質子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉移的物理測量來評估,也可以通過化學測量來評估,在化學測量中,表達的蛋白質與另一種蛋白質之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當的報告系統來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發光共振能量轉移(BRET)...
Severinoetal.進行的研究也指出了陽離子脂質作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實現了人動力蛋白的表達,但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細胞毒性,并導致活細胞數量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復合物和由魚精蛋白、DNA和脂質層組成的納米顆...
RNA和信使RNA與DNA轉染類似,RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。與涉及DNA的轉染相比,RNA轉染可能產生更高的轉染效率,因為后者不需要穿越核膜。在不需要基因組整合、轉錄和轉錄后處理的情況下,RNA轉染也可能加速所需蛋白質的產生。使...
小RNA和質粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。這可以通過引入含有熒光素酶報告基因的質粒來實現,其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識別,然后允許小RNA結合以抑制熒光素酶的表達。另一方面,在RNA干擾(RNAi)研究中,小RNA和質粒DNA的...
納米顆粒的尺寸很小,但它們比其他顆粒具有更大的粘附表面,同時具有高穩定性。正因為如此,它們能夠成功地穿過細胞膜,進入細胞,并與自然發生的細胞內途徑結合,具有將特定顆粒帶到預定目標位置的***準確性。由于納米顆粒在細胞內運輸和保護化合物方面具有巨大的潛力,可以避...
如何選擇的染料? 考慮到熒光染料種類繁多,您如何為您的特定應用選擇使用哪種染料?以下是您需要考慮的一些因素。※與實驗設計的兼容性:雖然它們可能與其他熒光團共享一些光譜相似性,但每種染料都是***的,并且具有不同的功能、激發和發射波長、波段形狀和寬度以...
影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。例如,電穿孔技術依賴于電場來增加宿主細胞膜的通透性,以內化外來核酸。因此,電穿孔過程中的電壓和持續時間是決定電穿孔成功與否的重要因素。施加高壓的長時間電穿孔可能會導致細胞損傷并降低轉染效率。...
與花青和羅丹明染料一樣,熒光素也是一種有機染料。熒光素的比較大吸收波長為494nm,比較大發射波長為521nm(通常吸收藍色范圍內的光并發射綠色范圍內的光),熒光素是一種高熒光物質。即使在非常少量的情況下也可以檢測到它,并且在與抗體結合時用于顯微鏡檢查。熒光素...
熒光染料標記蛋白或肽技術是一種常見的蛋白質體外標記技術。除了GFP等熒光蛋白的融合表達外,目標蛋白還可以通過熒光染料標記直接進行下游實驗操作,如***跟蹤、細胞分選等。 FITC熒光標記的原理是什么? 熒光標記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材...
化學轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。基于脂質體的轉染試劑是一種化學物質,它能夠形成帶正電的脂質聚集體,這些聚集體可以與宿主細胞的磷脂雙分子層順利融合,從而允許外來遺傳物質以**小的阻力進入。另一方面,非脂質體轉染試劑可進一步分為幾類,包括磷酸鈣、樹狀大分子...
在移植模型中,將抗icam -1抗體包被的微泡給予異位心臟移植大鼠,成功地在心臟環境中使用了icam -1靶向微泡。排斥心臟的靶向微泡對比強度幾乎比非排斥對照高一個數量級。與移植排斥成像相比,一項更為***的臨床任務是確定在到達急診室時經歷暫時胸痛的患者是否發...
熒光染料標記蛋白或肽技術是一種常見的蛋白質體外標記技術。除了GFP等熒光蛋白的融合表達外,目標蛋白還可以通過熒光染料標記直接進行下游實驗操作,如***跟蹤、細胞分選等。 FITC熒光標記的原理是什么? 熒光標記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材...
“主動靶向”一詞指的是用特定生物標志物標記的超聲微泡,允許它們被驅動到特定的目標。由于抗體-抗原或配體-受體相互作用的特異性,這種策略可以提高MNB遞送的效率。可以使用各種配體來提高載藥超聲微泡對***斑塊的靶向效率和特異性結合,如碳水化合物、蛋白質、核酸和多...
由于CRISPR/Cas的發現,基因組編輯領域經歷了一場**。細菌免疫系統的CRIPSR/Cas成分導致全基因組雙鏈DNA斷裂,并通過內部DNA修復過程促進基因編輯。有研究指出,陽離子聚合物聚乙二胺-環糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質粒的有效遞送...
熒光染料標記蛋白或肽技術是一種常見的蛋白質體外標記技術。除了GFP等熒光蛋白的融合表達外,目標蛋白還可以通過熒光染料標記直接進行下游實驗操作,如***跟蹤、細胞分選等。 FITC熒光標記的原理是什么? 熒光標記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材...
