免疫沉淀(IP)的原理及應用：
免過疫沉淀技術是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎，用于研究蛋白質相互作用、蛋白質與遺傳物質之間相互作用的經(jīng)典方法，可有效確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用，也是用于抗原檢測和純化的方法之一。CO-IP、CHIP、RIP等技術由IP演化而來。
原理:IP利用特定抗體與目標蛋白結合，將其從混合物中沉淀出來，實現(xiàn)蛋白的純化與鑒定。
作用:富集和檢測某單一蛋白。
應用:主要用于蛋白質-蛋白質相互作用研究，幫助分析蛋白質復合物的組成。IP側重于研究蛋白質復合物，適用于探究特定蛋白質的結合伙伴以及信號通路的研究。 Co-IP實驗檢測：制備樣品、裂解細胞、免疫沉淀、WB檢測！蛋白蛋白互作檢測CoIP WB
免疫共沉淀實驗的注意事項主要包括以下幾點：樣品的準備：樣品的準備是非常關鍵的步驟。要保證細胞處于適當?shù)纳L狀態(tài)下，避免細胞過度生長或死亡。同時，要確保細胞表達所需的蛋白質，可以通過轉染等方法引入外源基因。抗體的選擇：抗體的選擇對于免疫共沉淀實驗至關重要。要確保使用的抗體特異性高，能夠識別目標蛋白質，并且與其它蛋白質的交叉反應小。此外，抗體的來源和親和性也需要考慮，以確保實驗結果的可靠性和重復性。細胞裂解條件：細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內存在的所有蛋白質-蛋白質相互作用。同時，裂解液中要加入各種酶抑制劑，以防止蛋白質降解。共沉淀的驗證：在免疫共沉淀實驗中，需要確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白。此外，要驗證抗體的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀。另外，需要確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細胞中，而不是由于細胞的溶解才發(fā)生的，這需要進行蛋白質的定位來確定。實驗的重復性：由于免疫共沉淀實驗的靈敏度和特異性可能受到多種因素的影響，因此建議進行多次重復實驗，以驗證結果的可靠性。蛋白蛋白互作檢測CoIP WBCo-IP和ChIP基本原理方面的區(qū)別有什么。
Co-IP技術，即免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation），是一種用于研究蛋白質相互作用的經(jīng)典方法。該技術基于抗原-抗體特異性結合的原理，通過特異性抗體將目標蛋白及其相互作用伙伴一同沉淀下來，從而實現(xiàn)對蛋白質復合物的富集和分離。Co-IP技術具有操作簡便、特異性高、靈敏度強等優(yōu)點，廣泛應用于生物學和醫(yī)學研究領域，尤其在探索信號轉導、疾病發(fā)生機制等方面具有重要意義。在實驗中，通常選擇特異性強的抗體與磁珠或瓊脂糖等固相載體偶聯(lián)，然后將細胞或組織裂解液與抗體-載體復合物混合，通過洗滌和洗脫等步驟，獲得與目標蛋白相互作用的蛋白質復合物。這些復合物可進一步通過質譜分析等方法進行鑒定和驗證，為研究蛋白質相互作用提供有力支持。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）實驗是一種生物化學和分子生物學技術，用于檢測和鑒定在細胞內發(fā)生蛋白質-蛋白質相互作用的復合物。該實驗依賴于抗原-抗體特異性結合的原理，通過特定抗體來捕獲并富集與目標蛋白質相互作用的蛋白質復合物。在免疫共沉淀實驗中，首先需要將細胞或組織在適當?shù)牧呀鈼l件下破碎，釋放出其中的蛋白質。這些蛋白質中，許多會通過非共價鍵（如氫鍵、疏水作用、離子鍵等）或共價鍵（在某些情況下）相互作用形成復合物。然后，向裂解物中加入針對目標蛋白質的特異性抗體，這些抗體會與目標蛋白質結合形成抗原-抗體復合物。接下來，利用與抗體結合的親和劑（如ProteinA、ProteinG或特定種類的瓊脂糖珠），通過免疫親和反應將抗原-抗體復合物捕獲并固定在固相支持物上。在經(jīng)過一系列洗滌步驟后，可以去除與固相支持物非特異性結合的蛋白質，從而將目標蛋白質及其相互作用的蛋白質復合物富集在固相支持物上。通過適當?shù)南疵摲椒▽⒏患牡鞍踪|復合物從固相支持物上洗脫下來，并進行后續(xù)的分析。蛋白質與蛋白質分子互作實驗方法介紹。
CoIP-Mass是一種檢測細胞內蛋白互作組的套餐技術。該技術通過聯(lián)合免疫共沉淀技術和質譜檢測技術，對目的蛋白在特定細胞/組織內的互作蛋白，進行系統(tǒng)的檢測和分析。該技術適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作組數(shù)據(jù)檢測，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作組差異研究。因此，該技術是研究細胞內蛋白互作調控網(wǎng)絡的常規(guī)前置技術。CoIP-WB是一種檢測細胞內蛋白互作的驗證技術。該技術通過聯(lián)合免疫共沉淀技術和WesternBlot蛋白檢測技術，對目的蛋白在特定細胞/組織內的互作關系進行探究，明確蛋白直接的相互作用關系。該技術適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作檢測驗證，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作差異研究。因此，該技術是研究細胞內蛋白互作調控網(wǎng)絡的常規(guī)檢測技術。Co-IP研究蛋白間互作，ChIP研究蛋白與DNA互作，實驗原理各具特色！蛋白蛋白互作檢測CoIP WB
IP-WB（免疫沉淀-Western Blot）技術應用場景。蛋白蛋白互作檢測CoIP WB
IP-Mass（免疫沉淀-質譜）技術是一種結合了免疫沉淀和質譜分析的方法，用于研究蛋白質相互作用和差異蛋白質分析。該技術首先利用特異性抗體與目標蛋白結合，形成抗原-抗體復合物。然后，這些復合物被吸附到固相載體上，經(jīng)過洗滌步驟去除非特異性結合的雜質。接下來，蛋白質復合物從載體上洗脫下來，并通過質譜分析進行鑒定和檢測。質譜分析是IP-Mass技術的重要部分，它可以提供關于蛋白質的質量、荷質比和豐度等信息。通過對質譜數(shù)據(jù)的分析，可以鑒定出與目標蛋白相互作用的蛋白質，以及蛋白質之間的相互作用強度和特異性。IP-Mass技術在生物學和醫(yī)學研究中具有廣泛的應用價值。它不僅可以用于研究蛋白質相互作用，還可以用于差異蛋白質分析，例如在疾病發(fā)生和發(fā)展過程中蛋白質表達譜的變化。蛋白蛋白互作檢測CoIP WB