細胞轉染技術服務細胞轉染實驗技術服務（DH0002）一、服務介紹細胞轉染（Transfection）是指將DNA或者RNA導入真核細胞中的過程。轉染的目的是產生重組蛋白，或特異性增強或控制轉染細胞中的基因表達。常規轉染技術可以分為兩大類，一類為瞬時轉染，一類為穩定轉染（構建穩定細胞株）。二、服務內容及價格服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）DH0002-1瞬時轉染詢價7-10DH0002-2穩定轉染（構建穩定細胞株）詢價7-10注：瞬時轉染：是指外源基因進入受體細胞后，存在于游離的載體上，不整合到細胞的染色體上，在外源基因導入細胞1-4天后收獲細胞對目的基因的表達進行檢測。特點是...

建議按照2×106每孔的數量將293T細胞均勻鋪入。（2）第二天：在24小時之內，觀察293T細胞的匯合度在90%~95%之間時，向其中加入DNA-脂質體復合體，DNA-脂質體復合體制備方法如下：a）輕輕混勻LipoMax，根據說明書加入相應量于500μlOpti-MEM無血清培養基中，混合均勻并置于室溫5分鐘。b）在500μlOpti-MEM無血清培養基中稀釋DNA，總質量為15μg按照載體質粒:psPAX2:=4:3:1的比例加入DNA。c）將稀釋后的LipoMax和稀釋后的DNA輕輕混勻，常溫靜置20分鐘，形成DNA-LipoMax復合體。（3）將DNA-LipoMax復合體輕柔...

注意事項1.病毒包裝的幾個關鍵點主要包括：細胞因素、載體系統（盡量使用成熟的商業化載體系統）、構建重組的質粒正確與否、質粒抽提純化情況、包裝轉染控制（24、48小時的細胞及熒光狀態判斷）、目的基因對病毒包裝影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會影響到是否能包裝成功）。，需要觀察包裝病毒后的48h培養基顏色是否橙紅。3.病毒濃縮：病毒一般在48h和72h各收一次。如果不想濃縮病毒的話，也可以直接將收集的病毒上清作為要的細胞的培養基，但是可能效果會不太好。并且一般收病毒時，培養基的營養已經損耗了很多，那樣直接培養細胞會損害細胞，所以建議還是進行濃縮后再。常見問題1.包裝病毒時293T...

一.細胞復蘇1、提前準備完全培養基并預熱至37℃（可以放至在水浴或培養箱中進行預熱，需要多少預熱多少，反復預熱會導致培養基失活）；用清洗潔凈的燒杯或其他合適容器裝有適量超純水，然后放入37-38℃水浴鍋中預熱至37℃（至少需30min）；把所需耗材和其他物品放置于超凈工作臺中紫外照射滅菌；2、提前查詢所取凍存管的存放位置，把整個存儲架子提起，為了降低復溫對其它細胞的影響，可把該存儲架子放置于裝有液氮的泡沫盒中，快速（存儲架離開液氮罐的時間不要超過1分鐘，否則其余細胞容易復溫死亡，凍存管子的液氮會氣化）從液氮罐中取出凍存管并放置于裝有液氮的保溫杯中(必須用用潔凈鑷子取出凍存管，以免手)，...

流式細胞檢測是一種應用于生物醫學研究和臨床診斷的技術。接下來就由上海東寰為您介紹。它通過將細胞懸浮液通過流式細胞儀進行分析，可以快速、準確地獲取大量細胞的信息，包括細胞數量、大小、形態、表面標記物等。流式細胞檢測已經成為細胞生物學和免疫學領域的重要工具，為科學家們提供了更深入的了解細胞的機制和功能。流式細胞檢測的原理是利用流式細胞儀的流動系統將細胞懸浮液以單個細胞的形式通過激光束進行檢測。激光束照射到細胞上時，細胞會發出散射光和熒光信號。散射光可以提供有關細胞的大小和形態信息，而熒光信號則可以用于檢測細胞表面標記物或內部分子的表達水平。通過分析這些信號，可以對細胞進行分類、計數和定量分...

