為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質，但使用熒光染料具有其獨特的優勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動態范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進行熒光測量時不會遇到這個問題，因為只有少數材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強大的協議，并且可以自動化用于高通量應用。CY5熒光染料是一種被廣泛應用于生物分子檢測和熒光成像等領域的高效、穩定的熒...

過標記——計算結果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標記的熒光團大于10mol。雖然過標記的蛋白也可以使用，但可能會引起蛋白的聚集、降低抗體結合抗原的特異性，這些都會造成非特異性結合。過標記還會引起熒光淬滅?？梢栽黾拥鞍谆驕p少反應時間。3．未結合染料難以去除——盡管大部分時候用分離柱可以較好的純化蛋白偶聯物，但仍可能會有痕量的游離染料留在偶聯物溶液中，會使標記計算的值偏高。可用分離柱再次分離或透析去除。4．蛋白或蛋白偶聯物無法洗脫——不要再加緩沖液，只需再次離心一次或幾次。DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細胞膜染料，它們是一族親脂性的熒光染料，用于細胞的形態學和結構研究。免疫組化熒...

二、***成像分析：D-熒光素，鉀鹽，D-PBS,不含鈣、鎂1、配制溶液使用無菌D-PBS（w/oCa2+;Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液（15mg/ml），0.22μm濾膜過濾除菌（避光），分裝后于-20℃或-80℃冷凍保存，避免反復凍融。使用時4℃融化，實驗前平衡至室溫（避光）2、注射量取決于注射方式，具體如下：注射方式劑量靜脈注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應體積的15mg/ml熒光素工作液腹腔注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應體積的15mg/ml熒光素工作液肌肉注射（27gauge針頭）50μl，濃度為1-2mg/ml熒光素...

熒光染料:能發出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后，能把短波長的光轉變為波長較長的可見光波而反射出來，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環或雜環并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復合熒光染料使用。其中復合熒光染料是利用熒光共振能量轉移技術合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復合染料在受體分子的激發波長被激發，在供體分子的發射波長發射一個光子。熒光染料發展非常迅速，已開發的用于科研和臨床應用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。生物發光是利用熒光素酶報告...

注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定比較高信號檢測時間和信號平臺期。保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲存液過濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復凍融。如果有條件，對儲存液充氮氣或氬氣（防止氧化），穩定性和保存時間更長。 注射方式，動物類型以及體重等都會影響信號的發射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線，確定比較好信號平臺期和比較好的檢測時間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應用上沒有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發表的文獻來看，鉀鹽的使用率遠高于鈉鹽，尤其是體內實驗。兩者功效相同。 為了您的安全和健康，請穿實驗...

3.粘壁細胞的染色（1）使粘壁的細胞在無菌實驗室培養。（2）從培養基中移走蓋玻片，吸走過量培養液，將蓋玻片放在潮濕的環境中。（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。（4）在37℃培養細胞2～20分鐘，不同的細胞比較好培養時間不同。（5）吸干染料工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，培養5～10分鐘，然后吸干培養基。 4.顯微鏡檢測（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；b)DiI和D...

羅丹明123一種可對活細胞線粒體染色的細胞染色試劑。羅丹明123可透過細胞膜且在活細胞的線粒體內聚集，并發出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測線粒體膜電位，也常用于細胞凋亡檢測。由于細胞內ATP的量與羅丹明123的熒光強度之間有相關性，此熒光染料被應用于檢測細胞內的ATP。羅丹明123的比較大激發波長為507nm，比較大發射波長為525nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現黃綠色熒光。 一：工作液配制用緩沖液或者預熱的培養液直接稀釋儲存液到需要的工作液濃度（1～20μM），充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據自身實驗體系進行調整?！咀⒁狻浚簩τ诩毎麑嶒?，要控制好總體稀釋倍數，DMSO在...

CY7是一種CY染料。CY為花菁(Cyanine)的縮寫，是由奇數個甲基單元連接的兩個氮原子組成的化合物。菁類化合物具有波長長、吸收和發射可調、消光系數高的特點CY系染料常被用于蛋白、抗體以及小分子化合物的標記，對于蛋白抗體的標記，可以通過簡單的混合反應來完成結合，下面我們介紹了蛋白抗體標記的標記方法，具有一定的參考意義。一、比較好蛋白制備1)為獲得標記效果，請制備蛋白(抗體)濃度為2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值為8.5±0.5。如果pH值低于8.0，應使用1M3)如果蛋白濃度低于2mg/mL，標記效率會**降低。為獲得比較好標記效率，建議**終蛋白濃度范圍為2-10mg/mL。4)蛋白必...

