肝臟原位灌注法：（為分離肝細胞的經(jīng)典方法）1，在38度-39度的水浴槽中預熱hepes緩沖液和膠原酶液，使其在肝內(nèi)達到37度。2，給大鼠（180-200g）腹腔注射巴比妥鈉100ul/100g，從古靜脈注射肝素1000u，打開腹腔，在門靜脈的肝外5mm處松松的放一個結(jié)扎線環(huán)，將血管套管插入至肝掌，結(jié)扎，快速切開肝下血管與面壓力過高，關注500ml無鈣hepes緩沖液，流速為30ml/min，數(shù)秒鐘肝臟即變白。3，灌注300ml膠原酶液，流速15ml/min，持續(xù)20min。肝臟腫大。4，切下肝臟。用hepes緩沖液沖洗。切開肝纖維囊，收集消化清洗液被并混入100mlleibovitzL15培養(yǎng)液，該懸液含大量肝細胞。5，用兩層紗布或60-80um尼龍篩過濾細胞懸液，靜置，使活細胞沉降20分，室溫下，去除含組織碎屑和死細胞的上清液。6，低速離心法清洗細胞50g40s三次以去除膠原酶，破壞的細胞以及肺肝實質(zhì)來源的細胞。7，將細胞收集在培養(yǎng)液F12中（含，10ug/ml牛胰島素，），co2孵箱內(nèi)培養(yǎng)。8，傳代培養(yǎng)：細胞長滿時，先用BSS洗1-2次，再用1：1的，吸除消化液，輕輕洗細胞層，加適量培養(yǎng)液，用吸管吹打成細胞懸液，接種培養(yǎng)。通常從一個大鼠肝中可獲得4*10‘6-6*10’6個活細胞。 原代肝細胞的規(guī)格介紹。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！上海大鼠肝細胞 SD原代肝細胞中喬新舟
原代肝細胞體外培養(yǎng)48h后，參照文獻[20-21]報道的方法誘導脂肪變性細胞模型。設置不同濃度(0～)的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)，F(xiàn)FA混合物與含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基充分混勻后按濃度順序依次加入六孔板中，置于37℃、含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后油紅O染色，觀察細胞內(nèi)脂滴沉積情況，并采用全自動生化分析儀檢測肝細胞內(nèi)TG含量。油紅O染色步驟：棄去六孔板中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液清洗1～2次，加入油紅O固定液固定20～30min；棄去固定液，加入新鮮配制的油紅O染液染色10～20min；60%的異丙醇浸洗1～2min，三蒸水清洗2～3次直至無多余染液；加入蘇木素染液染色1～2min，油紅OBuffer清洗1min，晾干，倒置顯微鏡下觀察。細胞內(nèi)TG測定步驟：棄去六孔板中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液清洗1次，按每孔細胞數(shù)量加入150～250μL的RIPA裂解液，刮刀刮取細胞，冰上裂解30min，4℃，13000r/min，離心10min，取上清，全自動生化分析儀檢測肝細胞內(nèi)TG含量。 吉林大鼠肝細胞 SD原代肝細胞中喬新舟上海中喬新舟 原代肝細胞值得信賴。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！
細胞復蘇：①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入（T25瓶）②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
注意事項1.取材要求新鮮，無菌，解剖小鼠時，注意不要損傷脾臟及其周圍的臟器，尤其是腸道等，防止污染脾臟。2.沖洗脾臟時要盡量洗凈血污，去除無用組織，并要防止組織干燥。3.碾磨后及時用清水沖洗篩網(wǎng)，防止組織、細胞阻塞網(wǎng)孔。4.計數(shù)前，注意吸盡平皿里的細胞，充分混勻，使細胞分散成單個細胞。5.實驗操作應在操作臺無菌區(qū)域內(nèi)進行，勿在邊緣非無菌區(qū)域操作。6.金屬器械不能在火焰中燒的時間過長，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。7.另外膠塞過火焰時也不能時間長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞。8.吸取過營養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營養(yǎng)液能燒焦形成炭膜，再用時會把有害物帶入營養(yǎng)液中。 原代肝細胞的服務廠家排名。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！
原代培養(yǎng)就是提取的細胞體外次培養(yǎng)。，當原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞不斷分裂，一則細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止；另一方面也會因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。此時就需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進行培養(yǎng)。這個過程就稱為傳代，網(wǎng)上有很多解釋，一般的實驗用的到細胞的都是直接傳代培養(yǎng)，別的地方買過來細胞株細胞培養(yǎng)結(jié)束直接進行。原代肝細胞如何選擇？上海中喬新舟告訴您。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！上海大鼠肝細胞 SD原代肝細胞中喬新舟
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在細胞實驗中，通過原代分離實驗得到的原代細胞，與永生化的細胞系相比，能夠忠實模擬體內(nèi)生理狀態(tài)和功能，屬于“高階”的細胞模型，但是獲得高純度的原代細胞是一個非常艱巨的過程，科學合理的原代細胞提取和培養(yǎng)方法對于任何實驗室都是一筆不可多得的財富。上次小編整理了脂肪原代細胞提取的教程，得到了大家的一致好評。應廣大讀者要求，小編快馬加鞭“肝”出了小鼠原代肝細胞的提取“密鑰”，趕緊收好~肝臟是人體“”代謝，在包括葡萄糖、蛋白質(zhì)和脂肪等多種物質(zhì)代謝過程中發(fā)揮重要作用。肝臟參與多種生理病理過程，與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關。肝臟中的細胞主要分為實質(zhì)細胞和非實質(zhì)細胞兩類：實質(zhì)細胞的占比達到整個肝臟的70%-80%，包括肝細胞和少量的膽管內(nèi)皮細胞；非實質(zhì)細胞包括星狀細胞，巨噬細胞，NK細胞，成纖維細胞等。肝原代細胞提取培養(yǎng)的主要是肝細胞。 上海大鼠肝細胞 SD原代肝細胞中喬新舟
上海中喬新舟生物科技有限公司專注技術創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā)，發(fā)展規(guī)模團隊不斷壯大。一批專業(yè)的技術團隊，是實現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標的基礎，是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動力。公司以誠信為本，業(yè)務領域涵蓋原代細胞及細胞株，細胞培養(yǎng)基，細胞生物學技術服務，實驗室儀器設備，我們本著對客戶負責，對員工負責，更是對公司發(fā)展負責的態(tài)度，爭取做到讓每位客戶滿意。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務，我們相信誠實正直、開拓進取地為公司發(fā)展做正確的事情，將為公司和個人帶來共同的利益和進步。經(jīng)過幾年的發(fā)展，已成為原代細胞及細胞株，細胞培養(yǎng)基，細胞生物學技術服務，實驗室儀器設備行業(yè)出名企業(yè)。