二代測序—全外顯子測序的優勢 針對性強：它主要聚焦于基因組中編碼蛋白質的區域，這部分區域雖然只占整個基因組的 1 - 2% 左右，但包含了大部分與疾病相關的突變。例如，在研究孟德爾遺傳病時，很多致病突變都位于外顯子區域，通過全外顯子測序可以更高效地找...

宏基因組二代測序，你了解多少？ 宏基因組二代測序（mNGS）是一項覆蓋病原譜廣且高通量的檢測技術，已在臨床領域得到了廣泛的應用。對于血液病患者，病原mNGS通過對樣本快速高通量測序，可以獲得更準確、相對無偏倚的病原信息，對病原診斷起到積極的作用，尤其...

什么樣本可以做二代測序？③ 細胞樣本 培養細胞：包括各種原代培養細胞和細胞系。在基礎醫學研究中，對培養的細胞進行測序可以了解細胞的基因特征和功能變化。例如，在研究細胞信號轉導通路時，對經過特定刺激處理的培養細胞進行轉錄組測序，以分析基因表達的上...

二代測序技術在不同人群中的準確性有何差異③ 孕婦及胎兒 優勢：無創產前篩查（NIPT）是二代測序技術用于孕期胎兒常見染色體非整倍體篩查的應用，對于唐氏綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征等染色體異常疾病的檢測準確率分別能達到95%、85%...

對于二代測序的概念是什么？ 第二代測序(Next-generationsequencing，NGS)又稱為高通量測序(High-throughputsequencing)，是基于PCR和基因芯片發展而來的DNA測序技術。我們都知道一代測序為合成終止測...

二代測序——轉錄組測序的背景和基本原理 1、背景：在基因表達過程中，DNA 轉錄為 RNA，轉錄后的 RNA 會經過一系列加工，包括剪接等過程形成成熟的 mRNA，然后進行翻譯產生蛋白質。轉錄組測序可以讓我們在全基因組范圍內研究基因的表達情況，相比于...

什么樣本可以做二代測序？③ 細胞樣本 培養細胞：包括各種原代培養細胞和細胞系。在基礎醫學研究中，對培養的細胞進行測序可以了解細胞的基因特征和功能變化。例如，在研究細胞信號轉導通路時，對經過特定刺激處理的培養細胞進行轉錄組測序，以分析基因表達的上...

二代測序技術在不同人群中的準確性有何差異④ ***性疾病患者 優勢：病原學二代測序可準確檢測病原體的基因序**定病原體種類和基因型，為***性疾病的診斷和***提供依據，在檢測罕見病原體、病毒***等方面具有獨特優勢，有助于快速明確診斷，尤其是...

二代測序——轉錄組測序的應用領域 1、基礎生物學研究：可以用于研究生物的發育過程。例如，在胚胎發育過程中，通過轉錄組測序可以了解不同階段胚胎細胞中基因的表達變化，揭示胚胎發育的分子機制。還可以用于物種進化研究，比較不同物種間轉錄組的差異，推斷基因表達...

二代測序的建庫步驟⑤ 五、文庫富集（可選步驟） PCR富集：對于一些起始樣本量較少或者連接效率較低的情況，可能需要進行PCR富集。利用與接頭序列互補的引物進行PCR擴增，增加文庫中目標DNA片段的數量。在PCR反應中，需要注意引物的設計要與接頭...

二代測序——甲基化的定義和概念 定義：甲基化（methylation）是指從活性甲基化合物（如S-腺苷基甲硫氨酸）上將甲基催化轉移到其他化合物的過程。在生物系統中，這是一種常見的化學修飾方式，主要涉及在DNA、RNA和蛋白質等生物大分子上添加甲基基團...

②二代測序一般多久出結果？ 2、測序平臺和通量 不同的二代測序平臺有不同的通量（一次能測序的樣本數量和數據量）和測序速度。一些高通量的測序平臺，如IlluminaNovaSeq系列，能夠在較短時間內產生大量的數據。但如果使用的是通量較低的小型測...

什么樣本可以做二代測序？② 組織樣本 新鮮組織：如手術切除的**組織、活檢組織等。新鮮組織樣本中的細胞完整性較好，能夠提供高質量的DNA和RNA。在**研究中，對新鮮**組織進行全基因組測序、轉錄組測序等，可以深入了解**的基因突變、基因表達變...

④二代測序一般多久出結果？ 4、數據分析的復雜程度 數據分析是二代測序的重要環節。簡單的分析，如檢測已知的單核苷酸多態性（SNP），可以通過與參考基因組比對后利用一些成熟的軟件快速完成。但如果是進行復雜的分析，如尋找新的基因融合事件、復雜結構變...

二代測序——數據分析類問題 二代測序數據分析的主要內容和挑戰是什么：主要內容包括數據的質量控制、序列比對、變異檢測、基因表達定量、功能注釋等。挑戰在于數據量巨大，需要高效的計算資源和復雜的生物信息學算法來處理；數據質量參差不齊，需要嚴格的質量控制和過...

