Recombinant Human IL-28B Protein

EndoS，即糖苷內切酶S（Endo-S），是一種具有高度特異性的酶，它在生物化學研究中有著重要應用，尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯物（ADCs）的研究中。以下是EndoS的一些關鍵特點：1.**特異性**：EndoS能夠特異性地識別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結構，即在N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間的連接處進行切割。2.**應用**：在制備糖鏈定點ADC化合物中，EndoS被用于將小分子細胞毒藥物“一步”定點連接到抗體糖基化位點，提供了一種重要的技術方法。3.**兼容性**：EndoS對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性，可以接受不同生物正交基團、熒光基團等衍生物作為底物，實現抗體糖基化修飾。4.**活性**：EndoS的活性對多肽沒有嚴格的要求，可以接受蛋白質、肽、天門冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是，對于具有三、四個支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖，EndoS沒有活性。5.**產品形式**：EndoS通常以帶有His標簽的形式存在，便于從反應中去除，這在實驗操作中提供了便利。6.**研究進展**：EndoS在去糖基化方法研究中是一個重要的工具，特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結構和功能時。

酵母重組表達的N-糖苷酶F（PNGaseF）是一種酰胺水解酶，具有以下特點：1.**高效性**：PNGaseF是去除幾乎所有N-連接寡糖從糖蛋白中有效的酶法方法。它能夠在幾分鐘內快速且無偏倚地釋放所有的N-糖鏈，適合后續的色譜或質譜分析。2.**重組酶**：該酶是重組的酰胺酶，能夠從高甘露糖、雜合和復雜寡糖中切割內GlcNAc和天冬氨酸殘基之間的連接。3.**純度**：純度達到95%以上，通過SDS-PAGE和完整ESI-MS進行確定。4.**儲存穩定性**：在含有50%甘油的儲存緩沖液中，好的活性和穩定性可維持長達24個月。5.**使用條件**：可以在原生或變性條件下使用，對于變性條件下的去糖基化，建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。6.**比活性**：具有高達100000U/mL的比活性。7.**His標簽**：產品帶有His標簽，常用于抗體及其相關蛋白的完全去糖基化。8.儲存條件：-25~-15℃保存，有效期1年。9.**無甘油版本**：還提供了無甘油版本的PNGaseF，這有助于在HPLC和質譜分析中獲得結果。10.**酶活定義**：1個酶活力單位指在10μL的反應體系中，37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。這些特點使得酵母重組表達的PNGaseF成為研究和分析糖蛋白糖鏈結構的重要工具。Recombinant Human TrkAProtein,His TagPfu DNA Polymerase 適合擴增較長的DNA片段，有助于在基因編輯中處理大的基因區域或復雜的基因結構。

IdeSProtease是一種免疫球蛋白G（IgG）特異性降解酶，它能夠在IgG的鉸鏈區下方的一個特定位點進行切割，產生F(ab')2和Fc片段。這種酶是通過大腸桿菌（E.coli）表達系統重組表達生產的，并且經過分子改造，使其具有更高的酶活和更廣的底物特異性。在生產過程中，確保IdeSProtease符合GMP（良好生產規范）標準，需要進行以下步驟：1.**分子改造**：通過分子生物學技術對IdeS進行改造，增強其穩定性和比活性。2.**大腸桿菌表達系統**：利用大腸桿菌表達系統進行IdeS的重組表達，確保無動物源性成分，減少病毒污染風險。3.**純化**：通過高度純化過程，確保IdeS的純度達到≥95%。4.**酶活定義**：1個酶活力單位定義為在37°C條件下，30分鐘內酶切1μg重組單克隆IgG所需的酶量。5.**質量控制**：每批產品都經過嚴格的質量控制，以確保產品批間穩定性和高穩定性。6.**儲存條件**：采用適當的儲存條件，如-30℃至-10℃凍存，確保產品在有效期內保持活性和穩定性。7.**微生物學安全性檢測**：進行無菌檢測、體內有毒物質的檢測、抗生物質殘留檢測、宿主細胞蛋白殘留檢測和病毒安全性檢測，確保產品符合微生物學安全性要求。

