效的方法來清*支原體。以下是一些處理支原體污染的常見方法： 1. 直接丟棄：對于非重要的細胞，如果培養中的細胞、WCB的細胞等，可以采取直接將培養物與用過的培養基滅活后丟棄的方式。 2. 使用支原體清除劑：支原體清除劑處理細胞，作用濃度為25μg/ml，兩周可以清*支原體。 3. 使用支原體清*培養基：每2~3天更換一次新鮮培養液，并用無菌的PBS洗滌細胞，處理15天后進行支原體檢測，以確定支原體是否被完全去除。 4. 支原體去除試劑：這是一種混合...

目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類、動物、昆蟲和植物中，其中 20 +種在細胞培養中被發現為污染物。支原體在實驗室中的傳播來源多種多樣，主要來源包括實驗室人員、胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS）、以及由豬來源的胰蛋白酶溶液。此外，來自其他實驗室或商業供應商的細胞培養物、培養基、污染的試劑；非無菌供應品、培養基和溶液；實驗室人員；培養箱；液氮；空氣顆粒和氣溶膠；抗*素的過度使用；細胞培養器皿的不正確密封；以及其他的支原體細胞培養物等都可能成為支原體的傳播途徑。支原體檢測方法qPCR法？上海細胞培養支原體檢測試劑價格 檢測新鮮培養基是否有支原體污染，可以采用以下五種方案： ...

對于同一個樣品，如果PCR檢測結果為陽性而一步法恒溫檢測試劑盒結果為陰性，可能的原因包括： 1. 靈敏度差異：PCR方法通常具有較高的靈敏度，可以檢測到單個拷貝的支原體DNA。相比之下，一步法恒溫檢測試劑盒可能需要更高的支原體拷貝數才能檢測出陽性結果，例如需要10^3個拷貝。如果樣品中的支原體數量低于一步法試劑盒的檢測閾值，就可能出現PCR陽性而一步法陰性的情況。 2. 檢測范圍：PCR檢測可以針對特定的支原體序列設計引物，如果樣品中的支原體種類或序列與一步法試劑盒的檢測范圍不完全匹配，可能導致一步法檢測不出。 3. 樣品處理和提取：一步法恒溫檢測試劑盒可能對樣...

細胞培養中如果污染了支原體，會有以下幾種影響： 1. 細胞生長受影響：支原體污染會導致細胞生長速度減慢，甚至停止生長。細胞可能會變圓，從培養瓶壁脫落。 2. 細胞形態變化：雖然某些細胞在支原體污染后形態變化不明顯，但有些細胞會出現體積增大，細胞碎片增多，培養瓶中細胞間隙出現膜狀沉積等現象。 3. 代謝和功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝和功能，例如培養液中的精氨酸被大量消耗，引起細胞蛋白質、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙。支原體活動還可能引起培養液成分和pH值的變化。 4. 實驗結果受影響：使用被支原體污染的細胞進行實驗會嚴重影響實驗結果...

支原體去除試劑在清*支原體的過程中可能會對細胞的生長狀態產生一定的影響。支原體去除試劑是一種非抗*素類試劑，它通過與支原體膜特異性結合，改變支原體膜的通透性，從而導致支原體破裂死亡。盡管該產品在作用期間可能會對細胞的活力和形態有一定的影響，但由于它不能穿過真核細胞的細胞膜，因此不會改變細胞的任何特性。支原體被清*后，細胞在后續的傳代過程中能快速恢復其正常的生長和增殖狀態，細胞后續的生長增殖幾乎無影響。 此外，該產品不含抗*素，不會使支原體發生耐藥反應，細胞毒性小。然而，需要注意的是，不同細胞對支原體去除試劑的耐受程度有所差異，可以根據實驗結果適當調整細胞量和處理條件。在某些情況下，...

支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養基。在細胞培養中，支原體污染是常見的問題，因此需要對細胞和培養基進行檢測。細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床用細胞等都需要進行支原體檢查，這通常包括培養法和指示細胞培養法（DNA染色法）。同時，病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養法檢查支原體，必要時，也可以采用指示細胞培養法篩選培養基。 此外，支原體檢測的培養基推薦使用支原體肉湯培養基和精氨酸支原體肉湯培養基等，這些培養基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體。在進行支原體檢測時，需要取培養物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養基或瓊脂平板上。 因此，支原體檢測的樣本既可以是細胞，...

