單細胞測序實驗的第一步是單細胞懸液的制備,而懸液制備中細胞計數的準確性直接影響單細胞測序的數據質量,但是關于細胞計數您真的了解嗎?
目前細胞計數主要使用臺盼藍染色法和雙熒光AO/PI染色法。
1)臺盼藍染色原理:臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色。而死細胞的細胞膜透性增高,可使染料進入細胞內而使細胞著色(藍色)。
2)雙熒光AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)可以通過完整的細胞膜,嵌入所有細胞(活細胞和死細胞)的細胞核,呈現綠色熒光;碘化丙啶(PI)只能通過不完整的細胞膜,即死細胞的細胞膜,嵌入所有死細胞的細胞核,呈現紅色熒光。
拓開細胞計數儀,擁有自動化,合規化,高通量等優勢,能夠幫助您在實驗室里高效率,高標準的完成細胞計數和細胞檢測等工作,是您細胞科研領域的強力伙伴。 細胞計數儀的費用是多少?浙江常規細胞計數儀代理商
黑點已經產生了,如何進行處理?
如果判定黑點是污染,請及時將細胞處理后丟棄。其他情況,可參照以下進行:如果是懸浮細胞:收集細胞上清慢速離心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更換新的培養瓶;如果是貼壁細胞:將細胞用PBS洗2-3遍,洗的時候,輕輕拍打培養瓶,讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落,再棄去PBS,消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右,讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來,去掉低濃度胰酶,然后正常消化細胞,將收集的細胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更換新的培養瓶,并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養。 內蒙古使用細胞計數儀細胞計數儀的實用性強嗎?
二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎?
二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。
使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么?
EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前,用EDTA清洗細胞,以消除來自培養基中所有的二價離子。
可否使用與原先不同的培養基?
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基,若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基,細胞大都無法立即適應,易造成細胞狀態不好,**終造成細胞無法存活。
活死細胞的鑒別方法
活細胞的鑒定在生物學和醫學上具有很重要的意義。細胞培養過程中要隨時記錄細胞的生長情況,需要經常測定細胞的存活率;在zhong瘤細胞的研究中,為了檢驗各種藥物對zhong瘤細胞的殺傷力,也需要測定zhong瘤細胞的存活率。在臨床醫學中死活細胞的鑒定也有很大的應用,例如為了檢測某一男子的生育能力,測定精子細胞的存活力是比較常用的辦法。死活細胞的鑒定方法有很多種,常用的有染色法和儀器分析法。染色法簡便,易于操作,但是通過直接的形態觀察來鑒別細胞死活,實驗結果很容易受操作者的主觀因素的影響,存在一定的誤差,所以,在實際操作中也常采用一些儀器來進行精確的批量檢測。 細胞計數儀的耗材貴嗎?
在各種細胞計數和活率分析方法中,臺盼藍染色細胞計數無疑是細胞活率分析的金標準。目前,通過臺盼藍染色分析細胞活率的方法包括:傳統的光學顯微鏡+血球計數板法,也有市場上很普遍的插片式半自動細胞計數儀,以及無需手動混勻和染色的全自動細胞計數和活率分析儀。
其中,后兩個分析儀器的出現,不僅很大程度地解放了人力,同時相比于顯微鏡+血球計數板法會更省時,更合規,所以被各大制藥企業所使用。而全自動細胞計數和活率分析儀更是在工藝開發和生產質控方面表現出特有的優勢,即減少了人為的操作誤差和提高了儀器間數據的一致性而廣受歡迎。 細胞計數儀應該怎么選擇?杭州細胞計數儀銷售廠
全自動細胞計數儀的識別原理。浙江常規細胞計數儀代理商
可否使用與原先不同的血清種類?
不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
細胞為何生長不均勻?
細胞傳代后放入培養箱沒有搖勻,或者放入時搖勻,但在細胞貼壁前,又移動了培養瓶,頻繁開關培養箱引起的振動或者培養瓶中培養液過少,培養箱擱板表面不平整,這些因素會導致細胞生長不均勻。 浙江常規細胞計數儀代理商
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