人類原代干細胞是另一種公認的難以轉染的細胞類型,轉染這種細胞類型的比較大挑戰仍然是效率低和細胞活力低。2015年,王等報道了Lipofectamine 2000和XtremeGENE HP等轉染試劑在人牙周韌帶干細胞中的轉染效率非常低(<6%),而陽性對照慢病...
轉染時通常推薦使用血清減少或無血清培養基,包括陽離子轉染試劑,如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。這種轉染活動需要形成陽離子脂質體-DNA復合物,這需要帶正電的脂質體分子和帶負電的核酸之間的相互作用。因此,血清中負電...
轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。在過去的30年里,轉染因其廣泛應用于研究疾病的細胞過程和分子機制而越來越受歡迎。了解疾病的分子途徑,可以發現可能用于疾病診斷和預后的特定生物標志物。此外,轉染可以作為基因***中的策略之一,用于*...
Severinoetal.進行的研究也指出了陽離子脂質作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實現了人動力蛋白的表達,但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細胞毒性,并導致活細胞數量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復合物和由魚精蛋白、DNA和脂質層組成的納米顆...
脂質體靶向遞送中**核靶向功能已知**具有核靶向功能。為了增強質粒DNA的核轉運,**與PAMAM樹狀大分子偶聯,與DOPE(1:1)混合形成脂質體。與聚亞胺相比,PAMAM-**/DOPE陽離子脂質體增強了HEK293細胞中質粒DNA的表達,并顯示出較低的細...
納米顆粒,由于其在DNA轉運到細胞中的保護能力,在不久的將來可以用作轉基因的非病毒載體。通過將納米粒子與許多不同的配體和化合物連接來修飾納米粒子,有助于改善它們在細胞內的運輸。將納米顆粒靶向到細胞內的特定位置,配子和胚胎,可以通過磁轉染來實現。盡管與市售的用于...
由于CRISPR/Cas的發現,基因組編輯領域經歷了一場**。細菌免疫系統的CRIPSR/Cas成分導致全基因組雙鏈DNA斷裂,并通過內部DNA修復過程促進基因編輯。有研究指出,陽離子聚合物聚乙二胺-環糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質粒的有效遞送...
脂質體成功降低了綠色熒光蛋白(GFP)的表達,并在H4II-E和HepG2細胞中顯示出較低的細胞毒性。在其他研究中,精氨酸衍生物N,N-distearyl-N-methyl-N-2-(N’-arginyl)aminoethylammoniumchloride被...
遞送***水平的藥物或***性基因遞送尚未證明靜脈注射與臨床相關濃度的微泡。大鼠心臟基因轉染使用1毫升靜脈注射超聲造影劑,濃度約為1×109微泡/ml。將***性基因有效遞送到大鼠胰腺的方法是,在外殼內注射1毫升含有該基因的微泡,注射濃度為5×10...
影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。例如,電穿孔技術依賴于電場來增加宿主細胞膜的通透性,以內化外來核酸。因此,電穿孔過程中的電壓和持續時間是決定電穿孔成功與否的重要因素。施加高壓的長時間電穿孔可能會導致細胞損傷并降低轉染效率。...
納米微泡比超聲微泡具有更好的被動瞄準能力,因為納米微泡的尺寸小于1μm;因此,它們可以通過EPR效應滲透到血管壁并積聚在斑塊內。超聲微泡中使用的原料或外殼配方會影響表面電荷性質,同時顆粒大小決定了超聲微泡在體內的分布。超聲微泡的分布特性影響成像診斷...
羰花青染料***用作Di來標記細胞、細胞器、脂質體、病毒和脂蛋白。長鏈羰花青包括DiO(DiOC18(3))、DiI(DiIC18(3))、DiD(DiIC18(5))和DiR,以及二烷基氨基苯乙烯基染料DiA(4-Di-16-ASP)用于標記膜和其他疏水結構...
適用于脂質體載藥的熒光染料一些常用于標記脂質體的熒光染料包括:1.DiO(DiOC18(3)):DiO是一種疏水性的熒光染料,可以插入到脂質雙層中,用于標記脂質體的膜。它在綠色波長下發出熒光。2.DiI(DiIC18(3)):類似于DiO,DiI也是一種疏水性...
與花青和羅丹明染料一樣,熒光素也是一種有機染料。熒光素的比較大吸收波長為494nm,比較大發射波長為521nm(通常吸收藍色范圍內的光并發射綠色范圍內的光),熒光素是一種高熒光物質。即使在非常少量的情況下也可以檢測到它,并且在與抗體結合時用于顯微鏡檢查。熒光素...
微泡的制造通常通過兩種通用技術來進行:分散氣體顆粒的自組裝穩定,以及芯萃取的雙乳液制備。第一種技術用于脂質或蛋白質基氣泡。氣體(溶解度低的空氣或氟化氣體)分散在含有脂質或表面活性劑膠束混合物或經超聲變性的蛋白質的水介質中。這些成分沉積在氣液界面上,使其穩定下來...