現在您知道了如何傳代細胞，讓我們再來看看傳代的一些不同應用。前面已經提到，人胚胎干細胞是一類必須傳代的細胞。它們通常與小鼠成纖維細胞MEF共培養，后者能提供幫助干細胞保持其多能性的因子。生長于飼養細胞上的干細胞到了合適的發育階段時需挑出來。可用微型移液管挑出或用玻璃工具輕輕將其刮下然后接種于新的培養液中進行擴增。有一些細胞系對酶消化敏感，或者貼壁很緊無法使用胰酶處理來重懸。細胞刮常用來輕輕將細胞從培養板的底部刮下來。如果細胞貼壁特別緊，可加入培養液或適當溶液后用血清吸管用力刮擦。使用該方法時要小心，細胞比較脆弱，容易在這種機械剝離的方法中受損。為了更快并可重復性的大量擴增細胞到超過...

幾種慢性肝病(CLD)，包括慢性病毒性肝炎、酒精性肝病和非酒精性脂肪肝/非酒精性脂肪性肝炎(NAFLD/NASH)，引起肝細胞損傷和壞死，進而引發炎癥和以細胞外基質(ECM)積累為特征的傷口愈合反應。如果損傷是急性的或自限性的，傷口愈合反應會迅速恢復正常組織穩態和肝臟結構。然而，如果損傷持續存在，隨之而來的慢性炎癥和ECM積累會超過肝臟再生的能力，導致纖維化并終導致肝硬化，這是一種預后不佳的肝臟疾病，也是發展為肝細胞(HCC)的主要危險因素。原代肝細胞的詳細介紹。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！北京動物原代肝細胞培養技巧 原代肝細胞培養越來越多地用作細胞和分子生物學的主要工具，為研究細胞的...

細胞傳代常用的儀器和試劑傳代細胞時，使用無菌技術和合適的試劑及設備尤為重要。針對您的細胞系選擇合適的培養液來得到比較好的生長和擴增很關鍵。每一個細胞系都有特定的生長營養組分配方，但是大多數細胞系起碼需要的添加物有以下這些：血清，如胎牛血清，需熱處理滅活其胎牛成分，它為細胞生長提供重要的生長因子。，如青霉素和鏈霉素用于防止細胞污染。其他的生長因子，如成纖維細胞生長因子，有助于延長細胞系的生長和擴增。不使用時，要將這些添加物或者“完全”細胞培養液保存于4攝氏度。首先要注意細胞培養液的顏色，富含營養的新鮮培養液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當細胞耗盡培養液中的營養成分時，開始在培...

小鼠原代肝細胞的分離與培養詳細操作步驟，工作液配制：：：10%水合氯醛，三蒸水5ml（4℃保存，）（1L）：16401袋，，NaHCO32g，酸鈉，加青霉素、鏈霉素，3nMinsulin15μl（），1nM1μl（1mM）1000ml水。調節PH值至，過濾除菌。（也可以用DMEM含酸鈉培養基）μg/ml膠原溶液：1μl純乙酸+μl水=（200μl乙酸+），過濾除菌。在(）。7.肝素2mg/ml:肝素鈉20mg,水10ml。8.灌流夜1:50ml/次：Kreb液50ml,50mMEGTA液。9.灌流夜2:30ml/次：Kreb液30ml，μl，膠原酶I15mg(現用現加)。 原代肝細...

肝臟的一個明顯特征是其在受傷后具有突出的再生能力。對于失去再生能力的晚期肝病，的方法是肝移植。然而，由于短缺，肝移植的實際應用受到限制。在臨床和動物模型中，已經評估了原代肝細胞的移植作為移植的替代方案。具有有效肝臟再增殖能力的人肝細胞（HH）對肝病的需求很大。然而，肝細胞移植的實際使用受到供體肝細胞的有限可用性和體外不能擴增原代HH（PHH）的阻礙。已經做出一些努力來揭示肝再生的機制并將這些發現轉化為改善HH培養物。據報道，含氧或微制造的共培養物可使HHs保持代謝功能數周;然而，這些細胞失去了它們的增殖能力。另一項使用高通量篩選的研究發現，支持HH的小分子在一周內擴增約10倍。此外...