EndoS糖苷內切酶在ADCs制備中的具體應用步驟，根據上海藥物研究所的研究，可以概括為以下幾個關鍵環節：1.**篩選糖底物和糖苷內切酶**：研究人員篩選了一系列糖底物和糖苷內切酶，發現Endo-S2酶能夠將二糖底物LacNAc轉移至去糖抗體N297位糖基化位點，且LacNAc半乳糖6號位唾液酸化修飾不影響Endo-S2的轉糖基化活性。2.**抗體糖基化改造**：利用Endo-S2和LacNAc的組合，直接實現野生型抗體的糖基化改造。Endo-S2對多樣化LacNAc修飾的兼容性，可以高效獲得功能修飾的糖工程抗體。3.**設計合成藥物-連接子復合物**：研究人員設計并合成了LacNAc-linker-drug復合物結構，這是實現定點ADC化合物“一步”組裝的關鍵。4.**“一步”定點偶聯**：通過Endo-S2的催化作用，將小分子細胞毒藥物通過特定的糖鏈結構直接定點連接到抗體的糖基化位點，簡化了ADCs的制備流程。5.**評價和測試**：對獲得的糖鏈定點ADC化合物進行結構均一性、親水性、體外穩定性及體外活性的測試。測試結果顯示，這些化合物具有非常好的結構均一性（DAR=2）、親水性和體外穩定性，并且在體外具有強大的瘤抑制活性。

PNGaseF（肽-N-糖苷酶F，Peptide-N-glycosidaseF），也稱為N-糖酰胺酶F，是一種用于糖蛋白研究的酶，它可以從糖蛋白的N-連接糖鏈上去除糖基。以下是PNGaseF的一些關鍵特性和應用：1.**作用機制**：PNGaseF能夠特異性地切割位于天冬酰胺殘基上的N-連接糖鏈，釋放出未被糖基化的多肽部分和糖鏈。2.**應用領域**：PNGaseF在糖生物學和蛋白質組學研究中非常重要，用于分析糖蛋白的糖基化模式和結構。3.**酶的來源**：PNGaseF開始是從大腸桿菌（Escherichiacoli）中分離出來的，現在也可以通過重組DNA技術在其他宿主細胞中表達。4.**酶的純度和活性**：商業化的PNGaseF通常具有高純度和高比活性，確保了在實驗中的高效性和可重復性。5.**使用條件**：PNGaseF在溫和的條件下工作，通常在pH7.5至9.0之間，溫度在37°C左右。6.**穩定性**：PNGaseF在儲存時通常需要冷凍保存，以保持其活性。在適當的條件下，該酶可以保持穩定和活躍。7.**樣品準備**：在使用PNGaseF之前，糖蛋白樣品需要適當準備，可能包括純化和緩沖液交換，以確保反應條件的一致性。FnCas12a包含約1300個氨基酸，含有RuvC-like結構域，同時具有DNA和RNA內切酶的活性。Jagged-1 (188-204)

FnCas12a需要一個crRNA，而不需要tracrRNA，簡化了RNA的設計和構建過程。Recombinant Human IL-28B Protein

NLS-Cas9Nuclease是一種重組的化膿性鏈球菌Cas9蛋白，它在N端和C端都添加了核定位信號（NLS），這使得它能夠更有效地進入細胞核并進行基因組編輯。這種蛋白與CRISPR/Cas9系統的引導RNA（gRNA）形成穩定的核糖核的蛋白（RNP）復合物，可以在進入細胞后立即定位到細胞核，從而誘導特定的DNA雙鏈斷裂，實現基因編輯。與傳統的mRNA或質粒系統相比，使用NLS-Cas9Nuclease不需要轉錄和翻譯過程，因此可以避免將外源DNA插入基因組的風險，這對于基因編輯尤其有用。NLS-Cas9Nuclease的特點包括：1.無DNA：系統不添加外部DNA，降低了插入外源DNA的風險。2.高切割效率：雙NLS確保Cas9蛋白高效進入細胞核。3.低脫靶效應：Cas9核酸酶的瞬時表達提高了切割的特異性。4.節省時間：無需轉錄和翻譯過程。這種核酸酶可以用于體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA，以及通過電穿孔或注射與特定gRNA結合時的體內基因編輯。產品的保存條件通常是在-25~-15℃，有效期為一年。使用時，可以根據推薦的反應體系進行體外DNA裂解實驗，并通過瓊脂糖凝膠電泳檢測消化效率。具體產品的詳細信息和應用指南，可以參考金斯瑞生物科技有限公司、NEB、金斯瑞、YEASEN和Novoprotein等公司提供的資料。Recombinant Human IL-28B Protein