寧夏Ham's F12培養基答疑解惑

    已發現當培養基中的血清濃度減少時，這些成分都是必需的。既使在使用血清的情況下，這些成分也可幫助細胞的克隆化培養及維持某些特殊細胞系的生長。***和生長因子在大多數常規培養基的配方中都沒有注明，但在無血清培養基中通常要加入它們，用其來代替血清中的***能增加多種不同類型細胞的貼瓶率；生長因子包括FGF家族、EGF、PDGF、IGF－1和IGF－2及白介素等，生長因子和細胞因子有著***的特異性，一般與***或其它物質起相互協同或加成作用。另一種常見的添加物就是血清替代物，目前已有許多可完全或部分替代傳統培養液中血清成分的商業產品，其穩定性較好，但批次間仍有差別，產品的成分也不很確定。干粉培養基原倍液的配制1）配制過濾**的細胞培養基(1)閱讀培養基使用說明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、**酸鈉、HEPES等）。(2)根據所需將培養基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內殘留培養基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解。(3)加入規定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質。(4)輕微攪拌溶解，加注射用水至規定體積。(5)用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調pH至所需值。(6)用μm濾膜正壓過濾**。。F12培養基含有豐富的營養物質，支持細胞的生長。寧夏Ham's F12培養基答疑解惑

    MEM低血清培養基的平衡鹽系統也不是常規的平衡鹽系統，該平衡鹽系統的緩沖能力強于常規平衡鹽系統的緩沖能力。細胞培養過程中pH值下降產生的原因有很多。在細胞生長非常快時，pH值通常下降得很快，此時可以通過及時傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決。此外，培養瓶蓋擰得過緊、NaHCO3緩沖系統緩沖能力不夠、培養液中鹽濃度不正確、**、酵母或***污染等也能導致pH值通常下降得很快。這時，可以通過以下幾種方法解決：1）增加培養液中NaHCO3濃度或減少培養箱內CO2濃度。NaHCO3含量在；2)改用不依賴CO2培養液；3)適當松開瓶蓋。在培養液中加HEPES緩沖液，使終濃度為10~25mM；4)在CO2培養環境中改用基于Earle’s鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks’鹽配制的培養液；5)如果是污染造成的則丟棄培養物或用*****。酚紅在細胞培養基中用作pH值的指示劑。一般情況下，可以通過酚紅的指示作用判斷培養基的pH值，但低血清或是無血清細胞培養基中酚紅的含量與普通細胞培養基中的酚紅含量不同，不能通過肉眼觀察或通過經驗來判定pH值，建議使用pH計進行測定。酚紅通常對含血清的細胞培養基生產的生物制品質量并不會產生明顯影響，也可通過純化技術去除。寧夏Ham's F12培養基答疑解惑減血清培養基提高了細胞培養的重復性和可靠性。

    從而使培養基的預熱、加熱**及冷卻過程可在同一設備內完成。該流程的加熱和冷卻時間比噴射加熱連續**流程要長些，但由于在培養基的預熱過程同時也起到了**后培養基的冷卻，因而節約了蒸汽和冷卻水的用量。（2）蒸汽直接噴射型的連續**系統流程中采用了蒸汽噴射器，它使培養液與高溫蒸汽直接接觸，從而在短時間內可將培養液急速升溫至預定的**溫度然后在該溫度下維持一段時間**，**后的培養基通過一膨脹閥進入真空冷卻器急速冷卻，從圖中可以看出，由于該流程中培養基受熱時間短，營養物質的損失也就不很嚴重，同時該流程保證了培養基物料**先出，避免了過熱或**不徹底等現象。（3）由連消塔、維持罐和噴淋冷卻組成的**系統連續**的基本設備一般包括：①配料預熱罐，將配制好的料液預熱到60-70℃，以避免連續**時由于料液與蒸汽溫度過大而產生水汽撞擊聲；②連消塔，連消塔的作用主要是使高溫蒸汽與料液迅速接觸混和，并使料液的溫度很快升高到**溫度（126-132）℃；③維持罐，連消塔加熱的時間很短，光靠這段時間的**是不夠的，維持罐的作用是使料液在**溫度下保持5-7min，以達到**的目的；④冷卻管，從維持罐出來的料液要經過冷卻排管進行冷卻。