把培養瓶置于倒置顯微鏡下觀察，如大部分細胞變圓，立即移除胰酶消化液（如大部分細胞飄起，可不移除胰酶消化液），加入5ml預熱完全培養基，用吸管取培養液吹打瓶壁細胞，使其脫離瓶壁形成單細胞懸液，離心，小心移除上清；3、加入適量（消化前預估細胞的數量，1-2*10E6/ml凍存液）凍存液并吹打混勻，分裝至凍存管中，標記凍存細胞的名稱、冷凍日期、操作者姓名拼音簡寫，然后放入梯度降溫盒（提前復溫至室溫），置于-80℃過夜，次晨置于液氮罐中保存。注意事項1.密切觀察細胞的生長密度，當細胞密度即將達到其生長密度極限時進行換液，以便第二天進行保種；2.消化前進行凍存液配制，切勿用培養基和血清重懸細胞后...

客戶需告知具體的細胞處理方式及詳細要求。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關材料（具有保密性的材料除外）。四、服務流程瞬轉穩轉導入的DNA沒有整合到基因組中，而是保留在細胞核上導入的DNA整合到基因組中導入的遺傳物質不傳遞到子代；遺傳改變只是暫時的導入的遺傳物質能夠代代相傳；遺傳改變是**的不需要選擇性篩選需要選擇性篩選出穩定轉染的細胞DNA載體和RNA都可用于瞬時轉染只有DNA載體可用于穩定轉染；RNA本身不能穩定地導入細胞中導入的遺傳物質的高拷貝數導致高水平的蛋白質表達。單拷貝數或低拷貝數的穩定整合的DNA導致較低水平的蛋白質表達。通常在轉染后24-96小時內收獲細胞。需要2-...

并進質粒抽提。GAG質粒和VSV質粒同樣可以轉化至感受態細菌DH5α中，并進行無內質粒抽提。質粒抽提后冷凍于-20℃保存。2、慢病毒包裝1)使用DMEM完全培養基培養6cm皿HEK293T至匯合度為70~80%。采用opti-MEM和Lipo3000分別轉染含有目的基因的pMSCV-eGFP、VSV、GAG質粒及對照載體，每皿加入脂質體-質粒轉染混懸液按購買脂質體相關說明書操作定量。繼續培養24h。2)24小時后，將培養基更換為新鮮的DMEM完全培養基，放進細胞培養箱繼續培養48~72h。3)48~72h后收集上層培養液，并過μm濾膜，采用ELISA法對所獲得的慢病毒載體進行病毒滴度測...

并進質粒抽提。GAG質粒和VSV質粒同樣可以轉化至感受態細菌DH5α中，并進行無內質粒抽提。質粒抽提后冷凍于-20℃保存。2、慢病毒包裝1)使用DMEM完全培養基培養6cm皿HEK293T至匯合度為70~80%。采用opti-MEM和Lipo3000分別轉染含有目的基因的pMSCV-eGFP、VSV、GAG質粒及對照載體，每皿加入脂質體-質粒轉染混懸液按購買脂質體相關說明書操作定量。繼續培養24h。2)24小時后，將培養基更換為新鮮的DMEM完全培養基，放進細胞培養箱繼續培養48~72h。3)48~72h后收集上層培養液，并過μm濾膜，采用ELISA法對所獲得的慢病毒載體進行病毒滴度測...

原理以慢病毒包裝為例，主要包括3個質粒：質粒DNA可以轉錄出慢病毒遺傳物質（RNA），但不能翻譯出慢病毒的外殼及蛋白成分的載體質粒，其同時含有目的基因和報告基因，psPAX2是可以表達慢病毒外殼的質粒，其表達產物可通過粘附機制更易穿過細胞膜。為慢病毒的膜蛋白質粒，通過脂質體進行三質粒共轉到靶細胞基因組中，宿主基因組在表達時，隨宿主基因轉錄出的目的基因RNA與psPAX2、基因翻譯出的蛋白組裝為慢病毒。病毒進入細胞后，其遺傳物質RNA逆轉錄出DNA，該基因再整合到靶細胞的基因組中，完成轉染過程。因為質粒DNA只能轉錄出病毒RNA和表達目的基因卻不能表達出病毒的外殼和膜蛋白成分，因此其不能...

