溫州細胞生物學膜片鉗實驗網站

膜片鉗使用操作流程及注意事項：1.實驗結束后必須關閉實驗室的水電，檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求，完成值日等相關工作（值日生按照實驗室統一所發值日生要求履職）。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉制儀提前預熱（至少30min）。且用完及時關閉。電熱加熱線溫度很高，在使用時注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改，不得在本機電腦下載別的軟件，拷數據時需用實驗室配置的U盤。5.禁止私拉電線，如有實驗要求可與老師及時溝通。膜片鉗系統有如下應用局限性：大部分的紀錄對象為化細胞，而對于需要貼壁生長的大多數正常細胞。溫州細胞生物學膜片鉗實驗網站

膜片鉗技術在通道研究中的重要作用：應用膜片鉗技術可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程、區分離子通道的離子選擇性、同時可發現新的離子通道及亞型，并能在記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎上進一步計算出細胞膜上的通道數和開放概率，還可以用以研究某些胞內或胞外物質對離子通道開閉及通道電流的影響等。同時用于研究細胞信號的跨膜轉導和細胞分泌機制。結合分子克隆和定點突變技術，膜片鉗技術可用于離子通道分子結構與生物學功能關系的研究。溫州細胞生物學膜片鉗實驗網站膜片鉗技術是電生理記錄的常用手段，目前在科學研究中使用普遍。

膜片鉗技術在通道研究中的重要作用：利用膜片鉗技術還可以用于藥物在其靶受體上作用位點的分析。如神經元煙堿受體為配體門控性離子通道，膜片鉗全細胞記錄技術通過記錄煙堿誘發電流，可直觀地反映出神經元煙堿受體活動的全過程，包括受體與其激動劑和拮抗劑的親和力，離子通道開放、關閉的動力學特征及受體的失敏等活動。使用膜片鉗全細胞記錄技術觀察拮抗劑對煙堿受體激動劑量效曲線的影響，來確定其作用的動力學特征。然后根據分析拮抗劑對受體失敏的影響，拮抗劑的作用是否有電壓依賴性、使用依賴性等特點，可從功能上區分拮抗劑在煙堿受體上的不同作用位點，即判斷拮抗劑是作用在受體的激動劑識別位點，離子通道抑或是其它的變構位點上。

膜片鉗實驗常見問題及解決方法：膜片鉗實驗難度大、技術要求高，要掌握有關技術和方法雖不是很困難的事，但要從一大批的實驗數據中，經過處理和分析，得出有意義、有價值的結果和結論，就顯得不那么容易，有許多需要注意和考慮的問題，包括減少噪音，避免電極前端的污染，提高封接成功率，具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式，為記錄特定離子電流如何選擇電極內、外液，如何選擇阻斷劑、激動劑，如何進行正確的數據采集等許多更為復雜的問題，還需在科研實踐中不斷地探索和解決。膜片鉗技術本質上也屬于電壓鉗范疇。

膜片鉗只適用于藥物的初篩和二次篩選，且對樣本有很高的選擇性，而傳統的膜片鉗技術可適用于各種樣本，應用范圍廣，能夠分析檢測所有的離子通道類型，同時能夠分析離子通道的動力學特征。因此目前，傳統膜片鉗技術仍然是不可替代的。在進行膜片鉗實驗時，玻璃電極給負壓并吸住細胞，形成高阻封接，破膜，給藥，記錄數據的過程，都需要細胞保持比較好的活性狀態，才能更加高效的獲得有效數據。因此細胞的穩定性就成了評估樣品好壞的關鍵。膜片鉗芯片技術是繼細胞芯片之后的又一種嶄新的分析細胞電生理參數的芯片技術。蕪湖醫學膜片鉗全細胞記錄原理

膜片鉗實驗操作的過程中，總會遇到各種各樣的問題，對實驗人員造成很多困擾。溫州細胞生物學膜片鉗實驗網站

膜片鉗電生理記錄技術：膜片鉗技術的基本原理：膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數量級，因此封接范圍內細胞膜光有少數離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位，測量單個離子通道開放產生的微小電流，這種通道的開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放的電流幅值分布、開放概率、開放壽命分布等功能參數，并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關系。將該部分細胞采用負壓吸破，可以形成比較常見的全細胞記錄模式，可以研究整個細胞的生理功能和離子通道電生理功能。溫州細胞生物學膜片鉗實驗網站