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標記細胞膜和疏水性組織。這是一類環境敏感型熒光染料，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質，雖然在水中其熒光強度很弱)結合時，其熒光強度***增強。它們具有很高的淬滅系數，偏光依賴性和很短的激發壽命。一旦應用于細胞中，這種染料會在細胞內質膜中逐步擴散，導致在其比較好濃度條件下，將整個細胞染色。它們不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具。DiO和DiI可以分別與標準的FITC和TRITC濾光器一同使用...

Cy3 (Cyanine 3) 是一種發橘黃色熒光的花青素熒光染料。Cy3染料的激發峰和發射峰分別在550 nm和570 nm左右，它的熒光肉眼觀察很明亮，并且對pH不敏感，在共聚焦顯微鏡中可以用532nm（肩峰）或者556nm（頂峰）的激光束激發，在普通熒光顯微鏡中可以用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的濾片觀察，所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用。Cy3也是Dil等細胞電位追蹤劑的母核，所以它是在生物技術中非常有用的熒光染料。在熒光成像時，Cy3的背景熒光一般認為比TAMRA等TRITC系列的染料低。 Cy3可以用來標記蛋白，抗體，多肽等，它常見的使用是標記核酸...

熒光染料:能發出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后，能把短波長的光轉變為波長較長的可見光波而反射出來，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環或雜環并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復合熒光染料使用。其中復合熒光染料是利用熒光共振能量轉移技術合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復合染料在受體分子的激發波長被激發，在供體分子的發射波長發射一個光子。熒光染料發展非常迅速，已開發的用于科研和臨床應用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。5(6)-FITC (Fl...

一、體外生物發光試驗熒光素試劑的制備：D-熒光素，鉀鹽，無菌純水，完全培養基（自行配置）1、用無菌水制備100X熒光素原液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2、將D-luciferin，potassiumsalt溶解于預熱好的組織培養基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養基1∶100稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養細胞的培養基圖像分析前，向細胞培養板中添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌，0.2μm注：成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。熒光染料可以單獨使用，也可以組...

如何選擇的染料？ 考慮到熒光染料種類繁多，您如何為您的特定應用選擇使用哪種染料？以下是您需要考慮的一些因素?！c實驗設計的兼容性：雖然它們可能與其他熒光團共享一些光譜相似性，但每種染料都是***的，并且具有不同的功能、激發和發射波長、波段形狀和寬度以及光穩定性。為確保成功，請選擇與您的實驗設計相輔相成的一種。與設備的兼容性：選擇與您正在使用的照明源相匹配的染料。在選擇合適的熒光儀器時，請考慮儀器的靈敏度、動態范圍、穩定性和通量、信噪比和信空白比。為了獲得更好的結果，請確保染料的發射曲線與可用的檢測方法相匹配。與樣品中其他熒光材料的相容性：在雙重或三重標記實驗中，您選擇的染料的發射和激...

FITC熒光標記蛋白的應用及特點:活性熒光染料，如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、羅丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料，可用于標記抗體或蛋白質功能基團，生成分子探針，并通過熒光成像進行檢測。當用熒光染料化學標記特異性抗體或其他純化生物分子時，它們成為用于檢測靶抗原或相互作用配偶體的熒光探針，用于細胞成像、流式細胞手術、蛋白質痕跡和酶聯免疫吸附實驗(ELISA)。由于熒光標記物具有無放射物污染、操作簡單等優點，在蛋白質功能研究、藥物篩選等許多研究領域得到了越來越廣泛的應用。 南京星葉生物科技有限公司Super Fluor 系列（效果同Alexa Fl...

熒光標記技術是指運用熒光染料與待研究對象結合，利用它的熒光特性，提供待研究對象相關信息。熒光標記具有操作簡便、高穩定性、高靈敏度等優勢，使熒光染料在生命科學研究中應用，包括：標記活細胞或固定細胞中的蛋白質、多肽；作為功能性指示劑表征細胞健康狀況；設計各種熒光探針，尋找特定蛋白或藥物靶點。應用分類：多肽、蛋白、抗體標記：氨基標記、巰基標記、羧基標記；***成像：水溶性/脂溶性熒光染料、近紅外I區/II區熒光染料南京星葉生物科技有限公司提供不同用途的熒光染料，了解更多（包括但不限于） 5(6)-FITC (Fluorescein 5(6)-isothiocyanate) 是一種胺活性衍...