把培養瓶置于倒置顯微鏡下觀察，如大部分細胞變圓，立即移除胰酶消化液（如大部分細胞飄起，可不移除胰酶消化液），加入5ml預熱完全培養基，用吸管取培養液吹打瓶壁細胞，使其脫離瓶壁形成單細胞懸液，離心，小心移除上清；3、加入適量（消化前預估細胞的數量，1-2*10E6/ml凍存液）凍存液并吹打混勻，分裝至凍存管中，標記凍存細胞的名稱、冷凍日期、操作者姓名拼音簡寫，然后放入梯度降溫盒（提前復溫至室溫），置于-80℃過夜，次晨置于液氮罐中保存。注意事項1.密切觀察細胞的生長密度，當細胞密度即將達到其生長密度極限時進行換液，以便第二天進行保種；2.消化前進行凍存液配制，切勿用培養基和血清重懸細胞后...

流式細胞檢測工作原理是在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多參數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數，具有速度快、精度高、準確性好的優點，是當代先進的細胞定量分析技術之一，下面就由上海東寰給大家簡要介紹。光源、液流通路、信號檢測傳輸和數據的分析系統是流式細胞儀的主要組成。目前臨床中運用流式細胞儀進行外周血白細胞、骨髓細胞等檢測是臨床檢測的重要組成部分。流式細胞儀主要由四部分組成。它們是：流動室和液流系統；激光源和光學系統；光電管和檢測系統；計算機和分析系統。上圖為其結構示意圖。流動室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成，常用光學玻璃...

也可以挑去單克隆細胞株進行進一步培養，以得到滿意的穩定表達目的基因的細胞株。6)使用qRT-PCR和Westernblot的方法檢測目的基因的表達量和蛋白水平是否顯著提高。7)由此可得三組細胞株：a.正常細胞株；b.空載病毒載體的細胞株；c.過表達目的基因的病毒載體的細胞。8)在后續培養傳代該穩轉細胞株時，培養基中需添加低濃度Puromycin做壓力篩選條件。注意事項1.為避免慢病毒后細胞死亡，務必保證原始細胞無支原體污染。2.查閱壓力篩選條件在目標細胞系中穩轉株篩選的致死用量信息。3.查閱文獻確定慢病毒在目標細胞系中的滴度。4.轉染后可以進一步進行單克隆穩轉株培養，可采用稀釋法和培養...

由于RNA酶是無處不在的，所以需要加入DEPC使RNA酶失活，阻止RNA的降解。防護攻略：可滅活各種蛋白質，是RNA酶的強抑制劑。DEPC是一種潛在的致物質，在操作中應盡量在通風的條件下進行，并避免接觸皮膚。DEPC毒性并不是很強，但吸入的毒性是強的，使用時戴口罩，不小心占到手上注意立即沖洗。毒性級別：★★★實驗場景：PCR,NorthernBlot等實驗中，Trizol是一種常用的總RNA抽提試劑，可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯環類等物質，能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。在樣品裂解過程中Trizol能夠抑制RNA酶活性保持RNA完整性。防護攻略：含有大量苯環類有...

細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的ji活、表達以及調控等的作用，它并不是bing理條件下，自體損傷的一種現象，而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。上海東寰為您分享細胞凋亡與細胞壞死的區別。細胞凋亡與程序性死亡其實從嚴格的詞學意義上來說，細胞程序性死亡（PCD）與細胞凋亡是有很大區別的。細胞程序性死亡的概念是1956年提出的，PCD是個功能性概念，描述在一個多細胞生物體中某些細胞死亡是個體發育中的一個預定的，并受到嚴格程序把控的正常組成部分。例如蝌蚪變成青蛙，其bian態過程中尾部的消失伴隨大量細胞死亡，高等哺乳類動物指間蹼...

