科研等級血小板裂解液怎么樣

來源: 發布時間:2021-10-17

本發明涉及細胞生物學領域,特別涉及一種血小板裂解液的制備方法及其應用,用于替代動物來源的血清,為間充質干細胞擴增和生產提供的營養。該制備方法包括:將血小板在20~24℃振蕩保存1~5d,采用反復凍融法和超聲法進行處理,離心,收集上清液,去除纖維蛋白,獲得血小板裂解液.本發明提供的血小板裂解液的制備方法可明顯提高血小板裂解液中細胞因子含量,且可進行細胞因子的定量平衡,有利于減少產品批間的差異,可達到穩定的促進人源性細胞生長的作用。血小板裂解液如何復蘇?科研等級血小板裂解液怎么樣

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血小板裂解液解凍后請立即進行培養基的配制,配置好的培養基在2-8°C環境下保存并盡快使用,不建議超過21天。如解凍后的原瓶無法全部使用,建議按需分裝成合適的小瓶中進行-20°C保存一旦產品瓶或袋經過初始解凍過程,建議盡快將產品置于基礎培養基中。盡管對于儲存在2-8°C的準備好的含有hPL的培養基,Sexton的內部測試有效期為21天,但建議客戶進行內部驗證研究,以確定其基于血小板裂解液的完整培養基的有效期。使用的基礎培養基和添加劑等變量可能會縮短或延長完整培養基產品的有效期。GMP等級血小板裂解液代理商血小板裂解液中的沉淀在使用前需要過濾掉么?

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胎牛血清(FBS)對動物和人的間充質干細胞(MSCs)的大規模擴增以及細胞zhi liao的快速發展起著重要作用,但它也帶來了一些監管和物種交叉污染等問題,并阻礙了大多數產品往臨床的過渡。無血清培養基(SFM)補充幾種生長因子也被提出作為胎牛血清綜合征的替代方法,然而通常SFM需要根據細胞類型、來源和種類開發定制,費時費力。此外,SFM的高成本使其無法用于大規模細胞擴增。因此,迫切需要找到一種基于人源的培養基補充劑。人源血小板裂解液(HPL)來自人血小板,含有類似的生長因子和細胞因子,且與在胎牛血清中發現的水平相當。目前已經證明HPL支持各種細胞的生長。本研究的重點是評估不需要使用肝素(PL-NH)的HPL和需要肝素(PL-H)的標準HPL在不同濃度培養基下支持來自不同組織的新生兒和成人間充質干細胞的生長和增殖的能力。

建立商業化細胞生產的比較好培養基體系需要PD科學家考慮各種各樣的變量,性能,來源、質量、可用性、法規等。作為歷史上占主導地位的細胞生長補充劑和組織培養,胎牛血清(FBS),有著眾所周知的作用限制(動物源性、價格波動、道德)具有挑戰性等),導致使用人源性補充劑,如血小板裂解物(hPL)和AB人血清(ABS)。人源資源的使用衍生材料并非沒有風險和制造商必須使用適當的策略來管理和減輕這些風險。安全是首要原則。應使用符合倫理的原材料來源生產的產品。血小板裂解液真的能替代胎牛血清?

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本研究中使用的HPL是Stemulate公司兩款人源血小板裂解液(NH和H)是在工業規模(很小批量為20L)生產的,具備高度的批間一致性。將脂肪來源的間充質干細胞在DME/F-12中添加10%Stemulate-NH或10%FBS進行傳代培養11代。在DME/F-12中分別添加5、7.5或10%Stemulate-NH,并與10%胎牛血清進行比較。羊膜來源間充質干細胞也在2.5或5%Stemulate中培養,與10%胎牛血清相比。牙髓來源的骨髓間充質干細胞在DME/F-12中添加不同濃度的Stemulate-NH或Stemulate-H,并與添加10%FBS的培養基進行比較。在所有實驗中,每天都監測細胞,每次傳代結束時,收獲細胞,并使用臺盼藍和一個自動細胞計數器計數然后繼續傳代。血小板裂解液不含異源動物成分,是人類間充質干細胞培養的理想血清替代物。臨床用血小板裂解液作用原理

血小板裂解液里面的沉淀對細胞有影響嗎?科研等級血小板裂解液怎么樣

我們的PR過程旨在限制輻照對血小板裂解液性能的影響,并經過驗證以提供有效性的客觀證據。許多常見的去除和滅活方法,如巴氏殺菌,納濾和溶劑/洗滌劑工藝去除或破壞產品功效所需的生長因子和蛋白質,或留下可能影響產品質量的殘留物。電子束和γ射線輻照的作用機理與電離輻射對核酸的損傷機理相同,通常用于醫療和食品的輻照。

我們的研究表明,伽馬射線照射可以有效的病毒滅活,但導致大量生長因子、不良產品的損失特征(渾濁)和總體減少細胞擴增的水平。其他步驟,如添加蛋白質穩定劑通常用于對抗但這些效應,但需要額外的表征并會引入有關風險的新問題。 科研等級血小板裂解液怎么樣

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