云南大鼠原代肝細胞屬于什么細胞

來源: 發布時間:2023-03-03

原代肝細胞培養基由補充了適當的生長因子和細胞因子的基礎培養基組成。細胞在細胞培養箱中生長并維持在適當的溫度和混合氣體中(對于哺乳動物細胞,通常為37°C,5%CO2)。培養條件根據細胞類型而廣變化。生長培養基的pH,葡萄糖濃度,生長因子和其他營養物質的存在可能會有所不同,具體取決于細胞類型。在建立原代培養過程中,必須在生長培養基中加入以抑制從宿主組織引入的污染。可能包括慶大霉素,青霉素,鏈霉素和兩性霉素B的混合物。但是,不建議長期使用,因為某些試劑(例如兩性霉素B)從長期來看可能對細胞有毒。 原代肝細胞的市場應用分析。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!云南大鼠原代肝細胞屬于什么細胞

    肝臟原位灌注法:(為分離肝細胞的經典方法)1,在38度-39度的水浴槽中預熱hepes緩沖液和膠原酶液,使其在肝內達到37度。2,給大鼠(180-200g)腹腔注射巴比妥鈉100ul/100g,從古靜脈注射肝素1000u,打開腹腔,在門靜脈的肝外5mm處松松的放一個結扎線環,將血管套管插入至肝掌,結扎,快速切開肝下血管與面壓力過高,關注500ml無鈣hepes緩沖液,流速為30ml/min,數秒鐘肝臟即變白。3,灌注300ml膠原酶液,流速15ml/min,持續20min。肝臟腫大。4,切下肝臟。用hepes緩沖液沖洗。切開肝纖維囊,收集消化清洗液被并混入100mlleibovitzL15培養液,該懸液含大量肝細胞。5,用兩層紗布或60-80um尼龍篩過濾細胞懸液,靜置,使活細胞沉降20分,室溫下,去除含組織碎屑和死細胞的上清液。6,低速離心法清洗細胞50g40s三次以去除膠原酶,破壞的細胞以及肺肝實質來源的細胞。7,將細胞收集在培養液F12中(含,10ug/ml牛胰島素,),co2孵箱內培養。8,傳代培養:細胞長滿時,先用BSS洗1-2次,再用1:1的,吸除消化液,輕輕洗細胞層,加適量培養液,用吸管吹打成細胞懸液,接種培養。通常從一個大鼠肝中可獲得4*10‘6-6*10’6個活細胞。 云南大鼠原代肝細胞屬于什么細胞上海中喬新舟的 原代肝細胞怎么樣?歡迎來電咨詢上海中喬新舟!

    細胞培養可分為原代培養和傳代培養。直接從體內獲取的組織細胞進行培養為原代培養;當原代培養的細胞增殖達到一定密度后,則需要做再培養,即將培養的細胞分散后,從一個容器以1:2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養,為傳代培養,傳代培養的累積次數就是細胞的代數。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或DMSO作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。

小鼠原代肝細胞的形態學觀察本實驗在Seglen兩步灌流法的基礎上改進,平均每只小鼠肝臟可獲得3×107~5×107個細胞。臺盼藍染色結果顯示,即時分離的原代肝細胞活率可達到85%~90%。即時分離的原代肝細胞胞體呈圓形或類圓形,多為單核或雙核,細胞間邊界清晰(圖1A)。接種后的肝細胞4h開始貼壁,24h大部分肝細胞貼壁,細胞形態多呈多角形或不規則形,細胞核大而圓,可見明顯的雙核或多核,細胞有向外延展趨勢,細胞間邊界不清(圖1B)。此外,按上述方法分離出的原代肝細胞在體外可存活1周左右,其中3~5d狀態比較好,第6天開始細胞凋亡增加 原代肝細胞的規格介紹。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!

    在原代肝細胞分離培養過程中有以下幾個關鍵操作要點:(1)灌流的溫度。實驗開始前需預熱PBS緩沖液(含EDTA)及IV型膠原酶,使其溫度保持在37℃,灌流開始時從水浴鍋中取出。(2)灌流的方向。由于小鼠門靜脈較細,插管操作較困難,因此采用逆向灌流法,即在較粗的下腔靜脈插管,剪斷門靜脈,使灌流液與血液呈逆向灌流,提高了灌流的成功率及細胞獲取率[17]。(3)灌流的速度。灌流過程應保持勻速、低速,灌流全程時間比較好控制在15min以內。先灌流無鈣無鎂的PBS緩沖液(含EDTA),灌流速度應保持在7~8mL/min。再灌流IV型膠原酶進行原位消化,灌注膠原酶時,采用間斷法,即用鑷子夾閉門靜脈,快速灌注酶至肝臟略膨起后,停頓30s,待液體排出肝臟回縮后,再次進行推注,反復多次,灌注時間約為5min。(4)膠原酶的濃度。IV型膠原酶濃度為,采用間斷法灌流進行原位消化時,每只小鼠肝臟只需10mL的IV型膠原酶,既提高了灌流效率又可避免膠原酶的浪費。(5)鼠尾膠原蛋白I型的濃度。對于原代肝細胞體外難以培養的問題,不同實驗室建立了多種培養方法來維持其生物學活性,大多采用雙層膠原夾層培養法(膠原三明治培養法)[15],本實驗采用單層膠原培養法,六孔板中預鋪鼠尾膠原蛋白I型的濃度為。 原代肝細胞的定制尺寸。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!云南大鼠原代肝細胞屬于什么細胞

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    在細胞實驗中,通過原代分離實驗得到的原代細胞,與永生化的細胞系相比,能夠忠實模擬體內生理狀態和功能,屬于“高階”的細胞模型,但是獲得高純度的原代細胞是一個非常艱巨的過程,科學合理的原代細胞提取和培養方法對于任何實驗室都是一筆不可多得的財富。上次小編整理了脂肪原代細胞提取的教程,得到了大家的一致好評。應廣大讀者要求,小編快馬加鞭“肝”出了小鼠原代肝細胞的提取“密鑰”,趕緊收好~肝臟是人體“”代謝,在包括葡萄糖、蛋白質和脂肪等多種物質代謝過程中發揮重要作用。肝臟參與多種生理病理過程,與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關。肝臟中的細胞主要分為實質細胞和非實質細胞兩類:實質細胞的占比達到整個肝臟的70%-80%,包括肝細胞和少量的膽管內皮細胞;非實質細胞包括星狀細胞,巨噬細胞,NK細胞,成纖維細胞等。肝原代細胞提取培養的主要是肝細胞。 云南大鼠原代肝細胞屬于什么細胞

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