常見的肝細胞系有HepG2，Hepa1-6等，HepG2是來源于一個15歲白人的肝組織；Hepa1-6來源于小鼠肝，兩者都屬于永生細胞系，當然也有永生細胞系具有的通性缺點，如與正常肝臟細胞相比遺傳物質發生改變，生物學特性會隨著細胞分裂次數的增加而發生遷移等。原代細胞是指從機體獲取組織細胞后的培養。由于離體時間短，因此其能夠保持在體內的生物學特性，與細胞系相比，是更接近體內環境的研究模型。肝臟是作為機體“”的代謝，其組成是極其復雜的，除了肝細胞，還包含眾多內皮細胞、免疫細胞等組分，各類細胞功能各異并相互交流，共同決定肝臟的代謝表型。因此，當我們要研究某一表型究竟是由于肝細胞自身的變化...

藥物性肝損傷（DILI）是臨床常見的肝損傷類型，是嚴重的藥物不良反應之一。細胞死亡是DILI的重要特征，藥物可通過誘導內質網應激和死亡受體等方式凋亡通路，誘導肝細胞凋亡或壞死，誘發肝損傷。除凋亡和壞死外，DILI過程中還伴隨著自噬、焦亡和鐵死亡。自噬可以去除受損的蛋白質以及細胞器，是肝細胞存活的重要機制，但也可能誘導肝細胞死亡。焦亡和鐵死亡是近發現的細胞死亡方式，其在DILI中的作用尚未完全闡明。阻斷肝細胞死亡通路，是DILI的重要手段。水飛薊素、柚皮素、人參皂苷等可以抑制肝細胞死亡通路，是DILI的潛在藥。針對不同細胞死亡方式的機制和特點，研究改善肝細胞死亡的藥物對DILI具有重...

肝臟表面有一薄層致密的結締組織構成的被膜。被膜深入肝內形成網狀支架，將肝實質分隔為許多具有相似形態和相同功能的基本單位，稱為肝小葉。人類肝臟約有50萬個肝小葉。肝小葉呈多角棱柱體，約l毫米×2毫米大小，小葉的中軸貫穿一條靜脈，為靜脈。肝細胞以靜脈為中心呈放射狀排列，形成肝細胞索。肝細胞索相互吻合成網，網眼間有竇狀隙和血竇。肝細胞間的管狀間隙形成毛細膽管。因此可以說，肝小葉是由肝細胞、毛細膽管、血竇和相當于毛細淋巴管的竇周隙(狄氏間隙)所組成。上海中喬新舟 原代肝細胞安心售后。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！青海小鼠肝細胞 CD-1原代肝細胞系 細胞傳代常用的儀器和試劑傳代細胞時，使用無菌技...

肝臟是人體“的”代謝，與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關。肝細胞在肝臟參與的各種代謝過程中發揮了主要作用。肝細胞是實質細胞，在肝臟中的比例多；此外實質細胞還包括少量的膽管內皮細胞。而非實質細胞則包括星狀細胞，巨噬細胞，NK細胞，成纖維細胞等，只占整個肝臟細胞的20%左右。原代肝細胞的優點：①原代肝細胞由于離體時間短，因此其能夠保持在體內的生物學特性，是更接近體內環境的研究模型。②原代肝細胞能夠避免體內實驗時肝臟其他細胞對肝細胞的影響，從而得出更加準確的研究結果。③原代細胞相比體內實驗具有更好的可控性。 原代肝細胞去哪找？上海中喬新舟告訴您。江蘇原代肝細胞可以存活多久結合國內外小鼠原代肝細胞分...

肝臟原位灌注法：（為分離肝細胞的經典方法）1，在38度-39度的水浴槽中預熱hepes緩沖液和膠原酶液，使其在肝內達到37度。2，給大鼠（180-200g）腹腔注射巴比妥鈉100ul/100g，從古靜脈注射肝素1000u，打開腹腔，在門靜脈的肝外5mm處松松的放一個結扎線環，將血管套管插入至肝掌，結扎，快速切開肝下血管與面壓力過高，關注500ml無鈣hepes緩沖液，流速為30ml/min，數秒鐘肝臟即變白。3，灌注300ml膠原酶液，流速15ml/min，持續20min。肝臟腫大。4，切下肝臟。用hepes緩沖液沖洗。切開肝纖維囊，收集消化清洗液被并混入100mlleibovit...

然而，這些復雜的方法無法進行大規模的實驗，在2D單層培養中維持分化的PHH依然重要。在這方面，近測試了一組化學物質，而且鑒定了5種補充劑的一個組合（5C-medium，5C培養基），包括Forskolin（腺苷酸環化酶抑制劑），SB431542(TGF-β抑制劑)，IWP2（Wnt抑制劑），DAPT(Notch抑制劑)以及LDN193189(BMP抑制劑)，可以維持PHH分化狀態30天。不同于DMSO處理需要14天，Forskolin可以在72h內誘導HepaRG細胞發生功能性極化。SB431542和DAPT也被用于在3D培養條件下使肝祖細胞樣細胞分化，并用HBV它們。盡管這些發現...

