單細胞測序實驗的第一步是單細胞懸液的制備,而懸液制備中細胞計數的準確性直接影響單細胞測序的數據質量,但是關于細胞計數您真的了解嗎?
目前細胞計數主要使用臺盼藍染色法和雙熒光AO/PI染色法。
1)臺盼藍染色原理:臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色。而死細胞的細胞膜透性增高,可使染料進入細胞內而使細胞著色(藍色)。
2)雙熒光AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)可以通過完整的細胞膜,嵌入所有細胞(活細胞和死細胞)的細胞核,呈現綠色熒光;碘化丙啶(PI)只能通過不完整的細胞膜,即死細胞的細胞膜,嵌入所有死細胞的細胞核,呈現紅色熒光。
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如何獲取高質量的細胞懸液,下面就帶您一步步***從組織到細胞懸液的旅程,讓細胞懸液制備不再成為困擾您的難題。
樣本準備
新鮮組織樣本是制備細胞懸液的首要條件,新鮮組織從***取下后,去除周圍的脂肪、結締組織或者壞死組織,用預冷的PBS或者生理鹽水沖洗干凈,快速轉移到解離實驗室進行細胞懸液制備,一般1個黃豆大小的組織量(200 mg)即可滿足一次組織解離。如果收集到新鮮樣本后無法立即進行懸液制備,可暫時用組織保存液4℃保存,盡快完成細胞懸液制備。 天津優勢細胞計數儀價格走勢全自動細胞計數儀如何選擇?
活死細胞的鑒別方法
活細胞的鑒定在生物學和醫學上具有很重要的意義。細胞培養過程中要隨時記錄細胞的生長情況,需要經常測定細胞的存活率;在zhong瘤細胞的研究中,為了檢驗各種藥物對zhong瘤細胞的殺傷力,也需要測定zhong瘤細胞的存活率。在臨床醫學中死活細胞的鑒定也有很大的應用,例如為了檢測某一男子的生育能力,測定精子細胞的存活力是比較常用的辦法。死活細胞的鑒定方法有很多種,常用的有染色法和儀器分析法。染色法簡便,易于操作,但是通過直接的形態觀察來鑒別細胞死活,實驗結果很容易受操作者的主觀因素的影響,存在一定的誤差,所以,在實際操作中也常采用一些儀器來進行精確的批量檢測。
一般拿到細胞后,應該注意什么?
收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各兩張),排除細胞本身污染的情況。
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細胞內有空泡,是否是正常現象?
部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2,Ishikawa及一些耐藥株等),這個是正常現象。如果只有少數細胞有內出現極少空泡,則很可能是細胞狀態不佳,可以通過調整血清濃度,控制消化,控制傳代比例及時間等方法來調整細胞狀態;如果大部分細胞出現空泡,且單個細胞內空泡數目偏多,則可能細胞代次較高,細胞老化所致,需更換代次較早的細胞。
細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因
很可能是培養體系不適合細胞(未使用推薦的培養體系);或者消化過度,對細胞有嚴重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞,傳代太稀;或者生長較快的細胞,傳代較密,細胞嚴重堆疊生長)。 全自動細胞計數儀的款式。天津優勢細胞計數儀價格走勢
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