LAMP法，即環介導等溫擴增技術（Loop-mediated isothermal amplification），是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法。它由日本學者Notomi于2000年開發。LAMP法檢測有以下特性： 快速高效：LAMP技術可以在1小時內把幾拷貝的目的序列迅速擴增到10^9^～10^10^拷貝，擴增效率高。 簡便性：LAMP技術不需要進行模板的預變性，減少了PCR技術升降溫帶來的影響以及對昂貴、精密實驗儀器的要求，同時擴增效率高，可以在較短時間內完成檢測。 LAMP法因其快速、高效、特異、靈敏和經濟等優點，已經應用于病原菌、寄生蟲、病毒、疾病和轉基因產...

一步法快速支原體檢測的原理主要基于等溫擴增技術，這是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法。以下是具體的步驟和原理： 1. 等溫擴增技術：一步法快速支原體檢測試劑盒利用LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification，環介導等溫擴增）技術或類似的等溫擴增技術。這些技術允許在恒定溫度下進行DNA的快速擴增，通常在60-65°C之間。 2. 特異性引物：該方法使用設計好的特異性引物，這些引物靶向支原體DNA的保守區域。引物的設計確保了擴增過程的特異性，從而減少非目標序列的擴增。 3. 快速擴增：在適宜的條件下，等溫擴增技術可以在15...

支原體是細胞外生存的 小微生物，是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.2~0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲形、分枝狀等多種態。 1、支原體存在于我們周圍，他可能就如塵埃一樣存在于我們的環境中 2、可透過一般的濾膜，所以不要寄希望于過濾可以清楚支原體污染的液體 支原體對培養細胞的污染發生率高，據估計平均發生率在60%左右。同時又非常隱秘，早期不容易被發現，除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測試劑盒。支原體因為個頭小，能穿過0.22微米濾器，并且在實驗室內會潛在的擴散。支原體污染使得用被污染的細胞樣本做的實驗完全失去意義和價值。 細胞培養中支原...

細胞被支原體污染后可能會出現以下幾種情況： 1. 生長速度變慢：支原體污染的細胞生長速度可能會減慢，甚至停止生長。 2. 形態改變：部分細胞可能會變圓，從培養瓶壁脫落。有些細胞在支原體污染后，形態變化可能不明顯，但有些細胞可能會出現體積增大、細胞碎片增多等現象。 3. 培養液pH變化：支原體污染的細胞可能導致培養液pH值變化明顯，更換培養液后幾小時內變酸（顏色變黃）。 4. 細胞間隙出現膜狀沉積：在某些情況下，細胞與細胞間隙可能出現膜狀沉積，影響細胞的正常生長和傳代。 5. 細胞功能受損：支原體污染可能會影響細胞的代謝和功能，如影響細胞蛋白質、DNA、RNA的...

預防細胞培養過程中的支原體污染至關重要，因為一旦發生污染，可能會嚴重影響實驗結果和細胞的生長。以下是一些有效的預防措施： 1. 無菌操作：始終在無菌條件下進行細胞培養操作，包括使用無菌的移液器、手套和其他實驗室器材。 2. 個人防護：穿戴適當的個人防護裝備，如實驗服、手套和口罩，以減少污染的風險。 3. 細胞培養室的清潔：保持實驗室和細胞培養室的清潔，定期進行消毒處理。 4. 培養箱的維護：定期清潔和消毒CO2培養箱，避免飛濺和溢出，并維持嚴格的清潔計劃。 5. 使用無支原體污染的試劑：使用經過檢測確認無支原體污染的培養基、血清和其他添加物。 ...

細胞培養過程中如果發現支原體污染，可以采取以下一些方法嘗試去除污染： 1. 抗*素治*：使用針對支原體有效的抗*素，如四環素類、大環內酯類、氟喹諾酮類等。根據搜索結果，可以加入高濃度抗*素進行沖擊治*，例如慶大霉素 200ug/ml，四環素10ug/ml，卡那霉素50ug/ml，并維持24-48小時后再換入常規培養液。 2. 加溫處理：支原體不耐熱，可以將細胞置于41°C中處理5-10小時以殺滅支原體。但需注意，高溫也可能對細胞造成傷害，因此需要預先確定對細胞影響較小的處理時間。 3. 使用支原體清除劑：市場上有專門的支原體清除劑，按照產品說明使用。 ...