實驗步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過，打一松松的假結，從假結下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結系緊。注意：穿帶線縫合針時不要扎破血管，打的結不要包進太多肉，否則結系不緊。靜脈留置針如成功扎進血管，里面的針時會出現回血現象。2通過留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準備給予灌流液1，同時剪開肝門靜脈，灌注時間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時間很重要，兩次灌注時嚴格保持針不要動，否則容易扎破血管）。翻開肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉移至細胞間內，放于400目篩網上，用4度預冷的1640無血清培養液反復吹打肝臟，...

實驗步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過，打一松松的假結，從假結下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結系緊。注意：穿帶線縫合針時不要扎破血管，打的結不要包進太多肉，否則結系不緊。靜脈留置針如成功扎進血管，里面的針時會出現回血現象。2通過留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準備給予灌流液1，同時剪開肝門靜脈，灌注時間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時間很重要，兩次灌注時嚴格保持針不要動，否則容易扎破血管）。翻開肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉移至細胞間內，放于400目篩網上，用4度預冷的1640無血清培養液反復吹打肝臟，...

原代肝細胞可以懸浮培養或貼壁培養。一些細胞自然地懸浮在懸浮液中，而不附著在表面上（例如，來源于外周血的細胞）。也有一些細胞系經過修飾可以在懸浮培養中存活，它們的生長密度高于粘附條件所允許的密度。對于依賴貼壁的原代細胞，貼壁細胞（例如實體組織）需要一個表面才能在體外正常生長。這些細胞大多在沒有涂層的扁平塑料容器中培養，但有時在微載體上培養，可以用細胞外基質蛋白（如膠原蛋白和層粘連蛋白）包被，以增加粘附特性并提供生長和分化所需的其他信號。細胞培養基由補充了適當的生長因子和細胞因子的基礎培養基組成，細胞在細胞培養箱中生長，并維持在適當的溫度和混合氣體中（對于哺乳動物細胞，通常為37°C，...

隨著各型肝炎、肝硬化、肝等慢性肝病的發病率日益升高，體外培養的肝細胞也被普遍地用千肝病基礎研究中。盡管細胞培養技術不斷改進和成熟，國內外也先后建立了多株人肝細胞系，但體外分離和培養人正常肝細胞仍是非常有價值的研究材料。一材料與設備1.設備與器材超凈工作臺、離心機、CO2培養箱、－70℃冰箱、－20℃冰箱。2.無菌材料大培養皿、青霉素小瓶、50ml離心管、刻度吸管、彎頭吸管、T25培養瓶、手術剪、刀、鏤、細胞篩（100目）、消毒用乙醇棉球、流產胚胎、高糖DMEM培養液、胎牛血清、青／鏈霉素、D-Hanks溶液、0.25％胰蛋白酶/0.03%EDTA消化液。原代肝細胞的定制尺寸。歡迎來電咨詢上海中...

原代培養：1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內，固定在泡沫板上。2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養皿中。3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。4.將篩網置于平皿中，脾臟置于篩網上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網上進行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養液沖洗。5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。6.加入10ml培養液，吹打混勻，取樣計數。7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養瓶上。面做好...

藥物性肝損傷（DILI）是臨床常見的肝損傷類型，是嚴重的藥物不良反應之一。細胞死亡是DILI的重要特征，藥物可通過誘導內質網應激和死亡受體等方式凋亡通路，誘導肝細胞凋亡或壞死，誘發肝損傷。除凋亡和壞死外，DILI過程中還伴隨著自噬、焦亡和鐵死亡。自噬可以去除受損的蛋白質以及細胞器，是肝細胞存活的重要機制，但也可能誘導肝細胞死亡。焦亡和鐵死亡是近發現的細胞死亡方式，其在DILI中的作用尚未完全闡明。阻斷肝細胞死亡通路，是DILI的重要手段。水飛薊素、柚皮素、人參皂苷等可以抑制肝細胞死亡通路，是DILI的潛在藥。針對不同細胞死亡方式的機制和特點，研究改善肝細胞死亡的藥物對DILI具有重...