也可以挑去單克隆細胞株進行進一步培養，以得到滿意的穩定表達目的基因的細胞株。6)使用qRT-PCR和Westernblot的方法檢測目的基因的表達量和蛋白水平是否顯著提高。7)由此可得三組細胞株：a.正常細胞株；b.空載病毒載體的細胞株；c.過表達目的基因的病毒載體的細胞。8)在后續培養傳代該穩轉細胞株時，培養基中需添加低濃度Puromycin做壓力篩選條件。注意事項1.為避免慢病毒后細胞死亡，務必保證原始細胞無支原體污染。2.查閱壓力篩選條件在目標細胞系中穩轉株篩選的致死用量信息。3.查閱文獻確定慢病毒在目標細胞系中的滴度。4.轉染后可以進一步進行單克隆穩轉株培養，可采用稀釋法和培養...

原理以慢病毒包裝為例，主要包括3個質粒：質粒DNA可以轉錄出慢病毒遺傳物質（RNA），但不能翻譯出慢病毒的外殼及蛋白成分的載體質粒，其同時含有目的基因和報告基因，psPAX2是可以表達慢病毒外殼的質粒，其表達產物可通過粘附機制更易穿過細胞膜。為慢病毒的膜蛋白質粒，通過脂質體進行三質粒共轉到靶細胞基因組中，宿主基因組在表達時，隨宿主基因轉錄出的目的基因RNA與psPAX2、基因翻譯出的蛋白組裝為慢病毒。病毒進入細胞后，其遺傳物質RNA逆轉錄出DNA，該基因再整合到靶細胞的基因組中，完成轉染過程。因為質粒DNA只能轉錄出病毒RNA和表達目的基因卻不能表達出病毒的外殼和膜蛋白成分，因此其不能...

細胞生命的終結有許多種方式，凋亡只是其中一種，所以要確保自己檢測到的的確是凋亡信號。上海東寰為您分析細胞凋亡的檢測方法！細胞凋亡的檢測方法也有多種，如形態學檢測、磷脂酰絲氨酸外翻分析（AnnexinV法）、線粒體膜勢能檢測、DN***斷化檢測、TUNEL法及Caspase-3活性檢測等，可根據自己的實驗需求選擇合適的方法。這里我們主要了解AnnexinV法。AnnexinV是一種分子量為35～36KD的豐富的胞內蛋白。AnnexinV屬于Ca2+結合蛋白家族，可與磷脂（PL）發生可逆的Ca2+依賴性結合，對磷脂酰絲氨酸（PS）具有高親和力。在健康細胞中，PS主要位于質膜的胞質側，而在早...

流式細胞周期檢測試劑盒是一種用于研究細胞周期的重要工具。接下來就跟著上海東寰一起來看看吧~細胞周期是細胞生命周期中的一個重要階段，它包括細胞的生長、DNA復制和細胞分裂等過程。了解細胞周期對于研究細胞生物學以及藥物篩選等方面具有重要意義。流式細胞周期檢測試劑盒通過染色劑與細胞中的DNA結合，可以快速、準確地分析細胞周期的不同階段。流式細胞周期檢測試劑盒的原理是利用細胞中DNA的含量來判斷細胞所處的周期階段。在細胞周期的不同階段，細胞中的DNA含量也會有所變化。通過染色劑與細胞中的DNA結合，可以將細胞分為G1期、S期和G2/M期等不同階段。這些染色劑可以通過流式細胞儀進行檢測，通過分析...

1、取細胞縣液100u加入Transwel小室。2、24孔板下室一般加入600u含20S的培養基，特別注意的是，下層培養液和小室間常會有氣泡產生，一旦產生氣泡，下層培養液的趨化作用就減弱其至消失了，在種板的時候要特別留心，一旦出現氣泡，要將小室提起，去除氣泡，再將小室放進培養板。3、培養細胞:常規培養12-48h(主要依細胞侵襲能力而定)。24h較常見，時間點的選擇除了要考慮到細胞細胞侵襲力外，處理因素對細胞數目的影響也不可忽視。直接計數法貼壁”細胞計數，這里所謂的“貼“是指細胞穿過膜后，可以附著在膜的下室側而不會掉到下室里面去，通討給細胞染色可在鏡下計數細胞。取出Transwel小室...