支原體去除的實驗步驟通常包括以下幾個階段： 1. 支原體檢測：在進行去除之前，首先要確認細胞培養物是否受到支原體污染。這可以通過多種方法實現，如PCR法、LAMP法或支原體培養法。 2. 選擇合適的去除試劑：一旦確認存在支原體污染，需要選擇一種有效的去除試劑。 3. 去除試劑的添加：根據去除試劑的說明書，將試劑添加到受污染的細胞培養基中。通常，這涉及到將一定比例的去除試劑加入到細胞培養液中。 4. 孵育：添加去除試劑后，將細胞培養物放回培養箱中孵育。孵育時間和條件（如溫度、CO2濃度）應根據試劑的推薦進行調整。 5. 監測去除效果：在孵育...

支原體去除和支原體預防是兩種不同的策略，它們在細胞培養和生物制品生產中都非常重要。 支原體去除是指在細胞已經被支原體污染后采取的措施。這通常涉及到使用特定的抗*素或化學試劑來消滅或抑制支原體的生長。例如，根據的描述，支原體去除試劑是一種混合抗*素制劑，它含有三種對支原體具有抑菌作用的組分，可以取得良好的支原體清*效果。使用這種方法時，細胞需要在含有去除試劑的培養基中培養一段時間，然后更換培養基并檢測支原體是否已被清*。 支原體預防則是指在細胞培養過程中采取的預防措施，以避免支原體污染的發生。這包括保持實驗室環境的清潔、使用無菌技術、對所有培養基和器材...

細胞培養中如果污染了支原體，會有以下幾種影響： 1. 細胞生長受影響：支原體污染會導致細胞生長速度減慢，甚至停止生長。細胞可能會變圓，從培養瓶壁脫落。 2. 細胞形態變化：雖然某些細胞在支原體污染后形態變化不明顯，但有些細胞會出現體積增大，細胞碎片增多，培養瓶中細胞間隙出現膜狀沉積等現象。 3. 代謝和功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝和功能，例如培養液中的精氨酸被大量消耗，引起細胞蛋白質、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙。支原體活動還可能引起培養液成分和pH值的變化。 4. 實驗結果受影響：使用被支原體污染的細胞進行實驗會嚴重影響實驗結果...

支原體的預防可通過以下方式： 1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細胞培養中的支原體污染，確保細胞培養體系內無支原體存在，從而獲得準確有效的實驗數據。 2. 改善無菌操作技術：通過提高實驗人員的操作技術和意識，避免在細胞培養過程中引入支原體污染。 3. 使用無菌設備和耗材：使用無菌的細胞培養設備和耗材，如無菌培養基、血清等，減少支原體污染的風險。 4. 定期消毒和清潔：對實驗室環境進行定期的消毒和清潔，包括工作臺、培養箱等，以減少支原體的潛在污染。 5. 使用預防性試劑：使用專門針對支原體的預防性試劑，如加入細胞培養基中的預防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預防和細胞培...

細胞庫支原體檢測的必要性主要體現在以下幾個方面： 1. 確保細胞庫的質量與安全性：細胞庫的建立需要為生物制品的生產提供檢定合格、質量相同、能持續穩定傳代的細胞。支原體檢測是確保細胞庫中細胞質量的重要環節。 2. 符合監管要求：支原體檢測是生物制品安全性監管的一部分，全球范圍內的藥典、法規和指導文件中都有支原體檢測的相關說明。 3. 避免對生物制品的影響：支原體污染可能會影響生物制品的安全性和有效性，因此需要通過檢測來避免這種風險。 4. 維護細胞培養的穩定性：支原體是真核細胞和干細胞培養中最常見的問題之一，它們可以改變細胞的代謝、減緩增殖速度，甚至引起染色體畸變。 ...

支原體污染后的細胞是否應該直接丟棄還是嘗試重新培養，這取決于多種因素，包括細胞的重要性、污染的程度、以及是否有有效的方法來清*支原體。以下是一些處理支原體污染的常見方法： 1. 直接丟棄：對于非重要的細胞，如果培養中的細胞、WCB的細胞等，可以采取直接將培養物與用過的培養基滅活后丟棄的方式。 2. 使用支原體清除劑：支原體清除劑處理細胞，作用濃度為25μg/ml，兩周可以清*支原體。 3. 使用支原體清*培養基：每2~3天更換一次新鮮培養液，并用無菌的PBS洗滌細胞，處理15天后進行支原體檢測，以確定支原體是否被完全去除。 4. 支原體去除試劑：這是一種混合...

