一般拿到細胞后,應該注意什么?
收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各兩張),排除細胞本身污染的情況。
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活死細胞的鑒別方法
活細胞的鑒定在生物學和醫學上具有很重要的意義。細胞培養過程中要隨時記錄細胞的生長情況,需要經常測定細胞的存活率;在zhong瘤細胞的研究中,為了檢驗各種藥物對zhong瘤細胞的殺傷力,也需要測定zhong瘤細胞的存活率。在臨床醫學中死活細胞的鑒定也有很大的應用,例如為了檢測某一男子的生育能力,測定精子細胞的存活力是比較常用的辦法。死活細胞的鑒定方法有很多種,常用的有染色法和儀器分析法。染色法簡便,易于操作,但是通過直接的形態觀察來鑒別細胞死活,實驗結果很容易受操作者的主觀因素的影響,存在一定的誤差,所以,在實際操作中也常采用一些儀器來進行精確的批量檢測。 金華新型細胞計數儀全自動細胞計數儀的壽命。
在各種細胞計數和活率分析方法中,臺盼藍染色細胞計數無疑是細胞活率分析的金標準。目前,通過臺盼藍染色分析細胞活率的方法包括:傳統的光學顯微鏡+血球計數板法,也有市場上很普遍的插片式半自動細胞計數儀,以及無需手動混勻和染色的全自動細胞計數和活率分析儀。
其中,后兩個分析儀器的出現,不僅很大程度地解放了人力,同時相比于顯微鏡+血球計數板法會更省時,更合規,所以被各大制藥企業所使用。而全自動細胞計數和活率分析儀更是在工藝開發和生產質控方面表現出特有的優勢,即減少了人為的操作誤差和提高了儀器間數據的一致性而廣受歡迎。
細胞傳代培養常見問題匯總
貼壁細胞如何進行傳代?
去掉原T25培養瓶里面的培養基,T25瓶加3-4mlPBS洗1-2次;棄PBS,再加1.5ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞,顯微鏡下觀察,待細胞變圓,細胞間隙明顯,部分細胞剛開始脫離瓶壁,加4ml左右完全培養液混勻終止消化,將細胞小心吹打下來,1000rpm/min室溫離心5min;棄上清,細胞沉淀用完全培養液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶補足培養基至5-6ml,37℃、5%CO2孵箱培養。 細胞計數儀是必備的儀器嗎?
細胞內有空泡,是否是正常現象?
部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2,Ishikawa及一些耐藥株等),這個是正常現象。如果只有少數細胞有內出現極少空泡,則很可能是細胞狀態不佳,可以通過調整血清濃度,控制消化,控制傳代比例及時間等方法來調整細胞狀態;如果大部分細胞出現空泡,且單個細胞內空泡數目偏多,則可能細胞代次較高,細胞老化所致,需更換代次較早的細胞。
細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因
很可能是培養體系不適合細胞(未使用推薦的培養體系);或者消化過度,對細胞有嚴重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞,傳代太稀;或者生長較快的細胞,傳代較密,細胞嚴重堆疊生長)。 細胞計數儀對比血球計數板。湖北標準細胞計數儀要多少錢
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臺盼藍染液是細胞活性染料,常用于檢測細胞膜的完整性。細胞損傷或死亡時,臺盼藍可穿透變性的細胞膜,與解體的DNA結合,使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內。故可以檢測細胞是否存活。
臺盼藍染色法的原理正常的活細胞,胞膜結構完整,能夠排斥臺盼藍,使之不能夠進入胞內;而喪失活性或細胞膜不完整的細胞,胞膜的通透性增加,可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失,即可認為細胞已經死亡,這與中性紅作用相反。因此,借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養中常用的死細胞鑒定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺盼藍拒染現象。臺盼藍染色后,通過顯微鏡下直接計數或顯微鏡下拍照后計數,就可以對細胞存活率進行比較精確的定量。 安徽有什么細胞計數儀銷售
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