為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力，用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應條件在一小時內有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當加入RapiGest?并在變性條件下進行反應時，西妥昔單抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分鐘內完全去除，PNGase F固定化15分鐘內完全去除。在變性反應條件下，PNGase F 在 30 分鐘內成功將更復雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應條件，將常用的糖蛋白標準品RNase B在10或15分鐘內完全去糖基化，分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。使用OpeRATOR圖譜O-聚糖位點對依那西普進行LC-MS分析。湖北N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶
OglyZOR 來源于口腔鏈球菌，在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽，分子量為 227 kDa。SialEXO來源于Akkermansia muciniphila，在大腸桿菌中表達。SialEXO酶含有His標簽，組分的分子量分別為42 kDa和66 kDa。1.高效O-糖苷酶；2. 降低樣品異質性，揭示潛在的關鍵蛋白質修飾；3. 完全、穩健地去除 O-糖he心 1 二糖。Genovis的凍干酶，用于水解糖蛋白上的he心1 O-聚糖。OglyZOR 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 個單位的小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。它需要去除唾液酸助劑才能發揮作用，因此與2000單位的SialEXO凍干一起提供。江西用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。包括2000個單位SialEXO凍干酶。
C1抑制劑的去糖基化：在O-糖基化生物制藥的生產過程中，由于he心GalNAc殘基的加工不完全，可能會出現Tn抗原。這表現為具有 203 Da HexNAc 單位差異的重復質量位移。為了確認 Tn 抗原的存在，可以應用以下工作流程，此處在重度（26 個位點）O-糖基化 C1 抑制劑上演示。首先，使用PNGaseF修剪糖蛋白的N-糖，使用Genovis的OglyZOR和SialEXO修剪he心1 O-糖。依那西普的磷性能測試?：依那西普是另一種具有挑戰性的生物制藥模型分子，攜帶 13 個 O-聚糖位點，其中平均 9 至 10 個位點被占用。
使用Genovis的GalNAcEXO 對 O-糖基化生物制藥進行 Tn 抗原表征：未成熟的截短O-聚糖導致了復雜生物制藥的異質性，使其分析更具挑戰性。 O-聚糖的he心由n-α-GalNAc殘基組成，通過糖苷鍵與絲氨酸或蘇氨酸連接，稱為Tn抗原。 現在，使用GalNAcEXO可以采用合適的酶策略來去除這些GalNAc并簡化生物制藥的表征。在質譜圖中可以觀察到重復峰的模式。其次，在與GalNAcEXO酶孵育后，剩余的GalNAc殘基被完全去除，留下一個峰。因此，該工作流程確認了 O-糖基化生物制藥上存在 Tn 抗原，并允許定量he心 GalNAc 水平。這種工作流程的另一個好處是減少了剩余的異質性，這有助于確認蛋白質的完整質量，并揭示截短的片段。SialEXO在天然條件下水解糖蛋白，在pH值范圍為6.5至9時顯示出活性。
Genovis的ImpaRATOR? 和 OpeRATOR? - 兩種協同的作用：O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化區域O-聚糖位點的覆蓋率（圖3）。使用OpeRATOR鑒定對應于所有13個O-聚糖位點的肽，而使用ImpaRATOR只能明確鑒定10個位點。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR （1） 具有更具選擇性的氨基酸序列偏好，此處由 S186 和 T245 位點缺乏消化來表明。此外，ImpaRATOR 在兩個相鄰的 O-糖基化氨基酸之間顯示出有限的裂解，如 S213 位點酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位點酶解肽的低強度所證明的那樣。在OpeRATOR酶解樣品（T184-S199和T200-H204;圖2b和d），而在ImpaRATOR消化的樣品中，具有漏裂的相應肽（S184-H204）的強度更高。 雖然OpeRATOR顯示出更高的O-聚糖位點覆蓋率，但使用ImpaRATOR進行消化可以表征O-聚糖結構，包括唾液酸化物種。例如，條形圖插入顯示了兩種糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖種類。這應該與使用OpeRATOR的消化進行比較，在OpeRATOR中，必須去除唾液酸才能產生酶活性，這意味著有關唾液酸化的信息丟失。總而言之，ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有關聚糖組成和 O-聚糖位點的完整信息。在天然條件下用固定化PNGase F去除zhiliao性抗體；北京凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究
GalNAcEXO凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在2000單位的小瓶中，用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc殘基。湖北N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶
genvois的OpeRATOR 是一種內切蛋白酶，可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基化蛋白的肽鍵的水解。內切蛋白酶具有高特異性，可消化絲氨酸或蘇氨酸殘基的O-聚糖N端的蛋白質。 OpeRATOR 活性需要粘蛋白型的 O-聚糖，并且該酶不會用 N-連接聚糖消化糖蛋白。該酶對具有亞洲化he心1 O-聚糖的位點z活躍。它還消化唾液酸化的he心 1 和he心 3，但程度要低得多。為了獲得z佳性能，需要去除唾液酸，因此，SialEXO凍干（唾液酸酶混合物）包含在購買中。 湖北N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