細胞培養中支原體檢測出現假陰性結果可能由以下原因引起： 1. 樣本質量問題：如果采集的樣本中含有抑制劑或者樣本在處理、存儲過程中出現問題，可能會影響PCR反應，導致假陰性。 2. 技術或操作問題：實驗操作中的誤差，如樣本處理不當、試劑配制錯誤、儀器設備問題等，都可能導致假陰性結果。 3. 檢測方法的局限性：某些檢測方法可能存在靈敏度或特異性不足的問題，導致無法準確檢測到病原體。 4. 培養基和培養條件的影響：培養法的靈敏度容易受到培養基和培養條件的影響，如果培養條件不適宜，可能導致支原體無法生長或生長緩慢，從而檢測不到。 5. 支原體種類問題：不是所有的支原體...

支原體檢測中的PCR法和LAMP方法各有其優勢和劣勢，以下是兩種方法的比較： PCR法 優勢: 1.高靈敏度：PCR法可以擴增支原體DNA，具有很高的靈敏度。 2.操作簡便：PCR操作相對簡單，結果準確，速度快，通常3個小時左右即可得到結果。 3.可靠性：PCR法已成為日常細胞培養維護的可靠方法，是細胞樣本庫保護細胞的方法。 劣勢: 1. 樣品量需求：相對于某些快速檢測方法，PCR可能需要較多的樣品量。 2. 檢測周期：盡管PCR法相對快速，但在某些情況下，檢測周期可能較長。 LAMP法 優勢: 1. 設備簡單：只...

支原體預防的策略主要包括以下幾個方面： 1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細胞培養中的支原體污染，確保細胞培養體系內無支原體存在，從而獲得準確有效的實驗數據。 2. 改善無菌操作技術：通過提高實驗人員的操作技術和意識，避免在細胞培養過程中引入支原體污染。 3.使用無菌設備和耗材：使用無菌的細胞培養設備和耗材，如無菌培養基、血清等，減少支原體污染的風險。 4. 定期消毒和清潔：對實驗室環境進行定期的消毒和清潔，包括工作臺、培養箱等，以減少支原體的潛在污染。 5. 使用預防性試劑：使用專門針對支原體的預防性試劑，如加入細胞培養基中的預防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預防...

支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養基。在細胞培養中，支原體污染是常見的問題，因此需要對細胞和培養基進行檢測。細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床用細胞等都需要進行支原體檢查，這通常包括培養法和指示細胞培養法（DNA染色法）。同時，病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養法檢查支原體，必要時，也可以采用指示細胞培養法篩選培養基。 此外，支原體檢測的培養基推薦使用支原體肉湯培養基和精氨酸支原體肉湯培養基等，這些培養基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體。在進行支原體檢測時，需要取培養物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養基或瓊脂平板上。 因此，支原體檢測的樣本既可以是細胞，...

細胞培養中支原體污染的檢測方法有多種，以下是一些常用的檢測手段： 1. 顯微鏡檢測：通過相差顯微鏡觀察細胞，支原體在細胞表面和細胞之間會呈現為暗色微小顆粒。 2. 熒光染色法：使用熒光染料Hoechst 33258與DNA特異性結合，使支原體的DNA著色，然后在熒光顯微鏡下觀察。染色后的支原體會在細胞周圍或附于細胞膜表面顯示為亮綠色小點。 3. 電鏡檢查：使用掃描電鏡或透射電鏡觀察，這是一種簡便快速的方法。 4. 聚合酶鏈反應（PCR）：使用特定的引物對支原體DNA進行擴增，是一種高靈敏度的檢測方法。 5. 等溫擴增法：基于LAMP技術，室溫反應后觀...

支原體檢測實驗方法需要考慮以下幾個關鍵點： 1. 樣本的采集與處理：確保樣本的采集和處理過程符合無菌操作規范，避免交叉污染。 2. 實驗操作的標準化：制定詳細的實驗操作流程，包括樣本接種、培養條件、觀察時間點等，以保證實驗的可重復性和準確性。 3. 使用適當的培養基：根據支原體的特性選擇合適的培養基，如支原體肉湯4. 培養基、精氨酸支原體肉湯培養基等，并確保培養基的靈敏度和特異性。 5. 設置對照組：實驗中應包括陽性對照和陰性對照，以驗證實驗方法的有效性和排除假陽性或假陰性結果。 如何檢測新鮮的培養基是否有支原體污染？南京細胞支原體預防試劑現貨 對于同一個樣品，如...