二代測序——質量控制類問題 如何評估二代測序數據的質量：主要通過一些質量指標來評估，如Q值（質量值）分布，用于衡量每個堿基的測序質量；堿基含量分布，檢查四種堿基的比例是否正常；GC含量分布，看是否與預期的基因組GC含量相符；序列重復度，評估數據中重復...

二代測序——基因組測序該測幾個G？② 人類全外顯子組測序 人類全外顯子組*占基因組的1%-2%，大小約為30M-60M左右，但通常需要較高的測序深度來確保外顯子區域的變異檢測準確性，一般測序深度在100X-200X之間，數據量大約在3G-12G...

一代、二代、三代測序的區別分別是什么？ 一代測序是上世紀70年代由Sanger和Coulson開創的DNA雙脫氧鏈終止法測序，也稱為Sanger測序。 二代測序技術(NGS)是為了改進一代測序通量過低的問題而出現的，能夠同時對上百萬甚至數十億個...

二代測序——RNA甲基化的概念、作用和檢測方法 RNA 甲基化概念及位置：RNA 甲基化是在 RNA 分子上添加甲基基團，其中 N6 - 甲基腺苷（m6A）是最常見的一種 RNA 甲基化修飾形式，它主要發生在 mRNA（信使 RNA）的腺嘌呤（A）殘...

④二代測序一般多久出結果？ 4、數據分析的復雜程度 數據分析是二代測序的重要環節。簡單的分析，如檢測已知的單核苷酸多態性（SNP），可以通過與參考基因組比對后利用一些成熟的軟件快速完成。但如果是進行復雜的分析，如尋找新的基因融合事件、復雜結構變...

不同二代測序技術平臺的速度 Illumina 測序平臺：這是目前市場上應用較為***的二代測序平臺之一，其測序速度較快。例如 Illumina NovaSeq 系列，一次運行可以在 1-3 天內產生大量的數據，通量可達數億甚至數十億條讀長，能夠滿足大...

什么樣本可以做二代測序？① 1、血液樣本 全血：這是最常見的樣本類型之一。血液中含有白細胞，其細胞核內有完整的基因組DNA。通過提取白細胞中的DNA，可以進行全基因組測序、全外顯子組測序等。例如，在遺傳病的基因診斷中，抽取患者的全血，提取DNA...

二代測序——應用領域類問題 二代測序在**研究中的應用有哪些：可用于**的早期篩查，通過檢測血液中的循環**DNA；進行**的診斷分型，確定**的基因突變特征；評估***效果，監測***過程中腫瘤細胞的基因變化；預測**的預后，分析與預后相關的基因標...

什么樣本可以做二代測序？① 1、血液樣本 全血：這是最常見的樣本類型之一。血液中含有白細胞，其細胞核內有完整的基因組DNA。通過提取白細胞中的DNA，可以進行全基因組測序、全外顯子組測序等。例如，在遺傳病的基因診斷中，抽取患者的全血，提取DNA...

二代測序——應用領域類問題 二代測序在**研究中的應用有哪些：可用于**的早期篩查，通過檢測血液中的循環**DNA；進行**的診斷分型，確定**的基因突變特征；評估***效果，監測***過程中腫瘤細胞的基因變化；預測**的預后，分析與預后相關的基因標...

二代測序的建庫步驟③ 三、末端修復和加A尾（以DNA文庫為例） 末端修復：經過片段化后的DNA末端可能是不平齊的，有5'-突出端或3'-突出端。末端修復反應可以利用T4DNA聚合酶、Klenow片段等酶，將這些末端補平，使其成為平末端。T4DN...

什么樣本可以做二代測序？① 1、血液樣本 全血：這是最常見的樣本類型之一。血液中含有白細胞，其細胞核內有完整的基因組DNA。通過提取白細胞中的DNA，可以進行全基因組測序、全外顯子組測序等。例如，在遺傳病的基因診斷中，抽取患者的全血，提取DNA...

二代測序的建庫步驟② 二、片段化處理 物理方法：超聲破碎是常用的物理片段化方法。它通過超聲波的高頻振動將核酸分子打斷成合適大小的片段。例如，在一些文庫構建中，將DNA樣本置于超聲破碎儀中，通過調整超聲功率和時間，可以將DNA片段化到幾百堿基對（...

④二代測序一般多久出結果？ 4、數據分析的復雜程度 數據分析是二代測序的重要環節。簡單的分析，如檢測已知的單核苷酸多態性（SNP），可以通過與參考基因組比對后利用一些成熟的軟件快速完成。但如果是進行復雜的分析，如尋找新的基因融合事件、復雜結構變...

不同二代測序技術平臺的速度 Illumina 測序平臺：這是目前市場上應用較為***的二代測序平臺之一，其測序速度較快。例如 Illumina NovaSeq 系列，一次運行可以在 1-3 天內產生大量的數據，通量可達數億甚至數十億條讀長，能夠滿足大...