廣州細胞生物學膜片鉗應用

膜片鉗的數據如何處理：全細胞式膜片方式使細胞內與浴槽之間的漏流極少。電極本身阻抗(1~10mω)與細胞封接后的阻抗相比較低,這種低接觸阻抗使單管電壓鉗容易實現。電極管內與細胞之間彌散交換與平衡快,因而容易控制細胞內液的成分。細胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。如果有目的地將膜電位鉗制在某一程度,可做到選擇性抑制某些通道的活性而只記錄某種通道電流的總和,并可在同一細胞上觀察幾種不同通道的情況。通過改變內部介質,如改變電極液成分,或在電極液中加入所需藥物,通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡,該手段在全細胞記錄中廣泛應用。全自動膜片鉗系統技術指標：進行細胞吸附、封接和維持全細胞記錄模式。并兼容常規膜片鉗放大。廣州細胞生物學膜片鉗應用

膜片鉗技術操作方法：實驗前準備:打開總電源及穩壓電源，打開電腦、放大器，并開啟程序軟件，新建數據文檔并準備開始試驗;用P97微電極拉制儀拉制玻璃電極若干備用;檢查減震臺的減震效果，打開倒置顯微鏡，監視器和微操備用，取-血細胞將其中玻片取出放入小培美血中，置于倒置顯微鏡下，于低倍鏡下尋找狀態良好的細胞，并轉入高倍鏡下再次確認細胞狀態及貼壁情況等，確認細胞后，取電極一根充灌電極內液，彈出氣泡，然后套入銀絲并插入探頭中扭緊旋鈕，用注射器管道給電極一點點正壓，將電極入水，入水后，查案入水電阻，要在4-8M左右的電極才可以使用，通過調節微操，使電極不斷向下接近細胞，待電極尖銳端逐漸變清晰并且將要接近細胞時停止向下，然后把電極移到細胞上方調節放大器上的調零旋鈕以保證基線在零水平。福州細胞生物學實用膜片鉗原理膜片鉗使用的注意事項：安裝玻璃微電極時，電極應與銀絲平行，防止刮蹭銀絲電極。

膜片鉗電生理記錄技術：膜片鉗技術的基本原理：膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數量級，因此封接范圍內細胞膜光有少數離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位，測量單個離子通道開放產生的微小電流，這種通道的開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放的電流幅值分布、開放概率、開放壽命分布等功能參數，并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關系。將該部分細胞采用負壓吸破，可以形成比較常見的全細胞記錄模式，可以研究整個細胞的生理功能和離子通道電生理功能。

膜片鉗技術是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜上離子通道分子活動的技術。是用來研究單個離體的活細胞、組織切片或細胞膜片離子流的電生理實驗技術。這項技術在可興奮細胞如神經元、心肌細胞、肌纖維和胰腺細胞的研究中起至關重要的作用，也可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細菌離子通道。傳統膜片鉗技術對實驗人員的技術要求非常高，一般地，實驗人員需要經過嚴格的長期的訓練，才能準確且快速的操作。膜片鉗技術是用于紀錄全細胞或個別細胞膜上離子信道電生理特性的研究方法膜片鉗使用操作注意：拉制儀提前預熱（至少30min）。且用完及時關閉。

膜片鉗技術之全細胞式與細胞吸附式的區別：全細胞式記錄這個名字乍聽上去好像和細胞吸附式沒啥兩樣，無非就是把電極戳在細胞上然后記錄它的電活動。但事實是，這兩者存在天壤之別。首先的一大區別體現在外部構型上：在cell-attached的記錄中，我們不需要用電極戳破細胞膜，只需將其懟在細胞膜上即可；但在whole-cell的記錄中，我們不只要將電極懟進細胞膜內，而且還不能懟得過深或過淺，否則你就無法記錄到有用的電信號。概括一下就是，要形成全細胞記錄必須打破細胞膜，但由于這個操作比較厲害，所以要破膜時請相信玄學。其次，第二大區別在電阻補償上：在cell-attached的記錄中，由于我們無需打通細胞內外膜，因此細胞膜上的各種離子通道或蛋白質就沒有串聯在電路當中，但是在whole-cell中，串聯電阻（Rs）就存在了，因此軟件輸出的命令電壓也就不等于細胞的跨膜電位，故我們需要對其進行補償。這些注意事項包括：電極電容及細胞膜電容補償問題，漏電流問題，液接電位的校正問題，空間鉗位問題，細胞內容物被電擊內液稀釋問題，電極內液的成分問題等。膜片鉗的應用：對藥物作用機制的研究。徐州神經生物學膜片鉗全細胞記錄服務

膜片鉗的應用：對單細胞形態與功能關系的研究。廣州細胞生物學膜片鉗應用

全自動膜片鉗系統技術指標：1）操作簡單，全過程可自動化。2）實驗迅速，通量高。一般每天可達到50個實驗數據左右。3）藥液交換迅速。細胞內、外液的交換是在平面芯片上進行，所以藥液交換非常迅速，作用時間快，外灌流時間常數：~200ms內灌流時間常數：~2s。4）藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。5）信號準確，噪聲少。使用了先進的微型“法拉第板”替代傳統的“法拉第籠”，極大的減少了噪聲源，記錄數據的電噪音很低(小于300fA/500MΩ)。6）擴展功能多。配套擴展設備豐富，如內灌流系統、溫度控制系統、脂質體制備器等等。7）軟件強大。軟件的功能全部，可按照操作者設定的參數方案自動執行實驗，進行細胞吸附、封接和維持全細胞記錄模式；并兼容常規膜片鉗放大。廣州細胞生物學膜片鉗應用

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