中國澳門胰酶生產企業

    胰蛋白酶**點評胰蛋白酶能使痰、血凝塊溶化變稀，易于引流排痰，加速創面愈合凈化，促進肉芽**增生，而不損傷正常**，臨床上有消消腫功能。[4]胰蛋白酶其他胰蛋白酶細胞培養胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的**或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關，在pH為、溫度為37℃時，胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時，應把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。終止消化時，可用含有血清培養液或者胰酶**劑終止胰酶對細胞的作用。1.稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為%，用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調PH到左右）或PBS（D-hanks）液中。攪拌混勻，置于4℃內過夜。2.用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺內用注射濾器（微米微孔濾膜）抽濾**。3.分裝成小瓶于-20℃保存以備使用可！詞條圖冊更多圖冊參考資料1.胰蛋白酶．化學品數據庫[引用日期2017-05-26].***典**會，***典2010版[M]，北京：**醫*科技出版社。含EDTA的胰酶消化活力會比不含EDTA的強。中國澳門胰酶生產企業

    胰酶使用注意：1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差。胰酶配制方法：1、培養液配制，方便好用，對細胞影響小，并且培養液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制，要先調ph值（①胰酶（1：250）②③④⑤⑥⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時，調，過濾除菌。）3、pbs（：稱取胰酶粉末，先用少許滅菌過的PBS調成糊狀，然后補足到100ml。置室溫攪拌4小時或冰箱內過夜，過濾滅菌，分裝，4℃保存備用。）;或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中，先用少許D-Hanks平衡鹽溶液（）調成糊狀，然后再補足D-Hanks平衡鹽溶液，攪拌混勻，置室溫4小時或冰箱過夜，并不斷攪拌振蕩；2.次日，先用濾紙粗濾，再進行過濾除菌，分裝入瓶中，低溫冰箱保存備用，常用濃度為。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可調用碳酸氫鈉溶液調pH至。）一般，至于作用效果，需要消化一次細胞感覺一下，因為不同廠家的酶不一樣，有的作用溫和，有的作用劇烈。4、是否需要四度放置過夜，取決于你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高，所以難以溶解，需要四度過夜.而現在的胰酶純度都很高。 中國澳門胰酶生產企業胰酶可在-20℃下保存一年。

胰酶中的酚紅有哪些作用？酚紅在培養基中被用來作為pH指示劑，中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明：酚紅可以模擬固醇類***（特別是雌***）的作用。為避免固醇類反應，培養細胞尤其是哺乳類細胞時，建議用不含酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，在做流式細胞檢測時，也會使用不含酚紅的培養基或者胰酶。圖 2. Phenol red test圖片來源網絡8、在做細胞凋亡檢測時，細胞為什么不能用含有EDTA的胰酶消化？Annexin V（膜聯蛋白）是Ca2+依賴的蛋白，EDTA會螯合Ca2+從而影響Annexin V，進而影響結果，因此需選用不含EDTA的胰酶。建議放入培養箱中進行消化，時間可以長一點。隨時觀察細胞情況，避免消化過度；也可使用細胞刮刀將細胞刮下，后用***吹勻，比消化簡單，還可避免使用胰酶帶來的傷害。

    產品簡介產品簡介：產品編號產品名稱產品包裝產品價格C0201胰酶細胞消化液100ml碧云天生產的胰酶細胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含。該消化液經過過濾**，可以直接用于培養細胞的消化，或者一些**的消化。本胰酶細胞消化液具有方便快速的特點，通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數貼壁細胞。包裝清單：產品編號產品名稱包裝C0201胰酶細胞消化液100ml―說明書1份保存條件：4℃保存，一年有效。注意事項：在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被**污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差。為了您的安全和**，請穿實驗服并戴一次性手套操作。使用說明使用說明：1.貼壁細胞的消化：a)吸去培養液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。b)加入少量胰酶細胞消化液，略蓋過細胞即可，室溫放置30秒至2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同。c)顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化；或者用***吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的完全細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用于后續實驗。d)如果發現消化不足。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑。

胰蛋白酶（Trypsin）簡稱胰酶，是一種絲氨酸水解酶，能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細胞的提取、培養，以及體外細胞培養過程中，均會使用到胰蛋白酶消化液，用于水解細胞間蛋白質，使組織或細胞離散成單個細胞。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子，胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細胞間連接蛋白的水解，起到增強消化的效果。酚紅是一種pH指示劑，溶液偏堿性時呈紫紅色，偏酸性時呈橘紅色，近中性時呈粉紅色。本產品為0.25%胰蛋白酶消化液，含0.25%胰蛋白酶，溶于Hank’s緩沖液，不含EDTA，無酚紅指示劑，經0.22μm過濾除菌。適用于貼壁細胞的消化傳代；也可用于組織細胞分離的初步消化。山東胰酶采購

胰蛋白酶是一種動物源性產品，是培養細胞過程中常用的酶。中國澳門胰酶生產企業

    胰酶消化液(TrypsinSolution)操作步驟(一)獲得目的基因1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段。2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA***鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物。(二)構建重組表達載體1、胰酶消化液(TrypsinSolution)載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。(三)獲得含重組表達質粒的表達菌種1、將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。2、測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。3、以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞。(四)誘導表達1、胰酶消化液(TrypsinSolution)挑取含重組質粒的菌體單斑至2mlLB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養。2、按1∶50比例稀釋過夜菌。 中國澳門胰酶生產企業