pA-Tn5轉座酶是一種經過改造的高活性Tn5轉座酶,與ProteinA融合,形成一種新型融合酶,應用于CUT&Tag技術中,用于研究蛋白質與基因組DNA的相互作用。這種融合酶具備以下特點:1.**高活性**:pA-Tn5轉座酶是超高活性的突變形式,體外轉座效率比野生型高1000倍。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5轉座酶的N端結構域為ProteinA的一部分,可以與免疫球蛋白的Fc區相互作用,特別是與大多數哺乳動物的IgG結合。3.**Tn5轉座酶活性**:C端結構域為Tn5轉座酶,能夠特異性識別轉座子兩端反向重復的ME序列(MosaicEnd),并在形成轉座復合體后隨機插入靶DNA中。4.**應用廣**:適用于CUT&Tag技術、高通量測序建庫、ATAC-seq等,特別適用于早期胚胎發育、干細胞、以及表觀遺傳學等研究領域。5.**操作簡便**:pA-Tn5轉座酶的使用簡化了實驗步驟,可以在一步反應中實現DNA片段化和接頭連接,從細胞到二代測序文庫的轉化過程需9小時。6.**低細胞投入量**:CUT&Tag技術允許從低至60個細胞的樣本中獲得結果,甚至可以應用于單細胞水平的研究。7.**高質量結果**:pA-Tn5轉座酶的使用可以保證DNA片段化,同時獲得的蛋白純度高、核酸殘留低。跨膜蛋白的跨膜區域的相互作用是連接膜外環境與細胞內環境的重要渠道。Recombinant Cynomolgus IL-2R beta/CD122 Protein,His Tag
5'DNA腺苷酰化試劑盒的單步反應是一種高效的酶促反應,用于在DNA分子的5'端添加一個腺苷酸(AMP)基團。這個過程通常涉及以下步驟:1.**準備反應混合物**:-根據試劑盒說明書,將所需的5'磷酸化的單鏈DNA(ssDNA或pDNA)、MthRNA連接酶(或其他腺苷酰化酶)、ATP和相應的緩沖液按比例混合。2.**孵育反應**:-將混合好的反應體系在指定的溫度(通常是65℃)下孵育一定的時間,以允許酶將ATP中的AMP部分轉移到DNA的5'端。3.**酶失活**:-反應完成后,通常在85℃孵育5分鐘以失活腺苷酰化酶,這一步是為了防止后續的去腺苷酰化現象,確保反應的穩定性。4.**產物收集**:-由于轉化效率高,通常不需要進行凝膠純化步驟。可以通過乙醇沉淀等方法收集腺苷酰化后的DNA產物。5.**產物應用**:-收集的腺苷酰化DNA可以直接用于后續的克隆、測序、連接或其他分子生物學實驗。6.**注意事項**:-確保所有操作在無RNA酶和無DNA酶的環境中進行,以避免污染。-使用時需注意反應體系的準確性,確保底物、酶和ATP的比例適當。單步反應的優勢在于簡化了操作流程,減少了樣品處理的復雜性,并且由于高轉化效率,避免了耗時的純化步驟,從而節省了時間和成本。Recombinant Cynomolgus IL-2R beta/CD122 Protein,His Tag跨膜蛋白的表達與制備需要采用合適的表達載體、宿主細胞、培養條件和純化工藝等方法,優化表達和純化過程。
1st Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)的逆轉錄過程是將RNA模板轉換成cDNA的過程。這個過程通常包括以下幾個步驟:模板RNA的準備:確保RNA模板的質量和純度,可能需要使用DNase I來去除RNA樣品中的DNA污染。逆轉錄反應體系的配制:根據試劑盒的說明,將RNA模板、引物(如Oligo(dT)、隨機六聚體或基因特異性引物)、dNTPs、逆轉錄酶和緩沖液等組分混合在一起。逆轉錄酶的啟用:如果需要,可能要將反應體系預熱到一定溫度以達到逆轉錄酶。逆轉錄反應:在適宜的條件下,逆轉錄酶會根據RNA模板合成一條互補的DNA鏈。這個過程通常在一定的溫度范圍內進行,以保證酶的活性和反應的效率。反應的終止:逆轉錄反應完成后,通常通過加熱到較高溫度來終止反應,以防止cDNA的進一步合成。產物的純化:合成的cDNA可能需要通過某些方法(如柱層析或沉淀)進行純化,以去除未反應的dNTPs、RNA模板和酶等。cDNA的檢測和應用:合成的cDNA可以用于后續的PCR、qPCR、克隆、測序等實驗。