支原體污染的來源主要包括以下幾個方面： 1. 實驗室環境中可能存在支原體污染源，如空氣中的塵埃、其他培養物中的支原體污染等。 2. 實驗操作人員的手部、衣物或皮膚表面可能攜帶支原體，造成細胞培養的污染。 3. 培養基、血清等培養材料如果受到支原體污染，也會導致細胞培養物受到污染。 4. 細胞交叉污染，即使用已受污染的細胞株進行培養時，可能會污染其他細胞。 5. 實驗器材帶來的污染，如未徹底消毒滅菌的實驗器材。 6. 人體是某些支原體的正常菌群，因此操作人員的疏失也可能成為污染源。 7. 細胞庫管理不善，造成實驗室間的相互污染。 8. 細胞培養...

細胞培養中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點： 1. 無細胞壁結構：支原體是沒有細胞壁的微生物，這使得許多作用于細胞壁的抗*素對支原體無效。 2. 微小體積：支原體體積小，能夠穿過常規的除菌濾膜，例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。 3. 隱匿性：支原體污染初期很難被察覺，它們在普通光學顯微鏡下幾乎不可見，因此細胞被支原體污染后，前期很難被發現。 4. 傳播途徑多樣：支原體可以通過細胞培養物、細胞懸液、細胞培養用具等途徑迅速傳播。 5. 污染源 ：支原體污染源包括細胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚，以及細胞培養用的組分如血清、培養液等。...

細胞培養中建議使用支原體檢測的原因主要有以下幾點： 1. 支原體污染率高：常規細胞培養中支原體污染率保守估計在15-35%之間。 2. 影響實驗結果：支原體污染會嚴重干擾實驗結果的可信度，影響培養細胞的形態和生理特征。 3. 難以用光學顯微鏡檢測：支原體是極小的細菌，其細胞膜周圍沒有細胞壁，無法用光學顯微鏡檢測到。 4. 難以消滅：支原體能夠迅速滲透整個實驗室，一旦污染很難徹底消滅。 5. 影響產品質量：支原體污染會影響細胞培養產物的質量，監管機構推薦檢測所有細胞培養產物中是否存在支原體。 6. 保證實驗準確性：定期進行支原體檢測和去除，確保無支原體存在...

支原體去除試劑在清*支原體的過程中可能會對細胞的生長狀態產生一定的影響。支原體去除試劑是一種非抗*素類試劑，它通過與支原體膜特異性結合，改變支原體膜的通透性，從而導致支原體破裂死亡。盡管該產品在作用期間可能會對細胞的活力和形態有一定的影響，但由于它不能穿過真核細胞的細胞膜，因此不會改變細胞的任何特性。支原體被清*后，細胞在后續的傳代過程中能快速恢復其正常的生長和增殖狀態，細胞后續的生長增殖幾乎無影響。 此外，該產品不含抗*素，不會使支原體發生耐藥反應，細胞毒性小。然而，需要注意的是，不同細胞對支原體去除試劑的耐受程度有所差異，可以根據實驗結果適當調整細胞量和處理條件。在某些情況下，...

需要定期檢測支原體污染的客戶主要包括以下幾類： 1. 生物醫藥企業：生產涉及細胞培養的生物制品的公司，包括疫苗、生物藥物、基因產品等。 2. 細胞公司：進行細胞產品的研發和生產的企業，需要確保所用細胞的安全性和有效性。 3. 科研機構：從事細胞生物學、分子生物學、遺傳學等研究的學術機構，需要保證實驗結果的準確性。 4. 臨床單位：使用細胞技術進行的醫院或診所，需要確保用細胞的質量。 5. 細胞庫：保存和供應細胞株的細胞庫，需要對細胞資源進行定期檢測以保證其無污染。 6. 生物技術公司：提供生物技術服務的公司，如細胞培養、基因編輯等，需要確保服...