    將未發生霉變的帶有胚的一半種子用于愈傷**誘導實驗；b、**消毒：于無菌環境下，將挑選的種子置于無菌三角瓶中，用無菌水清洗3-5次，75％酒精搖動清洗5min，無菌水清洗3-5次，5％naclo浸泡30min(期間每隔5-10min搖動30s)，清水洗3-5次，種子表面的無菌水可用干燥的無菌濾紙吸去。(2)配制誘導培養基：cs基本培養基+，用超純水溶解，。cs基本培養基的成分及用量如表1所示。(3)愈傷**的誘導方法：用彎頭鑷子將無菌種子的缺口一端傾斜插入cs水稻成熟胚愈傷**誘導培養基，胚貼于培養基表面；于溫度24-26℃、濕度50-70％、光照強度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時間16h、黑暗時間8h)條件下培養。(4)cs誘導培養基的誘導結果為：水稻成熟胚愈傷**誘導時，經cs誘導培養基誘導培養12-14d產生大量淡黃色結構致密的團狀愈傷**，出愈率為100％。如圖7所示。對比培養例7：將cs基本培養基替換為ms基本培養基，其余完全同培養實例7，ms基本培養基的成分及用量如表1所示。ms誘導培養基的誘導結果為：水稻成熟胚愈傷**誘導時，經ms誘導培養基誘導培養12-14d產生大量淡黃色結構致密的團狀愈傷**，出愈率為100％。如圖7所示。減血清培養基提高了實驗結果的可靠性。

    體外培養時，一定的濃度范圍條件下，葡萄糖主要經糖酵解循環轉化成乳酸來為細胞提供能量。（氨基酸）氨基酸在細胞內的重要生理作用主要體現在以下幾個方面：①是蛋白質的基本組成單位，用于合成蛋白質和多肽；②可用于合成某些具有重要生理作用的含氮化合物，如核酸、尼克酰胺等；③某些氨基酸還具有獨特的生理作用，如甘氨酸參與生物轉化作用，丙氨酸和谷氨酰胺參與細胞內氨的運輸等；④可轉變成糖類和脂肪，參與氧化供能。細胞所能利用的氨基酸是L型同分異構體，D型氨基酸不能被利用。不同的細胞對氨基酸的需求各異，但有些必需氨基酸是細胞不能自身合成的，必須依靠外源的細胞培養液提供。其余非必需氨基酸，細胞可以自己合成，或通過轉氨作用由其他物質轉化而來，但是在細胞培養基中添加適當濃度的非必需氨基酸可以減輕細胞在合成方面的負擔，提高谷氨酰胺及其它必需氨基酸的利用率。絕大部分細胞對谷氨酰胺有較高的要求，可能因其不僅是細胞的主要氮源，且可作為細胞生長的能源物質和嘌呤、嘧啶核苷酸的前體，另外還可直接作為細胞增殖和產物合成中的蛋白質和多肽的組成成分。在缺少谷氨酰胺時，細胞會生長不良，甚至死亡。由于谷氨酰胺具有多種生理作用。無酚紅培養基確保了實驗結果的準確性。寧夏Ham's F12培養基答疑解惑

使用減血清培養基可以減少細胞培養中的血清干擾因素。寧夏Ham's F12培養基答疑解惑

    無動物組分無血清細胞培養基的應用三、細胞培養基的質量標準和檢測方法澄清度水是細胞培養基的溶劑。細胞培養基中的營養成分只有完全溶解于水才能被細胞吸收攝取，細胞才能生長增殖，因此細胞培養基是否溶解以及培養液是否透明澄清直接影響培養基使用。該項目是通過對水溶解后的細胞培養基的澄清度檢查，判斷細胞培養基的澄清度。按中華******典2005年版二部附錄ⅨB進行。pH值哺乳類動物細胞生長需要合適的酸堿度，pH過高或者過低都會導致細胞死亡。pH值的測定也可以檢查細胞培養基的批間差。清大天一標準規定取規定量供試品，用注射用水（水溫20℃-30℃）溶解至1L，加入規定量碳酸氫鈉到上述溶液中，用與細胞培養基溶液pH值相近的兩點標準緩沖液校準后的酸度計進行測定。按中華******典2005年版二部附錄ⅥH進行；加入規定量的碳酸氫鈉（見表4-12）到上述溶液中，按中華******典2005年版二部附錄ⅥH進行。干燥減量的質量分數細胞培養基具有吸濕性，在空氣中放置水分會很快升**燥減量的質量分數表示產品中含濕量。細胞培養基是有菌制劑，其豐富的營養成分有利于微生物生長，控制細胞培養基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持細胞培養基的養分。寧夏Ham's F12培養基答疑解惑