dNTPMix(脫氧核苷酸三磷酸混合溶液)的穩定性是進行PCR和其他DNA合成實驗時的重要因素。以下是一些關于dNTPMix穩定性的關鍵點:1.**儲存條件**:dNTPMix應儲存在-20°C的條件下,以保持其穩定性和活性。2.**避免反復凍融**:dNTPMix應避免多次凍融,因為這可能會影響其穩定性。3.**使用頻率**:如果使用頻率較高,使用后應以-20°C儲存。4.**長期儲存**:對于長期儲存或使用頻率較低的情況,建議將dNTPMix儲存在-70°C以保持好的狀態。5.**質量控制**:dNTPMix應不含DNase和RNase,以避免DNA或RNA的降解。6.**純度**:dNTPMix的純度通常≥99%(HPLC檢測),確保了其在實驗中的可靠性。7.**pH調節**:dNTPMix通常用超純水配制,并通過高純度NaOH溶液調節pH值至約7.0,以保持其穩定性。8.**有效期**:在適當的儲存條件下,dNTPMix的有效期通常為2年或更長時間。9.**使用注意事項**:使用dNTPMix時,應穿戴適當的實驗室防護裝備,如實驗服和一次性手套,以確保操作安全。酵母重組表達N-糖苷酶F(PNGase F)是一種通過酵母重組表達系統生產的酶。
磁珠法質粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米分離技術和細菌細胞的SDS堿裂解法從菌體中提取高質量質粒DNA的實驗工具。以下是一些關于磁珠法質粒小量抽提試劑盒的關鍵信息:1.**操作簡便性**:-操作快速簡單,可以在60分鐘內完成96個不同樣品的提取,實現質粒提取的高通量化和自動化。2.**高純度和高產量**:-抽提得到的質粒純度高,OD260/OD280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/OD230比值大于2.0,可以直接用于轉化、DNA測序、PCR和酶切等后續實驗。3.**試劑盒組件**:-包含BufferMP1、BufferMP2、BufferMP3、PureMagBeads、BufferMPB、TEBuffer(pH8.0)、RNaseA等組分。4.**應用范圍**:-適用于從大腸桿菌中抽提小量質粒,所得質粒可直接用于細胞轉染、DNA測序、PCR等實驗。5.**效率和純度**:-與同類產品相比,提取效率更高,獲得質粒的純度更高;與柱式法相比,可減少離心次數,獲得完整性更好的質粒。6.**注意事項**:-例如,SgMagBeads需要充分洗滌和干燥,以保證無乙醇殘留,并且在吸取上清時避免吸入SgMagBeads。7.**保存條件**:-室溫保存,有效期一年。磁珠長期不使用時,可以4℃保存以延長保存時間。
通過使用PNGase F去除糖蛋白上的糖鏈,可以確定蛋白質是否發生糖基化,以及糖基化位點。Recombinant Cynomolgus IL-2R beta/CD122 Protein,His Tag
dITP(脫氧肌苷三磷酸)在PCR(聚合酶鏈反應)擴增中的應用是特定和有限的。以下是dITP在PCR擴增中的一些關鍵點:1.**PCR擴增中的使用**:dITP可以在某些類型的PCR中替代部分dGTP,特別是在使用某些特殊的DNA聚合酶時,例如那些不具有校正(proofreading)功能的酶。2.**替代比例**:在PCR中,dITP通常不能完全替代dGTP,因為這樣做可能會抑制PCR擴增反應。通常推薦在PCR反應中使用10%的dITP來代替dGTP。3.**特殊DNA聚合酶**:某些高保真DNA聚合酶,如碧云天生產的Q6U?高保真DNA聚合酶,可以與dITP一起使用,以提高PCR擴增的特異性和效率。4.**dNTP/dITP混合物**:在一些PCR應用中,會使用dNTP/dITP混合物,其中包含2.5mM每種dNTP加上0.25mM的dITP,以優化擴增條件。5.**PCR反應條件**:dITP的使用可能需要優化PCR反應條件,包括退火溫度、Mg2+濃度和循環次數。6.**穩定性和儲存**:dITP溶液應儲存在-20°C或更低的溫度下,以保持其穩定性。使用時應避免多次凍融,以防止降解。7.**安全性和專業性**:dITP和其他PCR組分應由專業人員用于科研目的,不應在臨床診斷中使用。Recombinant Cynomolgus IL-2R beta/CD122 Protein,His Tag