磁珠法在基因克隆中的應用主要體現在以下幾個方面:1.**質粒DNA的提取**:磁珠法可以用于從細菌細胞中提取質粒DNA,這對于質粒的克隆和表達至關重要。通過磁珠法提取的質粒DNA純度高,適合用于后續的酶切、連接、轉化等分子克隆步驟。2.**基因組DNA的提取**:磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA,這對于基因組的克隆和分析非常重要。提取的基因組DNA可以用于PCR擴增、基因表達分析、基因突變檢測等。3.**mRNA的提取和純化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和純化mRNA,這對于cDNA的合成和基因表達分析非常關鍵。磁珠法提取的mRNA純度高,可以用于后續的cDNA合成和RT-PCR等實驗。4.**PCR產物的純化**:磁珠法可以用于純化PCR產物,去除反應中的酶、dNTPs和其他雜質,為克隆PCR產物提供高純度的DNA模板。5.**DNA片段的篩選和回收**:在基因克隆過程中,可能需要從多個DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收,提高克隆效率。6.**自動化和高通量操作**:磁珠法易于與自動化設備結合,適合高通量樣本處理,這對于大規模基因克隆項目尤為重要。自動化操作減少了人為操作誤差,提高了實驗的重復性和可靠性。牛痘DNA拓撲異構酶I具有特異性識別能力,能夠識別雙鏈DNA中的5'-(C/T)CCTT-3'序列。Recombinant Cynomolgus BSPII Protein,His Tag
牛痘DNA拓撲異構酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)是一種來源于牛痘病毒的I型真核拓撲異構酶,具有以下功能和應用:1.**功能**:-牛痘DNA拓撲異構酶I可以催化雙鏈DNA分子中單鏈DNA特定序列位置的磷酸二酯鍵的斷開和連接。-具有解超螺旋的酶(DNARelaxingEnzyme)活性,能夠通過快速的酶切和連接使雙鏈共價閉合環狀的正或負超螺旋DNA發生解超螺旋,形成含有較少的正或負超螺旋的雙鏈環狀DNA分子。-能夠使雙鏈DNA形成繩結(knotting)或解開繩結(unknotting),聯結互補的單鏈環狀DNA成為雙鏈環狀DNA。2.**應用**:-作為一種DNA重組連接的新型工具酶,用于DNA載體和重組片段的連接、缺刻修復、接頭連接等。-適用于TOPO克隆載體的制備、NGS建庫中的接頭連接等。-在TOPO克隆技術中,DNA拓撲異構酶I同時具有限制酶和連接酶特性,其生物學功能是在復制期間切割并重新連接DNA。3.**使用方法**:-用于DNA快速酶切流程,包括配制體系反應液、輕柔混勻、37℃孵育15分鐘等步驟。4.**儲存條件**:-建議在-25~-15℃保存,有效期為3年。5.**注意事項**:-避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作,以防止酶失活。牛痘DNA拓撲異構酶I因其獨特的功能,在分子生物學研究和基因工程中扮演著重要的角色。Recombinant Human DSG3 Protein,His TagPfu DNA Polymerase的熱穩定性和保真性使其在優化PCR條件時更為靈活,比如在GC含量較高的模板中。
5'-3'外切核酸酶活性是指DNA聚合酶能夠從DNA鏈的5'端向3'端切除核苷酸的能力。這種活性通常用于修復受損的DNA或去除錯誤配對的核苷酸。具體來說,5'-3'外切核酸酶活性可以在DNA合成過程中切除前方的核苷酸,幫助錯誤或不需要的序列,從而確保DNA的正確復制和修復。在DNA聚合酶中,5'-3'外切核酸酶活性與聚合酶活性相輔相成。聚合酶在合成新鏈時,5'-3'外切酶活性可以在發現錯誤時進行修正,確保合成的DNA鏈的準確性。例如,E.coliDNA聚合酶I具有這種外切酶活性,可以在合成過程中去除錯誤的核苷酸,從而提高DNA的保真度。需要注意的是,BstDNAPolymerase,LargeFragment不具有5'-3'外切核酸酶活性,這使得它在某些應用中更為穩定,特別是在等溫擴增反應中,如LAMP(環介導等溫擴增)和RCA(滾環擴增)等。