三、細胞實驗D-熒光素鉀鹽體外生物發光試驗：D-熒光素鉀鹽，無菌純水，完全培養基（自行配制）1、貼壁細胞：將細胞接種于培養板中孵育數小時或過夜，使細胞貼壁。懸浮細胞：可以將細胞接種于培養板后直接進行后續操作，無需孵育。如果倍增時間相對較短，則應考慮倍增時間進行細胞計數。2、將15mg熒光素鉀鹽溶解于1ml無菌水中，制備成100X熒光素儲備液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素鉀鹽完全溶解?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。3、用預熱好的細胞培養基1∶100稀釋100X熒光素儲備液（15mg/ml），配制成熒光素工作液（終濃度150μg/ml），即配即用。4、去除培養板中的培養基。5、在成...

羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比，羅丹明具有出色的光穩定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯物的檢測、活細胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作：分子開關，病毒表面修飾，化學傳感器，硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基（R1、R2、R3、R4和G）來區分。由于它們的差異，這些熒光染料在溶液中也表現出不同的光物理特性（例如不同的熒光壽命和發射比較大值）。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現出高量子產率，而在每個氮處具有兩個烷基取代基的那些表現出活化的內...

為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質，但使用熒光染料具有其獨特的優勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動態范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進行熒光測量時不會遇到這個問題，因為只有少數材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強大的協議，并且可以自動化用于高通量應用。Super Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）琥珀酰...

SUPERGreenI（10,000×DMSO溶液，電泳級）儲存條件及注意事項4℃避光可保存12個月。本品用DMSO溶解，因DMSO的熔點是18.5℃，使用前請放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點●無毒性：屬花菁類染料，容易生物降解，無致*毒性?！耢`敏度高：至少可檢出20pgDNA，高于EB染色法25～100倍?！裥旁氡雀撸簶悠窡晒庑盘枏?，背景信號低。●操作簡單：無須脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察?！襁m用范圍廣：可適用于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場凝膠電泳和毛細管電泳等?！袷褂梅奖悖簩Ψ肿由飳W中常用的酶（如：Taq酶、反...

常用抗體標記熒光染料的特性及其應用 1、FITC:激發波長488nm，比較大發射波長525nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細胞儀;2)在流式細胞儀的FL1通道檢測;3)可用于熒光顯微鏡技術4)熒光強度易受PH值影響，PH值降低時其熒光強度減弱。2、AlexaFluor488:激發波長488nm，比較大發射波長519nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細胞儀:2)在流式細胞儀的FL1通道檢測;3)具有超乎尋常的光穩定性，非常適用于熒光顯微鏡技術;4)在較寬的PH值范圍內保持穩定(PH4~10)。5)南京星葉生物科技有限公司Su...

羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比，羅丹明具有出色的光穩定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯物的檢測、活細胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作：分子開關，病毒表面修飾，化學傳感器，硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基（R1、R2、R3、R4和G）來區分。由于它們的差異，這些熒光染料在溶液中也表現出不同的光物理特性（例如不同的熒光壽命和發射比較大值）。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現出高量子產率，而在每個氮處具有兩個烷基取代基的那些表現出活化的內...

SuperFluor活化酯（與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同）SuperFlour系列熒光探針，具有更強的熒光強度，更廣的pH應用范圍（pH4～10）,更好的抗淬滅性。在生物熒光領域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等熒光染料。1．標記效率低——計算結果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標記的熒光團少于4mol有以下原因：1）緩沖液中含有痕量伯銨成分，與染料反應降低了標記效率。如果蛋白已經溶于含氨基的緩沖液（如Tris或氨基乙酸），標記前用PBS透析。2）蛋白含量較低(≤1mg/mL)會影響標記效率。3）標記步驟中加入碳酸氫鈉的作用是將反應混合物的...