細胞內吞檢測細胞內吞檢測服務（DH0013）一、服務介紹1)無菌條件下，將DiI-LDL用細胞培養基稀釋至25-50μg/ml。2)加入活細胞內，37℃培養4-5小時。3)孵育結束，吸去含有HumanDiI-LDL的培養基，并用無探針的培養基洗幾次。4)細胞固定5)熒光顯微鏡拍照二、服務內容及價格服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）DH0013細胞內吞檢測服務（DIL-Ac-LDL）咨詢咨詢三、客戶提供1.符合實驗要求的細胞藥品（包括說明書）（可代為購買）,若無任何說明，默認由本公司提供。四、提交給客戶結果1、完整實驗報告一份，包括實驗流程、數據和圖片等2、結果分析報告五、服務項...

使其形成利于核酸進入的微孔。C.逆轉錄病毒（RNA）：通過病毒中膜糖蛋白和宿主細胞表面的受體相互作用進入宿主細胞，之后反轉錄酶啟動合成DNA并隨機整合到宿主基因組中。特點：穩定轉染，可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等，但攜帶基因不能太大。D.腺病毒（雙鏈DNA）：先和細胞表面的受體結合，繼而在αV整合素介導下被細胞內吞。特點：可用于難轉染的細胞。2、影響轉染的因素血清：血清影響復合物的形成，降低轉染效率。陽離子脂質體和DNA的量在使用血清時會有所不同，因此想在轉染培養基中加入血清時要進行條件優化。大部分細胞可以在無血清培養基中幾個小時內保持健康。：比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的...

原代細胞是指在機體或組織中直接從生物體分離出來的、未經傳代培養的細胞。這種細胞保持著其原始的生物學特性，具有高度的活性和分裂能力。原代細胞在許多生物醫學研究中具有重要地位，包括藥物篩選、疾病模型的建立以及疫苗研發等。原代細胞的獲得通常是通過組織剪切、消化或酶解等方式從機體或組織中分離出來。這些細胞脫離了它們在生物體中的環境，但是仍然保持著其基本的生物學特性，包括細胞膜、細胞核、細胞器以及其他重要的生物分子。原代細胞在未經過傳代培養的情況下，保持著其原始的生物學特性，因此，它們常常被用于藥物篩選、毒理學研究等。同時，由于原代細胞具有高度活性和分裂能力，它們也被用于組織工程和再生醫學中，如...

染方法大致可分為物理介導（如電穿孔法、顯微注射和基因等）、化學介導（脂質體及其代替物、磷酸鈣等）和生物介導（各類病毒，包括腺病毒、慢病毒、逆轉錄病毒、腺相關病毒等）三類途徑。細胞轉染又分為瞬時轉染和穩定轉染，瞬時轉染是指外源基因進入受體細胞后，存在于游離的載體上，不整合到細胞的染色體上，基因表達維持時間較短，通常在96h以內；穩定轉染是指DNA整合到宿主細胞的染色體中，使宿主細胞可長期表達目的基因。目前，大多采用依據不同質粒載體含有的抗性標志選用相應的對靶細胞進行篩選，常用的有嘌呤霉素（Puromycin）、G418（Geneticin）等。1、主要有下面幾種化學法：磷酸鈣法、DEAE...

原代細胞是指在機體或組織中直接從生物體分離出來的、未經傳代培養的細胞。這種細胞保持著其原始的生物學特性，具有高度的活性和分裂能力。原代細胞在許多生物醫學研究中具有重要地位，包括藥物篩選、疾病模型的建立以及疫苗研發等。原代細胞的獲得通常是通過組織剪切、消化或酶解等方式從機體或組織中分離出來。這些細胞脫離了它們在生物體中的環境，但是仍然保持著其基本的生物學特性，包括細胞膜、細胞核、細胞器以及其他重要的生物分子。原代細胞在未經過傳代培養的情況下，保持著其原始的生物學特性，因此，它們常常被用于藥物篩選、毒理學研究等。同時，由于原代細胞具有高度活性和分裂能力，它們也被用于組織工程和再生醫學中，如...

