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在96孔板上用光片熒光顯微鏡對多細胞球體中葡萄糖生物傳感器的
光片熒光顯微鏡先前已經在市售的倒置熒光顯顯微鏡架上使用斜面顯微鏡(OPM)的方法進行了演示。在本文中，OPM被調整為允許使用階段掃描OPM方法(SSOPM)在市售的96孔玻璃底板中的3-D生物培養物的延時3-D成像。延時3-D成像的多細胞球體表達葡萄糖Frster共振能量轉移(FRET)生物傳感器在16個視場，圖像采集的時間間隔為10分鐘。作為原理驗證，SSOPM 系統還用于獲得劑量響應曲線，在96孔板的42個孔中，培養基中的葡萄糖濃度變化，整個獲取時間為9分鐘。3-D圖像數據使FRET比作為從球體表面的距離的函數來測量。總的來說，結果證明了OPM系統在多孔板格式下測量多細胞球體中FRET比隨時間變化的三維時空變化的能力。
兩個SCMOS相機（德國Excelitas PCO 公司pco.edge高速相機）均配置為在全局重置采集模式下采集1280x1000像素。曝光時間由2 ms激光照射周期確定。為了獲得一個視場，x-y平臺被配置為沿y方向掃描500微米。在3個信道(供體、感光發射、直接激發受體)中的每個信道中產生250個圖像的疊加。總體而言，在采集過程中，相機1以100 Hz觸發，相機2以50Hz觸發。每個3-D卷花了5秒來獲取和產生2 GB的原始圖像數據。
圖像采集由一臺便攜式高速儲存系統控制，這臺PC具有96G的RAM，配置2x512MBSSD硬盤和配置在RAID6中的8x2TB硬盤。
用457 nm激光激勵時，每個攝像機的平均背景水平通過取空白視場中的平均像素值來確定我們稱之為攝像機1的IDA背景和攝像機2的IpD背景。
倒置顯微鏡框架配有溫度控制外殼，溫度設定為37℃。顯微鏡目標物01裝有供連續供應水浸液的套圈，加熱套圈設置為保持37°C(0280.36，Pecon)。
證明了在市售玻璃底96孔板中表達FRET生物傳感器的MC中探測3D時空動態的潛我們使用表達細胞間葡萄糖雙功能的細胞，使用細胞測量法進力。行測量。亞細胞分辨率成像獲得成像深度~100um的球體。我們以10分鐘的間隔對16口井成像4小時，生成530GB的原始圖像數據(板1)。在制備和成像于不同日期的板上重復該實驗，說明了該方法的可重復性(板2)。我們展示了SSOPM 在96個孔板中進行葡萄糖劑量-反應三維測需要9分鐘的圖像采集(板3)。量的潛力，使用42個孔板。
我們的 3D 成像方法顯示，在葡萄糖存在下培養的球體中心的 FRET比值增加。這可能是由于球體內葡萄糖或 pH的梯度，需要進一步實驗和/或使用改進的牛物傳感器來進一步調查。此外，我們使用 SSOPM 記錄了葡萄糖缺乏的 HEK293T球體暴露于葡萄糖時的時空 FRET比值響應。使用獲得的 3D 圖像數據，我們計算出 FRET比值作為圖像點與球體表面**小距離隨時間的變化函數。在未來，SSOPM可能會發現更多應用于研究各種各樣的FRET生物傳感器。
德國Excelitas PCO公司pco.egde高速相機，具備高分辨率、高感光度、雙幀PIV瞬間成像的優點，將高速實驗過程完美記錄，為實驗提供強而有力的圖像數據支持。
廣州市元奧儀器有限公司作為德國Excelitas PCO公司高速攝像機在中國的代理商，為客戶提供各種高速成像系統解決方案，如對相關產品感到興趣，歡迎隨時聯系交流。
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