核酸內切酶VIII(EndonucleaseVIII)是一種來自大腸桿菌的DNA損傷修復酶,具有以下特點:1.**雙功能活性**:核酸內切酶VIII具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。2.**釋放受損嘧啶堿基**:N-糖基化酶活性可以釋放雙鏈DNA上受損的嘧啶堿基,如胸腺嘧啶乙二醇和尿嘧啶乙二醇,生成一個脫嘌呤(apurinic,AP)位點。3.**切割AP位點**:AP裂解酶活性可以切割AP位點的3'和5'端,產生一個具有3'和5'磷酸的堿基缺口(Gap)。4.**識別并切除受損堿基**:核酸內切酶VIII可以識別并切除多種受損堿基,包括尿素、5,6-二羥基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羥基-5-甲內酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羥基-5,6-二氫胸腺嘧啶和甲基羥丙二酰脲。5.**與EndonucleaseIII的區別**:雖然核酸內切酶VIII與核酸內切酶III相似,但核酸內切酶VIII具有β和δ裂解酶活性,而核酸內切酶III具有β裂解酶活性。6.**應用領域**:核酸內切酶VIII可以應用于單細胞凝膠電泳、NGS建庫中DNA損傷修復、酶法合成DNA中釋放DNA鏈、堿洗脫,搭配尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)進行含U片段的克隆等。
BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads是一種利用磁珠技術從血液中提取基因組DNA的試劑盒。以下是一些關鍵特點和應用:1.**高效提取**:該試劑盒采用特殊的磁珠和緩沖體系,能夠快速且高效地從100μl至1ml的血液中分離和純化高質量的基因組DNA。2.**磁珠特性**:獨特的磁珠具有很強的核酸親和力,在特定條件下可以快速分離和純化核酸。這些磁珠對磁場響應迅速,使得提取過程既安全又便捷。3.**提取過程**:血液樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,釋放出的基因組DNA與磁珠特異性結合。通過磁分離架的作用,磁珠與溶液快速分離,經過洗滌去除雜質,用洗脫液將基因組DNA從磁珠上洗脫下來。4.**應用廣**:提取的基因組DNA可用于多種分子生物學實驗,如PCR擴增、酶切、基因分型、Southern雜交、高通量測序、基因組DNA文庫構建等。5.**操作簡便**:整個抽提過程大約需要50分鐘,操作簡便,無需使用有毒有害的有機試劑,如酚或氯仿,提高了實驗的安全性。6.**高純度和高回收率**:提取的DNA純度高,A260/A280通常在1.7-1.9之間,表明蛋白和RNA的污染低?;厥章释ǔ3^80%。
在泛素化過程中,首先泛素激起酶E1(Uba1或其他)在ATP的存在下激起泛素分子,形成E1-泛素硫酯中間體。Recombinant Cynomolgus BSPII Protein,His Tag
磁珠法PCR/DNA純化試劑盒與傳統純化方法相比具有以下優勢:1.**操作簡便快捷**:磁珠法純化過程通??梢栽?5分鐘內完成,包括結合、洗滌和洗脫步驟,無需復雜的離心或抽濾操作。2.**高純度和高回收率**:磁珠法純化得到的DNA純度高,通常回收率可以達到90%以上,適用于100bp以上的DNA片段的純化,對達到10kb片段DNA的純化也能保持較好的效果。3.**適用性廣**:磁珠法PCR/DNA純化試劑盒適用于多種樣本類型,包括PCR產物、酶切產物、連接產物等,也適用于低濃度樣品的濃縮。4.**安全性高**:操作過程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環保和安全。5.**靈活性**:可以根據實際狀況靈活調節磁珠用量,適應不同體積和濃度的樣品處理。6.**自動化和高通量**:磁珠法純化試劑盒適合手工操作,也可用于自動化工作站或核酸自動提取儀,實現高通量操作。7.**溫和的條件**:磁珠法條件溫和,對DNA的損傷小,適合后續的多種分子生物學實驗,如酶切、連接、轉化細菌、測序、PCR、雜交等。8.DNA片段適應性**:適用于從150bp到50kb的DNA片段的純化,能夠滿足大多數分子生物學實驗的需求。