原代肝細胞培養物可用作置換組織或。利用原代細胞重建受損組織或替換無功能的細胞或組織的研究正在進行中。培養技術和研究正在胚胎和成人干細胞培養上進行。這些細胞具有分化為許多不同類型的細胞和的能力。通過控制這些細胞的發育和分化，我們也許能夠多種醫學疾病。原代細胞也已普遍用于3D生物打印應用中。干細胞療法：從骨髓、血液或胚胎中分離出來的干細胞涉及原代細胞培養。患者自己的干細胞或來自供體的干細胞在體外生長，以產生足夠的細胞，這些細胞可用于再生組織或替代功能缺陷的細胞。這個領域正在探索中，以設計針對遺傳疾病、脊髓損傷、退行性疾病和的療法。 上海中喬新舟的 原代肝細胞教學質量可靠嗎？歡迎來電咨詢上海中喬...

肝臟是人體“的”代謝，與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關。肝細胞在肝臟參與的各種代謝過程中發揮了主要作用。肝細胞是實質細胞，在肝臟中的比例多；此外實質細胞還包括少量的膽管內皮細胞。而非實質細胞則包括星狀細胞，巨噬細胞，NK細胞，成纖維細胞等，只占整個肝臟細胞的20%左右。原代肝細胞的優點：①原代肝細胞由于離體時間短，因此其能夠保持在體內的生物學特性，是更接近體內環境的研究模型。②原代肝細胞能夠避免體內實驗時肝臟其他細胞對肝細胞的影響，從而得出更加準確的研究結果。③原代細胞相比體內實驗具有更好的可控性。 原代肝細胞的價格分析。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！上海火雞Turkey Hepatocyte...

原代肝細胞屬于高度分化的細胞，對體外培養條件的要求比傳代細胞高，其在體外存活時間也比傳代細胞短，采用單層膠原培養法進行體外培養的原代肝細胞存活時間為1周左右[25]。本實驗是在Seglen兩步灌流法的基礎上進行改進，結合逆向灌流、多次低速離心等方法成功分離獲取活率高、純度高的原代肝細胞，且體外存活時間可達1周，與文獻[25]報道一致。體外培養48h后給予不同濃度的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)進行誘導，誘導24h后油紅O染色顯示肝細胞內有脂滴沉積，肝細胞內TG含量增加，且隨著FFA濃度升高而增加，成功構建了肝脂肪變性細胞模型。本方法操作簡單、時間短、成功率高，因此具有廣泛應用價值。原代肝...

在細胞實驗中，通過原代分離實驗得到的原代細胞，與永生化的細胞系相比，能夠忠實模擬體內生理狀態和功能，屬于“高階”的細胞模型，但是獲得高純度的原代細胞是一個非常艱巨的過程，科學合理的原代細胞提取和培養方法對于任何實驗室都是一筆不可多得的財富。上次小編整理了脂肪原代細胞提取的教程，得到了大家的一致好評。應廣大讀者要求，小編快馬加鞭“肝”出了小鼠原代肝細胞的提取“密鑰”，趕緊收好~肝臟是人體“”代謝，在包括葡萄糖、蛋白質和脂肪等多種物質代謝過程中發揮重要作用。肝臟參與多種生理病理過程，與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關。肝臟中的細胞主要分為實質細胞和非實質細胞兩類：實質細胞的占比達到整個肝...

原代肝細胞的分離與培養采用Seglen門靜脈兩步灌流法及其改良方法分離小鼠原代肝細胞，多次低速離心純化肝實質細胞，采用單層膠原培養法進行體外培養[15-18]。具體操作：雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射1%鈉(50mg/kg)麻醉后，浸泡于75%乙醇中消毒1～2min，在無菌條件下(超凈工作臺中)剪開腹部并暴露下腔靜脈與肝門靜脈。將靜脈留置針插入下腔靜脈后，迅速剪斷肝門靜脈。用無鈣無鎂的PBS緩沖液(含EDTA)灌流約50mL，在整個過程中，灌流液的灌流速度保持在7～8mL/min，溫度保持在37℃左右。待肝臟血液排出，肝臟變白后，用IV型膠原酶緩沖液()進行原位消化，灌注膠原酶時...

小鼠原代肝細胞的形態學觀察本實驗在Seglen兩步灌流法的基礎上改進，平均每只小鼠肝臟可獲得3×107～5×107個細胞。臺盼藍染色結果顯示，即時分離的原代肝細胞活率可達到85%～90%。即時分離的原代肝細胞胞體呈圓形或類圓形，多為單核或雙核，細胞間邊界清晰(圖1A)。接種后的肝細胞4h開始貼壁，24h大部分肝細胞貼壁，細胞形態多呈多角形或不規則形，細胞核大而圓，可見明顯的雙核或多核，細胞有向外延展趨勢，細胞間邊界不清(圖1B)。此外，按上述方法分離出的原代肝細胞在體外可存活1周左右，其中3～5d狀態比較好，第6天開始細胞凋亡增加 原代肝細胞的應用范圍十分廣闊。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！內...

