雙光子顯微鏡為什么穿透能力強?因為組織對可見光區域的較強吸收和散射帶來兩個嚴重的問題第1個是激發光的減弱,第2個就是另外就是由于物鏡本身光的光學特性,單光子激發的背景較強,所以才有共聚焦系統提高成像的分辨率因為組織對可見光區域的較強吸收和散射帶來兩個嚴重的問題第1個是激發光的減弱,第2個就是另外就是由于物鏡本身光的光學特性,單光子激發的背景較強,所以才有共聚焦系統提高成像的分辨率剛好雙光子在這兩點具有很大的優勢上面的內容基本在談到雙光子優勢都會相對說明,在實際操作中成像的深度和樣品的關系很大,雙光子成像利用高亮度的熒光標記材料,已經有做到mm級別的穿透深度雙光子顯微鏡還可以對一些具有特性的染料細胞進行實驗,還有一些短波長可以利用雙光子特性進行特定實驗。進口ultimainvestigator雙光子顯微鏡成像視野一般是多少
而配合了雙光子激發技術,激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發揮功效。那么,什么是雙光子激發技術呢?在高光子密度的情況下,熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級,經過一個很短的時間后,電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子(P=h/λ)。利用這個原理,便誕生了雙光子激發技術。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光,通過物鏡匯聚,由于雙光子激發需要很高的光子密度,而物鏡焦點處的光子密度是比較高的,所以只有在焦點處才能發生雙光子激發,產生熒光,該點產生的熒光再穿過物鏡,被光探頭接收,從而達到逐點掃描的效果。國外investigator雙光子顯微鏡掃描深度雙光子顯微鏡的原理是什么?
新一代微型化雙光子熒光顯微成像系統的成功研制是國家重大科研儀器研制專項的一個碩果。它彰顯了北京大學在生物醫學成像領域先期布局的前瞻性,鍛煉了一支以年輕PI和碩博研究生為主體、具有學科交叉背景和重要技術創新能力的“中國智造”隊伍。目前,該研發團隊正在領銜建設“多模態跨尺度生物醫學成像”十三五國家重大科技基礎設施,積極參與即將啟動的中國腦科學計劃。可以期待,微型化雙光子熒光顯微成像系統將為實現“分析腦、理解腦、模仿腦”的戰略目標發揮不可或缺的重要作用
2008年錢永健等人由于熒光蛋白(GFP,綠色熒光蛋白)的發現和使用,獲得了諾貝爾化學獎,是對熒光成像技術的一次巨大肯定和推動。光學成像本身具有高分辨率、高通量、非侵入和非毒性等特點,再與熒光蛋白以及熒光染料等標記物在細胞中的定位與表達技術相結合,使得科學家可以特異性的分辨生物體乃至細胞內部不同結構與成分,并且能夠在生命體和細胞仍具有活性的狀態下(狀態)對其功能進行動態觀察。這就使得熒光成像技術成為了無可替代的,生物學家現今較為重要的技術手段之一。目前,大多數細胞生物學和生理學研究主要還是在離體培養的細胞體系中研究。然而與細胞生物學研究有所不同的是,大腦的功能研究的整體性和原位性顯得更加關鍵:只研究分離的神經元無法解釋神經系統的功能和規律。由于被觀測的信號會受到樣本組織的散射和吸收,根本無法穿透如此深的組織進行成像。而雙光子顯微鏡(Two-photonMicroscopy,簡稱TPM)的發明,則為此類研究帶來了希望。雙光子顯微鏡特有的非線性光學特性,再加上其工作波長處在紅外區域等特點,令其在生物體組織內的穿透深度較大提高,使得雙光子顯微鏡成為神經科學家進行神經成像較理想的工具。雙光子顯微鏡品牌有哪些?
Denk很快就將雙光子顯微鏡用于神經元成像,而1997年在Svoboda測量完整老鼠大腦的錐體神經元的感官刺激誘導樹突鈣離子動態后,雙光子顯微鏡的潛能開始完全凸顯。值得一提的是,霍華德·休斯醫學院Svoboda實驗室和Thorlabs在2016年合作推出了一種強大的多光子介觀顯微鏡,其成像視場達到5毫米,能夠跨多個腦區進行高速功能成像。根據清華大學單一采購來源的**指導意見:這種顯微鏡的視場是普通雙光子顯微鏡的10倍。30年來,雙光子顯微鏡已成為較厚生物組織三維成像中不可或缺的工具。從雙光子到三光子甚至四光子,這種非線性成像技術通常也被統稱為多光子顯微鏡。下圖統計了自1990年以來每年發表的多光子顯微鏡文章數量,發展速度可見一斑。雙光子顯微鏡使用方法是什么?美國布魯克雙光子顯微鏡用途
雙光子顯微鏡有這么多優點,那么雙光子顯微鏡有哪些應用呢?進口ultimainvestigator雙光子顯微鏡成像視野一般是多少
和很多偉大的科學發明一樣,雙光子顯微鏡的出現也有一點偶然,但正是那瞬間的靈感為生物科學尤其是神經科學帶來了一種**性的成像技術:雙光子激發熒光顯微鏡。1990年初,當WinfriedDenk剛從康奈爾大學博士畢業準備前往瑞士讀博后時,他看了一本關于激光掃描顯微鏡的書,從中了解到非線性光學效應——強光和物質的相互作用。當時,Denk有同事研究生物樣品中的鈣離子但苦于沒有強大的紫外激光器和光學元件,于是他就想到如果使用雙光子吸收就能夠繞開紫外,換言之,與其通過一個紫外光子激發標記的鈣離子,通過兩個雙倍波長的可見光光子也能激發相同的熒光。有了想法后馬上實驗。借了一套染料飛秒激光器,Denk聯合他的導師WattWebb及其博士生JamesStrickler只用六個小時就完成了實驗搭建,采集數據則用了兩到三天,于是一篇里程碑式的文章就此誕生了。進口ultimainvestigator雙光子顯微鏡成像視野一般是多少
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