在1990年代***使用的綠色熒光蛋白（從水母維多利亞水母克?。┘捌溲苌铮ɡ缭寮t藍蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等）是當今生物學研究中**常用的一些生物熒光團。雖然熒光團可用于在細胞、細菌和各種***中表達質粒，但它們的使用有一些缺點，即它可能很耗時，并且在融合時還能夠改變某些細胞蛋白的正常生物學功能。此外，與許多其他熒光團相比，生物熒光團的光穩定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當下流行的生物熒光團之一，由238個氨基酸組成，其中三個負責發出可見綠色熒光的結構。在水母本身中，熒光團與水母發光蛋白（一種蛋白質）相互作用，當添加鈣時會發出藍光。通過DNA重組，研究人員可以使用負責...

在1990年代***使用的綠色熒光蛋白（從水母維多利亞水母克?。┘捌溲苌铮ɡ缭寮t藍蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等）是當今生物學研究中**常用的一些生物熒光團。雖然熒光團可用于在細胞、細菌和各種***中表達質粒，但它們的使用有一些缺點，即它可能很耗時，并且在融合時還能夠改變某些細胞蛋白的正常生物學功能。此外，與許多其他熒光團相比，生物熒光團的光穩定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當下流行的生物熒光團之一，由238個氨基酸組成，其中三個負責發出可見綠色熒光的結構。在水母本身中，熒光團與水母發光蛋白（一種蛋白質）相互作用，當添加鈣時會發出藍光。通過DNA重組，研究人員可以使用負責...

在1990年代***使用的綠色熒光蛋白（從水母維多利亞水母克?。┘捌溲苌铮ɡ缭寮t藍蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等）是當今生物學研究中**常用的一些生物熒光團。雖然熒光團可用于在細胞、細菌和各種***中表達質粒，但它們的使用有一些缺點，即它可能很耗時，并且在融合時還能夠改變某些細胞蛋白的正常生物學功能。此外，與許多其他熒光團相比，生物熒光團的光穩定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當下流行的生物熒光團之一，由238個氨基酸組成，其中三個負責發出可見綠色熒光的結構。在水母本身中，熒光團與水母發光蛋白（一種蛋白質）相互作用，當添加鈣時會發出藍光。通過DNA重組，研究人員可以使用負責...

所需的CY3-NHS酯的量取決于待標記蛋白的量，以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例：假設所需的標記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000)，用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯，得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL，詳細計算過程如下：1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150，000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3...

三：貼壁細胞染色1、將貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上。2、從培養基中移走蓋玻片，吸走過量培養液，但要使表面保持濕潤。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。4、37℃孵育細胞2~20min，不同的細胞比較好培養時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優化體系以得到均一的標記效果。5、吸干染料工作液，用培養液洗蓋玻片2~3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5~10min，然后吸干培養基。但要使表面保持濕潤。四：結果檢測樣品可在培養基中進行檢測，可通過熒光顯微鏡成像或流式細胞儀分析。非磺化花青類染料- 該組中的一些染料包括 cy3、cy3.3、cy5、...

PI是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測，常用于流式細胞儀分析。盡管PI不能通過活細胞膜，但卻能穿過破損的細胞膜而對核染色。PI經常被用來與Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用，能同時對活細胞和死細胞染色。PI-DNA復合物的激發和發射波長分別為535nm和615nm。2.染色過程（1）將1/10培養基體積的PI染色液加入到細胞培養基中（也可以用1/10濃度的PI緩沖液代替培養基）。（2）在37℃培養細胞10～20分鐘。（3）用PBS或合適的...

FITC熒光標記蛋白的應用及特點:活性熒光染料，如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、羅丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料，可用于標記抗體或蛋白質功能基團，生成分子探針，并通過熒光成像進行檢測。當用熒光染料化學標記特異性抗體或其他純化生物分子時，它們成為用于檢測靶抗原或相互作用配偶體的熒光探針，用于細胞成像、流式細胞手術、蛋白質痕跡和酶聯免疫吸附實驗(ELISA)。由于熒光標記物具有無放射物污染、操作簡單等優點，在蛋白質功能研究、藥物篩選等許多研究領域得到了越來越廣泛的應用。 南京星葉生物科技有限公司Super Fluor 系列（效果同Alexa Fl...

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度**增強，這類染料有著很高的淬滅常數和激發態壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，比較好濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發，有著比DiI更長的激發波長和發射波長，在細胞和組織染色中更有價值。 D...