注意事項1.取材要求新鮮，無菌，解剖小鼠時，注意不要損傷脾臟及其周圍的臟器，尤其是腸道等，防止污染脾臟。2.沖洗脾臟時要盡量洗凈血污，去除無用組織，并要防止組織干燥。3.碾磨后及時用清水沖洗篩網，防止組織、細胞阻塞網孔。4.計數前，注意吸盡平皿里的細胞，充分混勻，使細胞分散成單個細胞。5.實驗操作應在操作臺無菌區域內進行，勿在邊緣非無菌區域操作。6.金屬器械不能在火焰中燒的時間過長，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。7.另外膠塞過火焰時也不能時間長，以免燒焦產生有毒氣體，危害培養細胞。8.吸取過營養液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營養液能燒焦形成炭膜...

復蘇細胞接收后的處理：1.收到細胞后，請首先檢查培養瓶是否破損或漏液，培養液是否混濁，如有漏液及培養液混濁情況請立即拍照把圖片發給我們。2.75%酒精消毒瓶身后放培養箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認細胞狀態并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養基接種至新的培養瓶或培養皿中。3.建議收到當天不要消化處理，如果細胞長滿90%，可選擇傳代處理。4.如您收到細胞3天內沒有反饋相關問題，出現的細胞問題將不提供重發服務。上海中喬新舟 原代肝細胞值得信賴。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！廣東馬肝細胞原代肝細胞中喬新舟 肝前體樣細胞HepLPCs在基礎研究及臨床應用方...

實驗步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過，打一松松的假結，從假結下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結系緊。注意：穿帶線縫合針時不要扎破血管，打的結不要包進太多肉，否則結系不緊。靜脈留置針如成功扎進血管，里面的針時會出現回血現象。2通過留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準備給予灌流液1，同時剪開肝門靜脈，灌注時間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時間很重要，兩次灌注時嚴格保持針不要動，否則容易扎破血管）。翻開肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉移至細胞間內，放于400目篩網上，用4度預冷的1640無血清培養液反復吹打肝臟，...

目前，NAFLD動物模型和細胞模型仍然是研究NAFLD發病機制及藥物防治的重要手段。動物模型雖然能很好地模擬體內環境，但是存在造模周期長、個體差異大、實驗結果難以控制等問題，而細胞模型個體差異小、影響因素較少、實驗條件可控性強[8-11]。鑒于細胞模型能較好地克服動物模型的不利因素，因此，建立NAFLD體外細胞模型對于研究其發病機制，為進一步防治NAFLD具有重要的理論意義與普遍的實用價值。肝脂肪變性細胞模型是公認的研究NAFLD有效的細胞模型，目前多采用肝細胞株HepG2，通過給予不同比例與濃度的游離脂肪酸(freefattyacids,FFA)混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)，誘...

生物醫學實驗中常常會用到細胞系，因為它們可以快速生長和擴增提供實驗分析要用到的細胞。細胞系與新分離的或原代細胞的培養條件相類似，但也有一些基本不同的地方：（1）每個細胞系需要其特定的生長因子混合物。（2）與原代細胞相比，它們的生長需要更嚴密的監測，因為使它們無限生長的突變同時也會造成它們很快達到過度生長。因此，當細胞系生長到了幾乎覆蓋整個培養器皿底部，也就是90%的密度時，細胞需要重懸洗滌用于實驗或凍存以備將來使用，或者重新接種到新的培養器皿進一步擴增。細胞傳代或續代培養是將細胞從現有的培養物分開或分出來開始新的培養，并加入新鮮培養液來促進擴增的常用手段。盡管它的概念本身相對簡單，...

原代肝細胞培養越來越多地用作細胞和分子生物學的主要工具，為研究細胞的正常生理學和生物化學（例如，代謝研究、衰老、信號研究），藥物和有毒化合物的作用提供了出色的模型系統。細胞以及誘變和致作用。它也可用于藥物篩選以及大規模開發生物化合物（例如，疫苗、性蛋白質）。3D細胞培養：由于原代細胞是未轉化的且不會永生化，因此它們緊密模擬了模型，產生了更具生理意義的結果，可用于模擬3D組織。這些細胞可以作為模型系統來研究細胞生物學和生物化學，研究細胞與致病因子（如細菌、病毒）之間的相互作用，研究藥物的作用，研究衰老過程，研究細胞信號和代謝調節。在許多情況下，使用原代細胞可使研究人員避免使用動物模型...

細胞復蘇：①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入（T25瓶）②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存...