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15分鐘。圖4.擴展孵化（過夜）：SNAP i.d.8 2.0系統與標準免疫檢測一種。 SNAP id.o 2.0蛋白檢測b。標準系統Midi印跡免疫檢測將A431細胞裂解液和大鼠肝裂解液（12至3 ug）轉移至Immobilon9-P膜。兩種印跡均用在TBST中制備的0.5％NFDM封閉。這SNAP i.d.c 2.0 Midi印跡被阻斷20秒，標準印跡為分鎖了1個小時。兩種印跡均與相同稀釋度的MAP激酶1/2（ErK1 / 2），但是，對于HRP偶聯的二抗山羊抗兔（AP132P），將SNAP i.d.2.0印跡孵育10分鐘在TBST中洗滌3次后，將標準印跡孵育1小時。 圖5.擴展孵化（1小時）：，SNAP i.d.o 2.0系統1小時協議與SNAP i.d.9 2.0系統標準協議與標準免上海益啟生物的樣本制備儀詢價公司電話。松江區MerckSNAPi.d.2.0加速器Merck儀器銷售

x @ -FAgo過濾器（或等效過濾器）建議在保溫瓶和真空源之間使用，例如o保護真空源免受污染。●將真空瓶連接到真空源的真空管●前肢●封閉劑，例如脫脂/低脂干奶（0.5％以下），酪蛋白，牛血清白蛋白（BSA）或其他市售的封閉劑，例如blok * -CH緩沖液（請參閱表5）抗體（單克隆和/或多克隆），檢測試劑●洗滌緩沖液：Tris或磷酸鹽緩沖鹽溶液，pH 7.4，補充了Tween @ 20表面活性劑（TBST）或PBST）●轉移蛋白的印跡吸筆座尺寸比較大印跡尺寸（厘米）多印跡4.5 x8.4小型的7.5 x 8.48.5 x 13.5。 一般準則●如果蛋白質已經轉移到已經干燥的PVDF膜上，請用100％重新潤濕印跡甲醇，然后在組裝前用蒸餾水沖洗。如果蛋白質已轉移至硝酸纖維素膜干燥后，用蒸餾水重新虹口區Merck細胞分析儀Merck儀器代理價格上海益啟生物WB實驗加速器訂購方便。

2.0系統計算SNAP i.d.9 2.0系統所需的抗體濃度用于標準免疫檢測的濃度標準SNAP i.d.o 2.0免疫檢測免疫檢測多印跡迷你印跡Midi污點_Ab濃度1毫克/毫升1毫克/毫升1毫克/毫升1毫克/毫升所需抗體量_ 1微克0.25微克0.5微克1微克使用的抗體量30毫升2.5毫升5毫升10毫升比較終抗體稀釋1：30,0001：10,0001：10,0001：10,000使用的抗體庫存1微升0.25微升0.5微升1微升由于每種抗體都是只有一個的，并且檢測試劑的靈敏度各不相同，因此可能有必要進行調整抗體或抗原濃度，使用的檢測試劑的類型或靈敏度或印跡X射線曝光時間。請注意，本指南只作為開發比較終抗體的起點濃度以獲得所需的性能。表2.封閉，抗體和洗滌的建議體積SNAP i.d.o 2.0SNA

Westem HRP基材。高背景分鎖不足更改為不同的阻止解決方案。吸筆架不夠濕組裝前，先將吸墨紙架弄濕。阻塞解決方案可能有始終準備新鮮的0.5％脫脂/低脂干奶。降級的抗體濃度過高降低抗體的濃度。吸筆架朝上放置將印跡架朝上放在蛋白素框架中。在框架中洗滌不足進行至少4次每次30 mL的洗滌。添加清洗劑時，確保真空連續運行緩沖。整個系統電平不一致的信號確保系統在平坦的水平表面上。污點抗體不均勻補充封閉液和抗體稀釋劑遍及整個表面0.1％Tween 20表面活性劑。吸墨紙架使用小量移液器（例如5毫升），慢慢散布整個印跡中的抗體。應用至少2.5 mL（用于MultBlot），5 mL（用于Mini blot）或10 mL（用于Midi印跡）抗體。抗體體積低沒有抗體回收盤確保抗體中的孔，回收托盤algn益啟生物是默克細胞計數器的代理商。

盤，請在步驟5之后插入托盤。有關詳細信息，請參閱“抗體恢復”部分。 6.在整個表面上涂適量的一抗吸墨紙架的數量（對于MultiBlot為2.5毫升，對于迷你吸墨紙為5毫升，或10 mL用于Midi印跡）。7.在室溫下孵育10分鐘。解決方案將是吸收到污點固定器中，表面可能會變干。重要提示：請勿在吸塵器清潔后再使用真空吸塵器。孵育10分鐘。8.向下壓框架并施加真空。等待5-8秒，直到框架完全是空的。9.在連續運行真空的情況下，添加30 mL洗滌緩沖液（MultiBlot為15毫升）。重復洗滌步驟3次以上（總共4次洗滌）。當框架完全為空時，將TURN真空關閉。10.在印跡架的表面上涂適量的二抗（對于多印跡，為2.5 mL，5毫升用于迷你印跡，或10毫升用于Midi印跡）。在室溫下孵育10分鐘，然后上海益啟生物細胞跨膜電阻儀訂購方便。松江區MerckSNAPi.d.2.0加速器Merck儀器銷售

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