LAMP法，即環介導等溫擴增技術（Loop-mediated isothermal amplification），是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法。它由日本學者Notomi于2000年開發。LAMP法檢測有以下特性： 快速高效：LAMP技術可以在1小時內把幾拷貝的目的序列迅速擴增到10^9^～10^10^拷貝，擴增效率高。 簡便性：LAMP技術不需要進行模板的預變性，減少了PCR技術升降溫帶來的影響以及對昂貴、精密實驗儀器的要求，同時擴增效率高，可以在較短時間內完成檢測。 LAMP法因其快速、高效、特異、靈敏和經濟等優點，已經應用于病原菌、寄生蟲、病毒、疾病和轉基因產...

檢測新鮮培養基是否有支原體污染，可以采用以下五種方案： 1. 培養法：這是一種傳統且可靠的方法，通過將培養基接種到適宜支原體生長的微生物培養基或瓊脂平板上，觀察是否有支原體生長。這種方法較為耗時，但成本較低。 2. 熒光染色法：使用特定的熒光染料（如Hoechst 33258）對細胞進行染色，然后在熒光顯微鏡下觀察。如果存在支原體污染，可以看到細胞表面或細胞間隙中支原體DNA的熒光染色。 3. PCR法：通過設計針對支原體特定序列的引物，利用PCR技術特異性擴增目標DNA。PCR產物通過瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，如果出現條帶則表明存在支原體污染。 4. 電鏡觀察法：使...

細胞培養中支原體污染會對實驗結果產生多方面的影響，具體包括： 1. 細胞生長受影響：支原體污染可能導致細胞生長速度減慢，甚至停滯。 2. 細胞形態改變：支原體感*的細胞可能會出現形態的改變，如細胞體積增大、形態不規則等。 3. 細胞功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝、增殖、分化等生理功能。 4. 細胞產物改變：支原體感*可能影響細胞產生的蛋白質、細胞因子等生物活性物質的表達和分泌。 5. 實驗結果不準確：支原體污染會干擾實驗結果的準確性，導致實驗數據不可靠。 6. 實驗重復性差：支原體污染的細胞培養批次間差異大，影響實驗的重復性。 ...

qPCR法，即定量聚合酶鏈式反應（Quantitative Polymerase Chain Reaction）法，是一種高度靈敏和特異的分子生物學技術，用于檢測和定量DNA序列。在支原體檢測中，qPCR法的原理主要包括以下幾個步驟： 1. DNA提取：首先從待測樣本中提取DNA，這可能包括細胞培養上清液或組織樣本中的支原體DNA。 2. 設計特異性引物：針對支原體的保守DNA序列，如16S rRNA基因，設計特異性的DNA引物。 3. 熒光標記探針：使用熒光標記的探針，該探針與目標DNA序列互補，能夠在PCR擴增過程中與擴增的DNA結合。 4. Ct值確定：Ct值...

支原體預防的策略主要包括以下幾個方面： 1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細胞培養中的支原體污染，確保細胞培養體系內無支原體存在，從而獲得準確有效的實驗數據。 2. 改善無菌操作技術：通過提高實驗人員的操作技術和意識，避免在細胞培養過程中引入支原體污染。 3.使用無菌設備和耗材：使用無菌的細胞培養設備和耗材，如無菌培養基、血清等，減少支原體污染的風險。 4. 定期消毒和清潔：對實驗室環境進行定期的消毒和清潔，包括工作臺、培養箱等，以減少支原體的潛在污染。 5. 使用預防性試劑：使用專門針對支原體的預防性試劑，如加入細胞培養基中的預防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預防...

方法 靈敏度 優勢 劣勢 培養法 ☆☆☆ ü 便捷 ü 便宜 ü 金標準 ü 費勞力 ü 耗時長 ...

支原體污染的來源主要包括以下幾個方面： 1. 實驗室環境中可能存在支原體污染源，如空氣中的塵埃、其他培養物中的支原體污染等。 2. 實驗操作人員的手部、衣物或皮膚表面可能攜帶支原體，造成細胞培養的污染。 3. 培養基、血清等培養材料如果受到支原體污染，也會導致細胞培養物受到污染。 4. 細胞交叉污染，即使用已受污染的細胞株進行培養時，可能會污染其他細胞。 5. 實驗器材帶來的污染，如未徹底消毒滅菌的實驗器材。 6. 人體是某些支原體的正常菌群，因此操作人員的疏失也可能成為污染源。 7. 細胞庫管理不善，造成實驗室間的相互污染。 8. 細胞培養...