在該自適應光學雙光子熒光顯微鏡中,她們將空間光位相調制器光學共軛到顯微物鏡的后焦平面,通過位相調制器將入射光分成若干子區域,每一塊子區域的波前都可以被控制。同時,她們用數字微陣列光處理器,以不同的頻率同時調制其中一半子區域的入射光強度,以另一半子區域作為“參考波前”。來自所有子區域光束會在焦點處會聚干涉,通過監測焦點激發的雙光子信號隨時間的變化情況,并進行傅里葉變換分析,可以“分解”得到被調制的每一塊子區域的“光線”的貢獻信息,從而可以實現對一半子區域波前的并行測量。對另一半子區域重復這一測量過程,從而獲得整個入射波前的信息并進行校正。該方法耗時很短,通常約1~3分鐘左右即可完成像差的測量和校正,無需復雜的計算,適用于任何標記密度和標記類型的樣品。更重要的是,得到的像差校正圖案可以用于提高較大視場范圍內的成像質量。該方法無疑為在體研究小鼠大腦皮層深層區域的生物、醫學問題提供了可行性方案。雙光子顯微鏡能夠在細胞甚至是亞細胞水平上對神經細胞的形態結構、離子濃度、細胞運動、進行直接成像監測。國內ultima雙光子顯微鏡光損傷
利用鈣成像技術記錄大腦活動,隨著功能光學成像技術的發展,神經學家們已經可以研究腦區和神經元內部的工作情況。功能鈣成像技術就是其中之一,其主要原理是將外源性熒光信號和生理現象耦合起來——通過熒光染料信號的改變反映細胞內游離鈣離子濃度,以此細胞的功能狀態。目前它被廣泛應用于實時監測一群相關神經元內鈣離子的變化,從而判斷其功能活動。該技術的出現使得科學家可以親眼目睹神經信號在神經網絡之中時間和空間上的傳遞穿梭。國內熒光雙光子顯微鏡成像原理雙光子顯微鏡的基本原理是:在高光子密度的情況下,熒光分子可以同時吸收 2 個長波長的光子。
Denk很快就將雙光子顯微鏡用于神經元成像,而1997年在Svoboda測量完整老鼠大腦的錐體神經元的感官刺激誘導樹突鈣離子動態后,雙光子顯微鏡的潛能開始完全凸顯。值得一提的是,霍華德·休斯醫學院Svoboda實驗室和Thorlabs在2016年合作推出了一種強大的多光子介觀顯微鏡,其成像視場達到5毫米,能夠跨多個腦區進行高速功能成像。根據清華大學單一采購來源的**指導意見:這種顯微鏡的視場是普通雙光子顯微鏡的10倍。30年來,雙光子顯微鏡已成為較厚生物組織三維成像中不可或缺的工具。從雙光子到三光子甚至四光子,這種非線性成像技術通常也被統稱為多光子顯微鏡。自1990年以來每年發表的多光子顯微鏡文章數量,發展速度可見一斑。
雙光子顯微鏡為什么穿透能力強?生物組織在近紅外波段存在兩個窗口,第1個近紅外窗口對應波長在700nm-900nm,第2個近紅外窗口對應波長在1000nm-1400nm之間。舉例說明就是單晶硅對于可見光幾乎是不透明的,但是對于紅外波段就像是“水晶”一樣通透性很好了。原因有兩點:1.生物組織對紅外光的吸收弱,對可見光吸收強。類似的,平時用手電筒照射手指,會看到手通透紅亮,也是由于生物組織對長波長的紅光吸收少。2.生物組織對紅外光的散射弱。因為瑞利散射的強度反比于波長λ的四次方。類似的,早晨的太陽非常紅,也就是因為長波長的紅光穿透力更強。這兩點共同導致長波長的紅外光比可見光對生物組織的穿透能力強。雙光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為光源;
Denk很快就將雙光子顯微鏡用于神經元成像,而1997年在Svoboda測量完整老鼠大腦的錐體神經元的感官刺激誘導樹突鈣離子動態后,雙光子顯微鏡的潛能開始完全凸顯。值得一提的是,霍華德·休斯醫學院Svoboda實驗室和Thorlabs在2016年合作推出了一種強大的多光子介觀顯微鏡,其成像視場達到5毫米,能夠跨多個腦區進行高速功能成像。根據清華大學單一采購來源的**指導意見:這種顯微鏡的視場是普通雙光子顯微鏡的10倍。30年來,雙光子顯微鏡已成為較厚***生物組織三維成像中不可或缺的工具。從雙光子到三光子甚至四光子,這種非線性成像技術通常也被統稱為多光子顯微鏡。下圖統計了自1990年以來每年發表的多光子顯微鏡文章數量,發展速度可見一斑。雙光子顯微鏡使用方法是什么?ultima2PPLUS雙光子顯微鏡成像視野
雙光子顯微鏡廠家就找滔博生物。國內ultima雙光子顯微鏡光損傷
共聚焦顯微可以呈現這么漂亮的圖像,是不是什么樣品都可以用共聚焦顯微鏡拍拍拍.....得到各種各樣清晰漂亮的圖像呢?答案是否定的,任何事物都有優缺點,何況一臺儀器呢,共聚焦顯微鏡也是有自己的局限,共聚焦有哪些局限呢:1.共聚焦顯微鏡只能拍攝約200um以內的的樣品,對于厚的或者樣品不能進拍攝;2. 共聚焦顯微鏡由于是逐點進行掃描,對樣品的光毒性還是比較大的,特別是拍攝活細胞樣品時就更容易對樣品進行淬滅;3. 由于光照射的區域幾乎能通過這個Z軸的層面,所以對于空間定點光刺激的實驗定點位置就不是特別精確;并且激光共聚焦顯微鏡沒有純紫外進行激發,對于一些特殊激發波長的實驗,效率非常低。國內ultima雙光子顯微鏡光損傷