實驗介紹細胞遷移與侵襲實驗將Transwel小室放入培養板中，小室內稱上室，培養板內稱下室，上下層培養液以聚磚酸甜膜相隔，將研究的細胞種在上室內，由于聚碳酸脂膜有通透性，下層培養液中的成分可以影響到上室內的細跑，應用不同孔徑和經過不同處理的聚碳酸脂膜，就可以進行共培養、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究。一、實驗步驟：材料準備可拍照顯微鏡，Transwel小室，孔徑8um，沒包被膠的(Coste和Corning公司的也較常用)，Transwel遷移實驗的細胞培養板24孔板。細胞培養板應當與購買的Transwel小室相配套，BD公司的Matiael，無血清DMEM，(1%胎生血...

血管生長是發生的關鍵步驟。無論原發性還是繼發性，一旦生長直徑超過1~2mm，都會有血管生成，這是由于細胞自身可分泌多種生長因子，誘導血管生成。由于組織這種新生血管結構及功能異常，且血管基質不完善，這種微血管容易發生滲漏，因此細胞不需經過復雜的侵襲過程而直接穿透到血管內進入血流并在遠隔部位形成轉移。越來越多的研究表明，良性血管生成稀少，血管生長緩慢；而大多數惡性的血管生成密集且生長迅速，因此，血管生成在的發展轉移過程中起到重要作用，抑制這一過程將能明顯阻止組織的發展和擴散轉移。血管生成實驗的技術原理主要是應用Matrigel模擬機體環境，上面接種細胞，觀察血管生成情況。體外的血管生成實驗...

細胞生物學是生物學的一個分支，研究細胞的結構、功能、生理和遺傳學等方面。細胞是生命的基本單位，所有生物體都是由一個或多個細胞組成的。下面就跟著上海東寰一起看看吧。細胞的結構是細胞生物學的重要研究內容之一。細胞由細胞膜、細胞質、細胞核和細胞器等組成。細胞膜是細胞的外層，它控制物質的進出，維持細胞內外環境的穩定。細胞質是細胞內的液體，其中包含了各種細胞器和細胞骨架等結構。細胞核是細胞的控制中心，它包含了遺傳物質DNA，控制著細胞的生長和分裂。細胞器是細胞內的各種功能結構，如線粒體、內質網、高爾基體等，它們各自承擔著不同的生理功能。細胞的功能也是細胞生物學的研究重點之一。細胞是生命的基本單位...

1、取細胞縣液100u加入Transwel小室。2、24孔板下室一般加入600u含20S的培養基，特別注意的是，下層培養液和小室間常會有氣泡產生，一旦產生氣泡，下層培養液的趨化作用就減弱其至消失了，在種板的時候要特別留心，一旦出現氣泡，要將小室提起，去除氣泡，再將小室放進培養板。3、培養細胞:常規培養12-48h(主要依細胞侵襲能力而定)。24h較常見，時間點的選擇除了要考慮到細胞細胞侵襲力外，處理因素對細胞數目的影響也不可忽視。直接計數法貼壁”細胞計數，這里所謂的“貼“是指細胞穿過膜后，可以附著在膜的下室側而不會掉到下室里面去，通討給細胞染色可在鏡下計數細胞。取出Transwel小室...

在溫度37℃中培養24h左右，然后觀察其形態，顏色等變化。除此之外，平行設置兩個稀釋度培養基，步驟是先稀釋樣本，通過稀釋后，微生物可以分散為單個細胞，然后進行一定環境條件下培養，直到其長成菌落為止，然后進行計算大腸桿菌的數量，通過稀釋度和樣本數量進行計算。免疫磁珠法該分離技術的主要原理是以磁珠為載體和抗體，進行抗體和磁珠的結合，然后通過磁力技術完成力學的移動，進而分離大腸桿菌。與其他方式相比，這樣的方式方法具有一定的優點，該技術可以提升樣本中病原性弧菌的檢測成功率，并且免疫磁珠技術可以于不同菌種中對不同的微生物進行處理，進而在很大程度上提高檢測效率。自動化儀器檢測法主要是運用免疫自動化...