支原體去除的原理通常涉及以下幾個方面： 1. 抗*素作用：使用特定的抗*素制劑來抑制支原體的生長和繁殖。例如，含有喹諾酮類、四環素衍生物類和大環內酯類抗*素的混合制劑，這些抗*素能夠抑制支原體的DNA和蛋白合成。 2. 破壞細胞膜：支原體去除劑中的抑菌肽（AMPs）成分通過破壞支原體細胞膜的完整性，導致支原體細胞死亡。 3. 抑制DNA復制：支原體去除劑通過抑制支原體DNA回旋酶活性，有效抑制支原體DNA的復制，從遺傳物質著手徹底殺滅支原體。 4. 協同作用：某些支原體去除劑利用抑菌肽（AMPs）和穿膜肽（CPPs）的協同作用來除去支原體，穿膜肽能夠幫助抑菌...

預防細胞培養過程中的支原體污染至關重要，因為一旦發生污染，可能會嚴重影響實驗結果和細胞的生長。以下是一些有效的預防措施： 1. 無菌操作：始終在無菌條件下進行細胞培養操作，包括使用無菌的移液器、手套和其他實驗室器材。 2. 個人防護：穿戴適當的個人防護裝備，如實驗服、手套和口罩，以減少污染的風險。 3. 細胞培養室的清潔：保持實驗室和細胞培養室的清潔，定期進行消毒處理。 4. 培養箱的維護：定期清潔和消毒CO2培養箱，避免飛濺和溢出，并維持嚴格的清潔計劃。 5. 使用無支原體污染的試劑：使用經過檢測確認無支原體污染的培養基、血清和其他添加物。 ...

LAMP法，即環介導等溫擴增法（Loop-mediated isothermal amplification），在支原體檢測中的應用具有以下特點和應用場景： 1. 日常監測：由于LAMP法的快速和簡便性，它適用于生物實驗室的日常監測，可以及時檢測出支原體的存在，確保實驗結果的準確性和可靠性。 2. 疾病診斷：LAMP法已被成功應用于SARS、禽流感、HIV等疾病的檢測中，并在2009年甲型H1N1流感事件中發揮了重要作用。 3. 臨床應用：LAMP法在臨床樣本的檢測中顯示出了快速、高靈敏度和穩定性，可以用于檢測實驗室樣本及臨床樣本中的支原體。 4. 多病原體檢...

支原體預防的主要成分通常是指用于預防支原體污染的抗*素或化學試劑。在細胞培養中，預防支原體污染的措施包括在培養基中添加抗*素，以及采取其他預防措施來保持實驗室環境的清潔和無菌操作。以下是一些用于預防支原體污染的主要成分： 1. 四環素類抗*素：這類抗*素對支原體具有抑制作用，常用于治*和預防支原體感*。 2. 大環內酯類抗*素：例如羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素等，用于治*肺炎支原體感*。 3. 喹諾酮類藥物：如氧氟沙星、司帕沙星等，也用于治*肺炎支原體感*。 4. 其他抗*素：例如氨基糖苷類、氯霉素等，對支原體有較小的抑制作用。 細胞培養過程中支原體污染怎...

支原體預防的策略主要包括以下幾個方面： 1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細胞培養中的支原體污染，確保細胞培養體系內無支原體存在，從而獲得準確有效的實驗數據。 2. 改善無菌操作技術：通過提高實驗人員的操作技術和意識，避免在細胞培養過程中引入支原體污染。 3.使用無菌設備和耗材：使用無菌的細胞培養設備和耗材，如無菌培養基、血清等，減少支原體污染的風險。 4. 定期消毒和清潔：對實驗室環境進行定期的消毒和清潔，包括工作臺、培養箱等，以減少支原體的潛在污染。 5. 使用預防性試劑：使用專門針對支原體的預防性試劑，如加入細胞培養基中的預防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預防...